2019年12月新发现的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）已被列为国际公共卫生紧急事件。核酸检测在确诊新型冠状病毒（2019-nCoV）感染中具有不可替代的作用，但由于其对实验室和技术人员要求高、操作繁琐以及存在“漏检”可能等，应联合特异性抗体对疑似患者和密切接触人群实现大规模批量筛查，且抗体的检测可降低医务人员在呼吸道标本采集过程中的暴露风险。

目的:评估国产一次性经口胆道镜在动物胆道镜检查中的有效性和安全性。方法:6头健康巴马小型猪分别于麻醉后行国产一次性经口胆道镜检查，评价其操作性能、图像质量并记录术中和术后并发症。结果:6例动物均完成国产一次性经口胆道镜检查。该胆道镜操作性能良好，能顺利通过十二指肠镜进入胆道，注水、吸引及器械通道通畅。胆道镜图像清晰、颜色分辨率良好，未出现图像变形及失真，可准确评估管腔内情况及清晰观察黏膜表面情况。检查过程中未产生出血、穿孔等操作性损伤，以及呼吸抑制、心脏骤停等不良事件。术后所有猪存活状态良好，无不良反应。结论:国产一次性经口胆道镜操作性能良好，图像质量高，安全性较好。

目的:探讨核因子-E2相关因子2（Nrf2）信号通路在亚砷酸钠（NaAsO 2）致人正常肝细胞（L-02细胞）氧化损伤过程中的作用，为砷致肝损伤的氧化损伤作用机制研究提供实验依据。 方法:体外培养L-02细胞，分别以0（对照）、25、50、75、100、125、150 μmol/L NaAsO 2处理细胞24 h，采用CCK8法检测细胞存活率；根据细胞存活率计算半抑制浓度（IC 50），分别以IC 50的0、1/8、1/4、1/2倍剂量NaAsO 2处理L-02细胞进行分组实验。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测L-02细胞中和细胞核内Nrf2信号通路相关因子Nrf2、血红素氧化酶-1（HO-1）、醌氧化还原酶1（NQO1）、谷胱甘肽过氧化物酶1（GPx1）的蛋白表达情况。 结果:CCK8实验结果显示，25、50、75、100、125、150 μmol/L NaAsO 2组的L-02细胞存活率[（69.53 ± 0.06）%、（41.33 ± 0.08）%、（23.65 ± 0.04）%、（26.51 ± 0.04）%、（31.63 ± 0.01）%、（26.24 ± 0.02）%]明显低于对照组[（100.00 ± 0.00）%， P均< 0.05]；细胞存活率的IC 50为40 μmol/L，分组实验的NaAsO 2剂量分别采用0（对照）、5、10、20 μmol/L。Western blot检测结果显示，与对照组比较，5、10、20 μmol/L NaAsO 2组L-02细胞中Nrf2、HO-1及L-02细胞核内HO-1蛋白水平显著升高（ P均< 0.05）；10、20 μmol/L NaAsO 2组L-02细胞中GPx1蛋白水平显著降低（ P均< 0.05），L-02细胞核内Nrf2蛋白水平显著升高（ P均< 0.05）；5 μmol/L NaAsO 2组L-02细胞核内NQO1蛋白水平显著升高（ P < 0.05）。 结论:NaAsO 2对L-02细胞中Nrf2信号通路相关因子的表达有影响，其致L-02细胞氧化损伤的作用机制可能与Nrf2信号通路有关。

目的:研究活体骨内血管显像方法，分析其临床意义，补充相关骨科疾患诊治依据。方法:通过改进显影剂来增加局部浓度实现显影，以Lijianmin-Chengkun（LC）复合通路研究为基础，利用磁性微球理论，使用外壳为氨基（携负电荷）的Fe 3O 4磁性微球，吸附聚集离子型显影剂泛影葡胺（泛影酸根携正电荷），即通过改进显影剂的方法，使磁性微球携带显影剂，制成新的纳米粒子-磁影复合微粒，在外界磁场作用下，血液循环带来的磁影复合微粒不断在磁场区域血管内滞留聚集，磁场区域血管内磁性微球携带的显影剂浓聚达到显像浓度，实现活体骨内血管显像。并且通过调整两种试剂配比，可适度中和电荷凝结成小的集团，提高显影效率。由此分步进行了电镜实验、CT活体实验兔成像实验、实验兔组织学检查证实、CT活体人体成像试验。 结果:电镜实验：泛影葡胺，扫描电镜，微粒直径约20 nm。氨基Fe 3O 4磁性微球，扫描电镜，微粒直径约100 nm，分布较疏散均匀。两种试剂按一定比例混合后，中和电荷凝结成小的集团，但仍具备磁流体性能、强顺磁性。活体实验兔成像实验:捕捉到了理想的胫骨近端骨内血管成像。实验兔组织学检查证实:有磁场一侧胫骨近端内血管明显可见四氧化三铁分布，无磁场一侧未见。活体人体成像试验：捕捉到了理想的腓骨近端骨内血管成像。 结论:通过磁影复合微粒（磁性微球+泛影葡胺）新试剂的制作，在外界磁场作用下，达到活体骨内显影剂浓聚，在CT薄层扫描下可实现活体外径≥0.5 mm骨内血管成像。

目的:比较利用AS01和Al/CpG联合佐剂，水痘带状疱疹病毒糖蛋白E(Varicella Zoster virus glycoprotein E，VZV gE)在BALB/c小鼠体内的免疫效果。方法:BALB/c小鼠分别于0和21天免疫，小鼠血清抗体检测采用酶联免疫吸附实验；用VZV检测小鼠血清中和抗体滴度；酶联免疫吸附斑点实验检测细胞免疫反应。结果:经过2次肌肉注射免疫，实验组(Shingrix、gE＋Al/CpG和gE＋AS01)中小鼠均能产生高滴度的中和抗体，增加分泌IFN-γ和IL-4的淋巴细胞数量。gE＋Al/CpG免疫组中小鼠产生的中和抗体滴度最高(1943)，但是AS01佐剂组(Shingrix和gE＋AS01)中小鼠产生的分泌IFN-γ和IL-4的淋巴细胞数量高于Al/CpG佐剂组(gE＋Al/CpG)。相比于AS01佐剂，Al/CpG佐剂诱导小鼠产生了偏向Th2型的体液免疫应答。各实验组中小鼠CD4 ＋T细胞、CD8 ＋T细胞的比例均没有统计学差异。 结论:Al/CpG佐剂联合gE蛋白诱导高滴度中和抗体，但是诱导产生的细胞免疫应答强度低于AS01佐剂组。

目的:探讨肿瘤内皮细胞(TECs)来源CXC趋化因子配体8(CXCL8)在肝细胞癌(HCC)血管生成拟态(VM)中的作用。方法:收集2018年9月到2019年9月在北京朝阳医院行手术切除的HCC组织，免疫磁珠法分离TECs；慢病毒感染TECs，敲低其CXCL8表达，分为对照组和敲低组，收集其条件培养基；酶联免疫吸附试验检测TECs条件培养基中CXCL8的表达；小管形成实验观察HCC细胞VM；蛋白质印迹法观察HCC细胞中相关蛋白水平变化。组间比较采用独立样本 t检验或单因素方差分析。 结果:TECs敲低组中CXCL8蛋白表达水平较对照组明显降低。对照组条件培养基中CXCL8水平[(1 076.00±88.80) pg/ml]较敲低组明显升高[(787.50±63.43) pg/ml]，差异有统计学意义( t＝5.920， P<0.01)。对照组和敲低组条件培养基处理HepG2细胞后相对小管长度分别为(9 814.0±692.8)和(6 434.0±1272.0)，差异有统计学意义( t＝4.042， P<0.05)；在SMMC7721细胞中，对照组和敲低组分别为(22 317.0±3 121.0)和(9 834.0±1 534.0)，差异有统计学意义( t＝6.217， P<0.01)。CXC趋化因子受体1(CXCR1)中和性抗体预处理HCC细胞后，TECs促进HCC细胞的VM能力减弱。对照组条件培养基较敲低组明显促进HCC细胞中波形蛋白(Vimentin)和Snail的表达。HepG2细胞中Vimentin的表达量为0.178±0.020和0.094±0.023( t＝4.707， P<0.01)，Snail的表达量为0.273±0.020和0.188±0.033( t＝3.755， P<0.05)；SMMC7721细胞中Vimentin的表达量为0.342±0.020和0.242±0.035( t＝4.270， P<0.05)，Snail的表达量为0.189±0.014和0.139±0.021( t＝3.354， P<0.05)。 结论:TECs通过旁分泌CXCL8方式结合HCC细胞表面CXCR1，调节上皮-间充质转化(EMT)来促进HCC细胞VM。

目的:构建表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒。方法:设计携带酶切位点和无酶切位点的两对引物以扩增ccdBKan目的片段。分别将ccdBKan与质粒pBR322-Ad4-eGFP共转至电转感受态GB08red-gyr462构建两种表达ccdBKan基因的重组Ad4质粒。利用ccdB正反筛选系统与ExoCET/Red重组结合将HPV16E7基因插入Ad4的E1A区，构建表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒pBR322-Ad4-E1Amut-C16E7P，经酶切、测序验证。提取质粒pBR322-Ad4-EIAmut-C16E7P释放基因组，转染293T细胞以包装和扩增病毒，用病毒感染293T细胞，检测HPV16 E7基因在细胞内的转录水平和蛋白表达。重组病毒经肌肉接种BALB/C裸鼠，收集小鼠血清用于病毒中和实验。结果:成功构建表达HPV16 E7基因的重组腺病毒质粒，并在293T细胞中成功包装出重组病毒。qRT-PCR和Western blotting验证了重组病毒HPV16 E7基因的成功表达，病毒中和实验结果提示经重组病毒免疫后的小鼠血清能够中和Ad4-HPV16E7。结论:成功构建了表达HPV16 E7基因的重组腺病毒株，为进一步研究HPV16 E7在癌症发病机制中的作用以及HPV感染相关癌症的治疗方法提供新的思路和依据，并且可能为HPV治疗性疫苗的研究探索提供了一种潜在策略。

目的:评估新型冠状病毒灭活疫苗免疫人群和小鼠血清对变异株(Delta株和Beta株)的交叉中和活性。方法:各取20份人群常规两剂基础免疫血清、三剂加强免疫血清和两剂小鼠免疫血清作为实验材料，采用新型冠状病毒原型株、Delta和Beta变异株3株病毒，在生物安全三级实验室中采用微量中和试验检测中和抗体。通过分析不同稀释度血清对固定剂量病毒的中和活性，计算血清阳性率和抗体几何平均滴度(geometric mean titer, GMT)，评估免疫血清的交叉中和水平。结果:人免疫血清对不同变异株的阳性率均大于95%；基础免疫后，接种者血清对原型株、Delta和Beta变异株的中和抗体GMT分别为109、41和15，与原型株比较，针对Delta和Beta变异株的中和抗体GMT分别下降2.7倍和7.3倍；加强免疫后，接种者血清对原型株、Delta和Beta株的中和抗体GMT分别为446、190和86，与原型株比较，针对Delta和Beta变异株的中和抗体GMT分别下降2.3倍和5.2倍。小鼠免疫血清对不同变异株的阳性率均为100%；对原型株、Delta和Beta变异株的中和抗体GMT分别为2 037、862和408，与原型株比较，针对Delta和Beta变异株的中和抗体GMT分别下降2.4倍和5.0倍。结论:新型冠状病毒灭活疫苗免疫后的人群和小鼠血清均可对Delta和Beta变异株产生一定水平的中和保护，且人群加强免疫后可产生更高水平的中和抗体和交叉中和抗体，为该疫苗的临床应用和保护效果评估提供了重要参考。

目的:构建共表达P1和3CD的重组杆状病毒，利用昆虫细胞重组表达2型脊髓灰质炎病毒(poliovirus type 2，PV2)的病毒样颗粒(virus-like particle, VLP)，制备PV2-VLP进行初步免疫原性研究。方法:基于粉纹夜蛾细胞(High 5)密码子偏好性，将PV2的P1基因和3CD基因进行序列优化，并对P1基因进行稳定性突变，构建突变型rBac-PV2-P1s-3CD和野生型rBac-PV2-P1-3CD杆状病毒。Western blot分别检测目的蛋白表达量，离子交换层析纯化PV2-VLP，透射电镜观察VLP高级结构确定组装效率。免疫大鼠评估免疫原性。结果:成功构建了可稳定表达P1s蛋白和3CD蛋白的重组杆状病毒。Western blot结果表明热稳定性突变后VLP产量相比野生型有所提高。电镜观察发现直径约30 nm的三维结构，表明VLP成功组装。动物实验结果表明，重组制备的PV2-VLP具有免疫原性，且能有效刺激产生中和抗体。结论:用昆虫细胞-杆状病毒表达系统可成功制备有效的VLP类疫苗，为PV-VLP疫苗的研制提供参考。

目的:制备针对呼吸道合胞病毒(RSV) N蛋白的兔多克隆抗体，以其作为检测抗体建立基于ELISA的快速中和抗体检测方法。方法:构建pET30a-N质粒，表达纯化N蛋白，免疫新西兰兔制备针对RSV N蛋白的多克隆抗体作为检测抗体。阳性血清系列稀释后与100半数组织培养感染剂量(TCID 50)/孔的RSV中和，接种Hep-2细胞培养，80%丙酮固定细胞，ELISA方法检测感染细胞中病毒的N蛋白，当每孔的吸光度值低于临界值时，视为中和试验阳性孔，阳性孔血清的最高稀释度为该血清的中和抗体滴度。优化抗体稀释度、检测时间、细胞密度及中和时间，建立基于N-ELISA的中和抗体检测方法，对建立的实验方法进行细胞代次、边缘孔效应、准确性、重复性以及精密度验证，初步应用于人RSV IgG阳性血清检测，分析与微量中和法的相关性。 结果:成功构建出pET30a-N质粒，表达纯化的N蛋白纯度较高，特异性良好；三免后兔血清效价为1∶51 200，可特异性结合RSV；制备的抗RSV N兔多抗的效价为1∶51 200，特异性良好，建立的快速中和抗体检测方法在4 d就可检测，中和时间可缩短至30 min，细胞代次、96孔板位置(边缘孔和非边缘孔)对该方法检测无影响，重复性、精密性、准确度良好，建立的方法和微量中和法检测64份RSV IgG阳性人血清，相关系数为0.929 6，证明两种方法具有良好的正相关性。结论:成功建立基于ELISA的快速中和抗体检测方法，可用于评价RSV疫苗接种后的血清抗体水平。