目的 基于经皮吸收成分探究中药育发凝胶对雄激素性脱发(androgenetic alopecia,AGA)小鼠的药效物质基础及作用机制.方法 采用涂抹丙酸睾酮建立AGA小鼠模型,涂抹中药育发凝胶进行治疗,观察小鼠毛发的生长情况;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察毛囊状态和真皮厚度;ELISA检测小鼠皮肤组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量.UPLC-QTOF-MS定性分析中药育发凝胶提取液化学成分、经皮入血成分和皮肤滞留成分.采用网络药理学和分子对接预测中药育发凝胶治疗AGA小鼠的潜在作用机制;采用Western blotting检测小鼠皮肤组织中雄激素受体(androgen receptor,AR)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2 相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达,验证网络药理学预测的关键靶点.结果 与对照组比较,模型组小鼠毛囊数减少且毛发生长缓慢,说明模型建立成功;与模型组比较,中药育发凝胶高剂量组小鼠新生毛发区毛囊和真皮厚度增加(P＜0.01、0.001),皮肤组织中TGF-β1、TNF-α和IL-6 水平显著降低(P＜0.05、0.001).共鉴定出中药育发凝胶提取液中 76 种成分,皮肤滞留成分30 种,经皮入血成分 7 种;基于经皮吸收成分共得到成分靶点 481 个、疾病靶点 236 个、共同靶点 41 个,核心靶点包括蛋白激酶B(protein kinase B1,AKT1)、连环蛋白 1(catenin beta 1,CTNNB1)、TNF等,基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析共 375 个条目,京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集通路共 117 条.与模型组比较,中药育发凝胶组小鼠皮肤组织中AR、Caspase-3、Bax蛋白表达水平显著降低(P＜0.05、0.001),Bax/Bcl-2值显著降低(P＜0.001).结论 初步揭示了中药育发凝胶对AGA小鼠的经皮吸收成分和作用机制,为其临床应用提供了理论参考.

目的:研究经皮给予制川乌-白芍药对后,配伍药对大鼠皮肤、肝脏药物代谢酶的影响,以探讨制川乌-白芍药对的配伍机制.方法:大鼠连续经皮给药制川乌、白芍、制川乌与白芍配伍凝胶剂14d后,采用探针底物与皮肤、肝微粒体体外孵育,通过高效液相色谱法(HPLC)检测皮肤微粒体中1种探针底物及肝微粒体中4种探针底物的浓度,计算代谢速率,考察各给药组大鼠皮肤、肝微粒体CYP450酶活性的变化.结果:与空白组比较,白芍、制川乌对大鼠皮肤微粒体中的CYP3A4酶具有明显的抑制作用(P＜0.05);与白芍单用组比较,制川乌与白芍配伍给药使大鼠皮肤微粒体中的CYP3A4酶活性显著下降(P＜0.05);与制川乌组比较,制川乌与白芍配伍给药使大鼠皮肤中微粒体的CYP3A4酶的活性显著增加(P＜0.05).与空白组比较,白芍、制川乌对大鼠肝微粒体中的CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6酶都具有明显的抑制作用(P＜0.05);与制川乌组、白芍组比较,制川乌与白芍配伍使大鼠肝微粒体中CYP3A4、CYP1 A2、CYP2E1、CYP2D6酶活性均明显增加(P＜0.05).结论:制川乌、白芍均为CYP3A4、CYP1 A2、CYP2E1、CYP2D6药酶的抑制剂,两药配伍可引起大鼠皮肤、肝微粒体中药酶活性的改变而致活性成分的代谢速度改变,这可能是制川乌与白芍配伍发挥“增效减毒”的作用机制之一.

目的 弓形虫(TOX)感染与男性不育有关,精子DNA完整性是反映男性生育能力的重要标志物,本文探讨TOX感染对人精液参数和精子DNA完整性的影响.方法 选择2014年7月-2016年5月在浙江中药大学附属宁波中医院男科就诊的不育患者156例,根据抗弓形虫抗体结果分为TOX-IGG阳性组、TOX-IGM阳性组、其他感染组和未发生感染组;选择同期健康男性作为对照组.分析各组精液质量参数和精子DNA碎片化指数[DFI(％)]的差异.精子浓度及活力用计算机辅助精子分析系统,精子存活率采用低渗膨胀实验,精子形态用Diff-Quick法,精子DFI用单细胞凝胶电泳(SCGE)法.结果 各不育组精液质量参数与对照组比较差异均有统计学意义(P ＜0.05);TOX感染不育组前向运动精子较未发生感染不育组明显减少(P＜0.05).TOX感染不育组各DFI较对照组差异均有统计学意义(P＜0.05);较未发生感染不育组轻度DFI差异无统计学意义(P＞0.05),重度和总DFI差异均有统计学意义(P＜0.05);较其他感染不育组各DFI差异均无统计学意义(P＞0.05).TOX-IGM阳性不育组较TOX-IGG阳性不育组重度和总的DFI显著增多(P＜0.01).结论 TOX感染可影响人类精液参数和损伤精子DNA的完整性,并且新近感染损伤程度大于既往感染.

比较两种荧光探针异硫氰酸荧光素FITC和Cy5标记鹿茸提取物PAEs的最佳方法.用FITC和Cy5分别标记PAEs得到标记物FITC-PAEs和Cy5-PAEs;用SDS-PAGE凝胶电泳检测并比较两种荧光染料标记蛋白分子量的差异;用酶标仪检测在特定波长处OD值计算其标记率;用PC12细胞验证两种荧光染料的生物安全性;将荧光标记物分别与人工胃液和人工肠液共孵育,观察它们在其中的稳定性.结果表明,两种荧光染料标记PAEs蛋白分子量并无明显差异,但FITC-PAEs荧光强度稍强.通过计算标记率表明两种荧光染料均可充分标记PAEs,但Cy5价格昂贵.相比于FITC-PAEs,Cy5-PAEs在人工胃液和人工肠液中稳定性较差.因此,我们选择标记率高,在人工胃液和人工肠液中较为稳定且对机体无毒副作用,价格合理的FITC荧光染料标记PAEs并用于后续实验研究.这为建立蛋白类中药大分子的活性示踪方法,开发口服蛋白类药物奠定基础.