为建立云南红豆杉(Taxus yunnanensis)中10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)和紫杉醇(Taxol)的分析方法,该研究采用基质固相萃取-高效液相色谱分析(MSPD-HPLC)对云南红豆杉中的 10-DAB Ⅲ及Taxol进行定量分析,探究硅胶、佛罗里硅土、酸性氧化铝、中性氧化铝、碱性氧化铝、C18、C18-ME、C18-G1、C18-HC、Diol、Xamide、Xion共12 种样品预处理分散剂及各种分散剂的质量、洗脱剂的种类、洗脱剂的浓度、洗脱剂体积对两种成分分析的影响,并对优化后的条件进行方法学验证,同时与超声提取、热回流提取预处理方法进行比较分析证明其有效性.结果表明:(1)12 种固相分散剂中,碱性氧化铝具有良好的目标化合物萃取物检出量,并且当碱性氧化铝与样品的质量比为 3∶1、6mL甲醇为洗脱剂洗脱时,10-DAB Ⅲ和Taxol的萃取检出量较高.(2)建立的云南红豆杉枝叶中 10-DAB Ⅲ和 Taxol 的分析方法具有良好的线性关系(r≥0.999 9),10-DAB Ⅲ和Taxol的检出限和定量限分别介于 0.023 9～0.030 1 μg·mL-1和 0.142～0.178 μg·mL-1之间;各目标分析物平均加样回收率在 93.6%～109.0%之间.(3)比较分析显示,3 种方法对 2 种紫杉烷类化合物的萃取检出量基本无差别,但MSPD法溶剂消耗少、操作简单,分析时间短,净化效率高,可应用于云南红豆杉原料的快速分析.该研究以碱性氧化铝为分散剂应用于云南红豆杉紫杉烷类化合物的萃取,建立了快速、高效的云南红豆杉中10-DABⅢ和紫杉醇的分析方法,为云南红豆杉中的紫杉烷类化合物的定量分析提供了依据.

为了掌握红豆杉研究领域的热点问题及发展趋势,将2010年1月1日～2022年10月31日CNKI数据库中1604篇文献作为原始数据,通过Citespace可视化软件及文献计量学方法,对红豆杉领域年度发文量、研究机构、主要发文作者、关键词进行分析,得出以下结论:红豆杉研究自2010年开始经历了3个阶段,即快速发展期、快速衰退期、稳定减少期.明溪县林业局、云南省林业科学院、东北林业大学森林植物生态学教育部重点实验室和中国林业科学研究院资源昆虫研究所是主要的研究机构,在该领域占据重要地位,各机构位置分散,缺乏密切合作,因此机构的跨区域交流仍需加强.欧建德、刘彤、吴志庄、张恺恺、陈段芬为探究红豆杉做出突出贡献,发文质量较高.生态保护与医用价值仍将是红豆杉研究领域的热点问题,观赏价值、经济价值与食用价值的开发可能会成为该领域未来的关注重点.

红豆杉属植物是国际珍稀濒危灭绝保护植物和国家一级保护植物.由于可分离得到具有显著抗肿瘤活性的药物紫杉醇, 红豆杉属植物倍受关注, 成为天然药物的研究热点.但该属植物种子具有深度休眠, 自然条件下要经过两冬一夏才能萌发, 繁殖率低, 这也是导致其物种濒临灭绝的原因.简要综述了我国的红豆杉属植物种子休眠机制及其休眠解除的研究进展, 并对今后的研究重点和发展趋势进行展望.

为研究云南红豆杉10-DAB的累积规律及单株10-DAB累积量,采用HPLC法测定不同海拔、不同生长时期、不同采收期的云南红豆杉枝叶中10-DAB含量,同时测定枝叶生物量.结果显示:红豆杉中10-DAB累积受季节影响显著,从4月份到10月份呈现逐渐递增趋势,10月份10-DAB累积达到最高,之后呈下降趋势;生长年限为2年时,其10-DAB累积最高,且与3、4、5年相比具有显著差异(P＜0.05),之后随生长年限增加10-DAB累积逐年下降;10-DAB累积在海拔(900±50)m以下无显著性差异(P＞0.05),高于(900±50) rn后随海拔增加而降低,且与(500±50)m相比有极显著性差异(P＜0.01);生长年限相较于海拔,权重占比更大,对10-DAB的累积影响更大;从单株10-DAB累积量来看,海拔高于900 m,单株枝叶10-DAB累积量随海拔升高而呈下降趋势;3年生单株枝叶10-DAB累积量大于2、4和5年生,单株10-DAB累积量最高可达0.697±0.026 g.本研究表明,生长年限、季节、海拔、生物量均显著影响云南红豆杉单株10-DAB累积量,适宜种植云南红豆杉10-DAB药用原料林的最佳海拔范围应在500-900 m,最佳采收生长年限为第3-4年,采收季节10月份;结果可为云南红豆杉最佳生长条件的选择及科学采收提供理论依据.

目的 基于细胞捕获建立两种药物活性成分筛选方法,中空纤维细胞捕获(HFCF-HPLC)和细胞捕获-分散液相微萃取结合高效液相色谱法(CF-DLLME-HPLC),用于筛选红豆杉抗肿瘤(A549细胞)活性成分群. 方法 HFCF-HPLC是将A549细胞种植到聚丙烯中空纤维管腔内部,再将该中空纤维放入红豆杉提取液,在模拟人体内环境状态下,筛选和捕获与细胞结合的生物活性成分群;CF-DLLME-HPLC是在细胞正常代谢的基础上,A549细胞与红豆杉提取液共孵育,取不同孵育时间上清液进行液相微萃取处理,然后进行色谱分析比对,根据色谱峰变化发现潜在活性成分群. 结果 HFCF-HPLC筛选出的是脱乙酰巴卡亭、去乙酰紫杉醇、紫杉醇;CF-DLLME-HPLC筛选出的是去乙酰紫杉醇、三尖杉宁碱、紫杉醇、云南紫杉烷. 结论 两种方法可以筛选出有效的抗肿瘤活性成分群,是快捷高效的中药药效质量评价方法.

基于野外15个群落样方物种调查,对珠穆朗玛峰国家级自然保护区密叶红豆杉(Taxus contorta Grif-fith)所在群落的结构、物种多样性、区系地理成分及密叶红豆杉的年龄结构进行研究.结果显示:(1)调查样地内共有维管植物53科116属154种,以蔷薇科、毛茛科、菊科、百合科等占优势;在科、属级区系分析中,热带成分分别占46.2％、18.0％,温带成分分别占53.8％、82.0％.(2)密叶红豆杉所在群落的建群种分别为乔松(Pinus wallichiana A.B.Jackson)、云南铁杉(Tsuga dumosa(D.Don)Eichler)和喜马拉雅冷杉(Abies spectabilis(D.Don)Spach),密叶红豆杉为下层乔木的重要伴生成分或优势成分.(3)从各群落内部比较来看,草本层的Margalef指数和Simpson指数在3个群落中都最高,说明群落的草本层物种多样性最丰富,数量也最多;从群落间比较来看,乔松林灌木层和草本层的Margalef指数最高,乔木层的最低.(4)在3种群落中密叶红豆杉数量都呈增长趋势,且幼苗库较充足,在云南铁杉林和喜马拉雅冷杉林中,密叶红豆杉从幼苗到幼树的生长过程经历了较强的环境筛选.

目的:建立一种新型的药物活性成分筛选方法,用于筛选红豆杉抗肿瘤活性成分群.方法:在细胞正常代谢的基础上,对不同时间段、不同细胞模型的细胞上清液进行液相微萃取处理,对其中的活性成分群进行有效检测,根据色谱峰变化发现潜在活性成分群.将MCF-7、A549细胞作为活性筛选的平台,在细胞自然吸收状态下,以红豆杉提取物为研究对象,对中药材中的活性成分群进行筛选和捕获,而后进行HPLC分析.结果:成功筛选出红豆杉中的抗肿瘤活性成分群分别是脱乙酰巴卡亭、巴卡亭Ⅲ、紫杉碱、去乙酰紫杉醇、三尖杉宁碱、紫杉醇、金松双黄酮、云南紫杉烷.结论:本研究试图为活性成分的筛选、中药质量的综合评价提供一种方便、普适和高效的新方法,为中药药效物质基础研究提供理论基础和实验依据.

目的 基于中药整体性建立2种红豆杉抗乳腺癌活性成分筛选方法:中空纤维细胞捕获结合高效液相色谱法(HFCF-HPLC)、细胞捕获-分散液相微萃取结合高效液相色谱法(CF-DLLME-HPLC).方法 HFCF-HPLC是在模拟人体内环境状态下,将人乳腺癌MCF-7细胞种植到聚丙烯中空纤维管腔内部,再将该中空纤维放入红豆杉提取液中,筛选和捕获可以与细胞结合的抗乳腺癌活性成分群;CF-DLLME-HPLC是将MCF-7细胞与红豆杉提取液在细胞正常代谢的基础上共孵育,取不同孵育时间上清液进行分散液相微萃取处理,然后进行不同时间段下色谱分析比对,根据色谱峰变化发现潜在抗乳腺癌活性成分群.结果 HFCF-HPLC筛选出的活性成分是脱乙酰巴卡亭、巴卡亭Ⅲ、紫杉碱M、去乙酰紫杉醇、三尖杉宁碱、紫杉醇、云南紫杉烷;CF-DLLME-HPLC筛选出的活性成分是脱乙酰巴卡亭、巴卡亭Ⅲ、紫杉碱M、去乙酰紫杉醇、金松双黄酮.结论 2种方法均可以筛选出有效的抗肿瘤活性成分群,为活性成分的筛选、中药质量的综合评价提供一种方便、普适和高效的新方法.

目的 分析和比较5种红豆杉中6种紫杉烷类化合物含量的差异.方法 利用乙醇超声浸提后得到样品溶液;通过高效液相色谱法测定和相关性分析、回归分析和聚类分析比较紫杉醇、巴卡亭Ⅲ、10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-deacetylbaccatinⅢ,10-DAB)、10-去乙酰基紫杉醇(10-deacetyltaxol,10-DAT)、三尖杉宁碱和10-去乙酰基-7-木糖基紫杉醇(10-deacetyl-7-xylosetaxol,DXT)含量.结果 不同种红豆杉紫杉烷含量存在显著性差异,陇南地区中国红豆杉中10-DAB、紫杉醇、10-DAT和三尖杉宁碱含量显著高于其他种红豆杉,曼地亚红豆杉和湖南省南方红豆杉中10-DAB含量也相对较高;相关性分析、回归分析及聚类分析均表明,10-DAT和三尖杉宁碱与紫杉醇含量显著相关,且前者比后者对紫杉醇含量的影响作用更大;聚类分析还表明温室内栽植的南方红豆杉聚为一类,大田种植的中国红豆杉、东北红豆杉、太行山地区南方红豆杉和曼地亚红豆杉聚为一类,表明环境因子对紫杉烷积累具有明显影响.结论 不同种红豆杉中紫杉烷含量具有显著差异,种类是影响红豆杉紫杉醇等紫杉烷含量的重要因素,紫杉醇含量随着10-DAT和三尖杉宁碱含量增加而增加.

云南红豆杉(Taxus yunnanensis W.C.Cheng&L.K.Fu)是红豆杉属植物中紫杉醇含量最高的树种,同时也是我国红豆杉属中分布最广和资源蕴藏量最丰富的物种.然而,近年来由于人为大量砍伐,云南红豆杉野生资源遭到严重破坏,加上生长缓慢且天然更新困难,目前处于濒危状态.对云南红豆杉天然资源的保护和药用人工林的培育对于云南红豆杉资源的可持续利用具有重要的意义.对云南红豆杉资源分布现状及种群和繁殖生态学等方面的研究进行综述,发现云南红豆杉的濒危是由其自身繁殖机制引起的天然更新困难、对环境的适应能力较低以及人为因素共同导致的.同时从紫杉醇含量的影响因素及获取方式、人工药用林培育方面总结了云南红豆杉的开发利用现状,发现云南红豆杉中紫杉醇的含量受其自身特性及外在因素的综合影响;包含紫杉醇在内的紫杉烷类物质目前主要通过直接提取和半合成两种方式获取;此外在全合成、组织或细胞培养及真菌诱导等方式上也有了新的研究进展.最后,建议从就地保护、迁地保护及引种回归3个方面对云南红豆杉天然资源进行综合保护,同时大力推进紫杉烷工业化合成方式的研究和云南红豆杉人工药用原料林的培育,提高云南红豆杉的资源利用效率,在保护云南红豆杉天然林的同时实现资源的合理利用.