目的 筛选中药黄芩中血管紧张素转换酶2(ACE2)和二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂.方法 以ACE2和DPP-4作为靶蛋白,利用受体配体亲和超滤和液质联用技术,对黄芩中与ACE2和DPP-4亲和的化合物进行筛选和分析,以筛选具有同时抑制ACE2和DPP-4的化合物.结果 从黄芩中筛选出了 5,7,2',6'-4羟基黄酮、5,7,2',5'-4羟基.8,6'-二甲氧基黄酮、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩素-6-O-葡萄糖醛酸苷、千层纸素A-7-O-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、白杨素、千层纸素A,可以同时亲和抑制ACE2和DPP-4,具有潜在的抗新型冠状病毒的作用.结论 从黄芩中筛选出与新型冠状病毒肺炎有关的靶蛋白抑制剂,具备潜在开发价值.

目的:探讨放射性同位素示踪技术在生物药临床研究中的应用价值。方法:对3名健康志愿者静脉滴注 131I标记的国际一类新药美珀珠单抗，通过测定14 d内不同时间点血样与尿样的放射性浓度，评价美珀珠单抗在健康人体内的药代动力学性质（试验1）。对6名健康志愿者静脉注射 68Ga标记的核酸适配体Sgc8，分别于不同时间点行正电子发射型计算机断层显像（PET/CT），通过测定不同器官对 68Ga Sgc8的标准摄取值，评价 68Ga-Sgc8在健康人体内的生物学分布（试验2）。对9例疑似神经内分泌瘤患者静脉注射 99mTc奥曲肽，4 h后行单光子发射和X线计算机断层扫描（SPECT/CT），测定感兴趣区放射性摄取水平；结合患者活检组织生长抑素受体亚型2（SSTR2）免疫组化染色结果，评价 99mTc-奥曲肽对SSTR2的亲和性和靶向性（试验3）。 结果:纳入试验1的3名健康志愿者均为男性，年龄分别为28、45和25岁； 131I-美珀珠单抗注射剂量分别为21.0、25.9和17.6 mg，放射性活度分别为364、420和304 MBq。纳入试验2的6名健康志愿者中男性和女性各3名，年龄（46±11）岁，范围35~63岁；放射性活度为（80±7）MBq，范围69~87 MBq。纳入试验3的9例疑似神经内分泌瘤患者中男性5例、女性4例，年龄（54±10）岁，范围39~69岁；放射性活度为（777±74）MBq，范围740~ 925 MBq。静脉滴注 131I-美珀珠单抗后，受试者血液放射性浓度在1.5 h达峰值， 131I-美珀珠单抗主要与血细胞结合，其全血清除半衰期为420 h；尿液放射性浓度在16~24 h达峰值，24 h后逐渐降低。静脉注射 68Ga-Sgc8后即刻放射性信号由强至弱的器官依次为膀胱、肾脏、心脏、子宫、肝脏、脾脏、胆囊、大肠和肺；注射药物后3 h内心脏的清除速率最快，子宫、肾脏和肝脏次之，脾脏和胆囊的清除速率较慢，大肠和肺的清除速率最慢。9例患者静脉注射 99mTc-奥曲肽后4 h体内均有放射性异常浓聚，免疫组化染色结果示SSTR2呈强阳性表达，表明 99mTc-奥曲肽对SSTR2有良好的亲和性和靶向性。安全性测试结果显示，试验1中1名受试者静脉滴注 131I-美珀珠单抗后1个月出现碘相关甲状腺功能亢进，无干预持续监测8个月后恢复正常；其余受试者均未发生不良反应。 结论:放射性同位素示踪技术可无创、动态、可视化地评价生物药在人体内的药代动力学性质、生物学分布及靶向性，安全性良好，在生物药的临床评价中具有重要的应用价值。

作为G蛋白偶联受体超家族的重要成员，CXC趋化因子受体1(CXCR1)是CXC趋化因子白细胞介素-8最重要且颇具亲和力的受体之一。CXCR1常表达于中性粒细胞、单核细胞、T细胞等细胞表面，并且可与CXC趋化因子配体(CXCL)6、CXCL7、CXCL8相结合。研究发现CXCR1在促进恶性肿瘤转移、化疗耐药以及维持肿瘤干细胞特性中发挥至关重要的作用，下调CXCR1表达能显著抑制恶性肿瘤的生物学特性。目前学术界将CXCR1视为恶性肿瘤的原癌基因，CXCR1有望成为恶性肿瘤诊断和治疗的潜在靶点。

目的:设计合成 68Ga-1，4，7，10-四氮杂环十二烷-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)-半胱氨酸-天冬氨酸-缬氨酸(CDV)-Nb109，探讨其用于检测不同肿瘤中程序性细胞死亡蛋白配体1(PD-L1)表达水平的潜力。 方法:采用基因工程技术将CDV引入单域抗体Nb109序列的尾部，通过马来酰亚胺-半胱氨酸定点偶联策略，将马来酰亚胺-DOTA与CDV-Nb109(物质的量比1∶1)反应制备前体DOTA-CDV-Nb109，随后进行 68Ga标记并用PD-10脱盐柱纯化。建立人黑色素瘤A375、人源性PD-L1转染的A375-hPD-L1及人胶质瘤U87荷瘤裸鼠模型，通过稳定性分析、细胞摄取和microPET显像评价 68Ga-DOTA-CDV-Nb109的诊断价值。采用单因素方差分析和最小显著差异 t检验分析数据。 结果:68Ga-DOTA-CDV-Nb109放射化学产率为(69.79±4.69)%，放化纯大于97%，摩尔活度为(12.85±1.51) GBq/μmol。 68Ga-DOTA-CDV-Nb109与A375-hPD-L1细胞具有较强的亲和力，解离常数( Kd)为(66.43±17.89) nmol/L。 68Ga-DOTA-CDV-Nb109在A375-hPD-L1细胞[(3.17±0.15)百分加入放射性剂量(%AD)]、U87细胞[(2.08±0.03) %AD]中的摄取明显高于A375细胞[(1.21±0.14) %AD； F＝82.87， t值：15.23、9.98， P值：<0.001、0.003]。 68Ga-DOTA-CDV-Nb109在A375-hPD-L1[(5.21±0.35)每毫升百分注射剂量率(%ID/ml)]和U87[(3.44±0.69) %ID/ml]荷瘤裸鼠肿瘤中的摄取显著高于A375荷瘤裸鼠[(2.17±0.36) %ID/ml； F＝249.72， t值：35.70、3.43，均 P<0.001]。 结论:成功制得定点标记的PET探针 68Ga-DOTA-CDV-Nb109，可无创、动态监测不同肿瘤中PD-L1表达水平的变化，在PD-L1免疫检查点阻断治疗潜在受益患者筛选方面具有应用潜力。

化学遗传学技术是一种通过改变受体特异性和亲和力来调节细胞活性与功能的受体-配体系统的技术，其通过特异性地调控神经元及神经环路精准调控神经。目前，该技术在神经环路研究中应用十分广泛。本文主要简述化学遗传学技术在抑郁症神经环路研究中的应用与进展，梳理该技术在腹侧被盖区、伏隔核、前额叶皮质、海马、外侧缰核等几个与抑郁症发生密切相关的脑区中的应用，讨论化学遗传学技术作为一种精准调控神经活动的技术在未来研究中的潜力和挑战，以期为化学遗传学技术在抑郁症神经环路研究提供可靠的思路和方向。

目的:制备融合C3Fab的抗程序性死亡-配体1（PD-L1）纳米抗体P3C8-C3Fab，并研究其对血浆半衰期的影响。方法:将来源于蛋白G的C3Fab肽段，通过DNA重组技术与纳米抗体P3C8进行分子融合，并构建重组质粒pET21a-P3C8-C3Fab，在大肠杆菌BL21菌株中进行诱导表达和纯化，并采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测P3C8-C3Fab与PD-L1蛋白、小鼠IgG和表达PD-L1肿瘤细胞的结合，利用双抗夹心ELISA检测不同时间小鼠血清中残留P3C8-C3Fab，以评估C3Fab对PD-L1纳米抗体血浆半衰期的延长作用。结果:成功构建了融合C3Fab的抗PD-L1纳米抗体P3C8-C3Fab，其在BL21菌中以可溶形式高效表达，经纯化获得质量分数约为90%的NbP3C8-C3Fab蛋白，得率为7.18 mg/L。P3C8-C3Fab随着质量浓度的增加，对PD-L1蛋白和小鼠IgG亲和力也逐渐升高，且呈现浓度相关性；P3C8-C3Fab与肺癌A549细胞的结合呈浓度相关性。小鼠血清中P3C8-C3Fab的浓度标准曲线呈典型的S型浓度相关性；P3C8血浆半衰期仅为0.44 h，而P3C8-C3Fab的血浆半衰期达到9.36 h，血浆半衰期延长了21.27倍。结论:C3Fab与纳米抗体P3C8连接可以显著延长其血浆半衰期，对改善纳米抗体的体内作用具有应用价值。

程序性死亡受体1（programmed death 1，PD-1）和程序性死亡配体1（programmed death ligand 1，PD-L1）是一对免疫抑制性共刺激分子，两者结合可抑制T淋巴细胞的增殖和活化并促进免疫逃逸，在肿瘤发生发展过程中具有重要意义。研究显示人乳头状瘤病毒（HPV）感染状态与PD-L1的表达密切相关，且PD-1/PD-L1通路已被证明在多种HPV相关肿瘤如复发性呼吸道乳头状瘤、宫颈癌、HPV相关的头颈部鳞状细胞癌、非小细胞肺癌中存在。PD-1/PD-L1抑制剂可高亲和力结合PD-1或PD-L1，阻断PD-1/PD-L1通路，提高机体的抗肿瘤免疫能力。本文就PD-1/PD-L1信号通路抑制剂在HPV相关肿瘤中的研究进展及临床应用现状做一综述。

目的:考察齐洛那平对不同精神分裂症动物模型的药效及其对多巴胺D 1、D 2等受体的体外亲和力。 方法:纳入雄性SPF级ICR小鼠324只，雄性SPF级Wistar 大鼠72只及SPF级SD大鼠雌雄各10只为研究对象。（1）取100只ICR小鼠分为10组：空白组（溶媒+生理盐水，简称Veh+NS），模型组（Veh+APO 1 mg/kg），利培酮（0.03、0.10、0.30、1.00 mg/kg，灌胃）+APO组，齐洛那平（0.3、1.0、3.0、10.0 mg/kg，灌胃）+APO组；每组10只，观察齐洛那平对小鼠攀爬行为的影响。（2）取84只ICR小鼠分为10组：空白组（Veh+NS），模型组（Veh+MK-801 0.3 mg/kg），利培酮（0.01、0.03、0.10、0.30 mg/kg，灌胃）+MK-801组，齐洛那平（0.3、1.0、3.0、10.0 mg/kg，灌胃）+MK-801组；每组8~10只，观察齐洛那平对MK-801诱导小鼠高活动行为的影响。（3）取70只ICR小鼠分为7组：空白组（Veh），利培酮0.3、1.0及3.0 mg/kg组（灌胃），齐洛那平15、27及45 mg/kg组（灌胃），每组10只，观察小鼠在给药后30、60 及90 min时保持僵住不动的时间。（4）取72只Wistar大鼠进行条件回避反应训练，将训练成功的大鼠分为7组：空白组（Veh），齐洛那平20、40及60 mg/kg组，利培酮0.2、0.4及0.8 mg/kg组，每组5~6只，考察齐洛那平对大鼠回避反应次数的影响。（5）取70只ICR小鼠，颈部皮下注射给予PCP（5 mg/kg）造模后，将小鼠分为空白组（Veh+NS），模型组（Veh+PCP），利培酮 0.05 mg/kg+PCP组，齐洛那平（0.5、1.0、2.0 mg/kg）+PCP组，每组10~12只，考察齐洛那平对PCP诱导小鼠新物体识别障碍的影响。（6）将20只SD大鼠（雌雄各半）断头取脑，并制备5-HT 2A及5-HT 2C受体膜，取表达CHO-D 1、D 2及5-HT 6受体的细胞株制备D 1、D 2及5-HT 6受体膜，通过放射性配体受体结合的实验方法，考察齐洛那平对D 1、D 2、5-HT 2A、5-HT 6及5-HT 2C的亲和力。组间计量资料比较采用单因素方差分析，计数资料采用非参数 U检验。 结果:（1）与模型组比较，齐洛那平剂量3.0及10.0 mg/kg可显著抑制APO诱导的小鼠攀爬行为（ Z=-3.43、-4.07，均 P<0.01），ED 50为4.31 mg/kg。利培酮剂量在0.10、0.30及1.00 mg/kg可显著抑制小鼠攀爬行为（ Z=-1.83、-2.48、-4.26， P<0.05或 P<0.01），ED 50为0.19 mg/kg。（2）与模型组比较，齐洛那平剂量3.0及10.0 mg/kg可显著抑制MK-801诱导的小鼠高活动行为（ t=-7.18、3.90，均 P<0.01），ED 50为2.63 mg/kg。利培酮0.01、0.03、0.10及0.30 mg/kg均显著抑制小鼠高活动行为（ t=-3.02、4.98、-6.08、7.10，均 P<0.01），ED 50为0.011 mg/kg。（3）齐洛那平及利培酮均可诱发小鼠产生僵住症，其ED 50分别为35.36 mg/kg及1.25 mg/kg。（4）齐洛那平以及利培酮均能剂量依赖性抑制大鼠的回避反应次数，与空白组比较，齐洛那平剂量在40及60 mg/kg时可显著性抑制大鼠条件回避反应次数（ t=11.84、13.07，均 P<0.01），ED 50为34.36 mg/kg；利培酮0.8 mg/kg可显著抑制大鼠条件回避反应次数（ t=13.50， P<0.01），ED 50为0.60 mg/kg。（5）与模型组比较，齐洛那平0.5及1.0 mg/kg给药时能显著改善PCP诱导的新物体识别障碍模型小鼠的区分指数（ t=-3.67、-2.12，均 P<0.05及 P<0.01），提高认知能力；而利培酮0.05 mg/kg对PCP诱导的新物体识别障碍模型小鼠的区分指数无显著性影响。（6）齐洛那平对D 1（K i=3.21 nmol/L）、5-HT 2A（K i=13.11 nmol/L）、5-HT 6（K i=21.49 nmol/L）及5-HT 2C（K i=48.90 nmol/L）受体有较高的亲和力，而对D 2（K i=563.20 nmol/L）受体亲和力较弱。利培酮对5-HT 2A、5-HT 2C和D 2受体具有较高亲和力，其K i分别为2.37、18.79和4.82 nmol/L，利培酮对D 1和5-HT 6亲和力较弱。 结论:齐洛那平对多个精神分裂症阳性症状动物模型均有较好的药效且能改善小鼠的认知，其体内药效活性可能与多巴胺D 1、D 2受体及5-HT 2A和5-HT 6受体有关。

目的:探讨放射性核素 131I标记的程序性死亡受体配体1单克隆抗体（PD-L1 McAb）的物理性质及其在人乳腺癌荷瘤小鼠模型中进行分子成像的可行性。 方法:采用氯胺T法以放射性核素 131I标记PD-L1 McAb，采用纸层析法测定 131I标记PD-L1 McAb的标记率，并计算放射性比活度；标记产物 131I-PD-L1 McAb采用葡聚糖凝胶G-25层析柱分离纯化，采用纸层析法测定 131I-PD-L1 McAb的放射性化学纯度，以及 131I-PD-L1 McAb在生理盐水和健康成人血浆中的稳定性。培养人乳腺癌PD-L1阳性细胞株MDA-MB-231细胞，随机分为总结合实验（TB）组和非特异性结合实验（NSB）组，每组又分为6个亚组，各亚组在PH 7.4的磷酸盐缓冲液中分别加入不同体积的 131I-PD-L1 McAb溶液和PD-L1 McAb溶液，配制总量500 μL，使用GC-300型免疫γ-计数器测量各组细胞中 131I-PD-L1 McAb的每分钟计数（cpm）值。根据TB组与NSB组各亚组之间cpm值的差值，使用Scatchard作图分析方法计算 131I-PD-L1 McAb的平衡解离常数KD值，评估 131I-PD-L1 McAb与MDA-MB-231细胞亲和力。取裸鼠3只，于右前肢前臂皮下接种MDA-MB-231细胞悬液制备人乳腺癌荷瘤小鼠模型，观察接种部位成瘤情况并计算肿瘤体积。裸鼠肿瘤接种后第15天按200 MBq/kg尾静脉注射 131I-PD-L1 McAb溶液，分别于注射后5 min、30 min、60 min、24 h、48 h、72 h使用小动物活体成像仪进行放射性核素成像检查，观察 131I-PD-L1 McAb在荷瘤鼠体内浓聚情况；在小动物活体成像检查图像上选择肿瘤部位、对侧前肢相应部位为感兴趣区，计算相应的放射性计数靶（T）值和放射性计数非靶（NT）值，比较不同时间点肿瘤部位与非肿瘤部位的放射性活度比值（T/NT）的变化情况。 结果:131I标记PD-L1 McAb的标记率为80.10%~82.20%（81.07%±1.06%），标记产物 131I-PD-L1 McAb的放射性比活度为（2.78±0.23）MBq/μg，放射性化学纯度为99.10%~99.60%（99.37%±0.25%）。 131I-PD-L1 McAb在生理盐水与人新鲜血浆溶液中6 h内放射性化学纯度均大于80%。 131I-PD-L1 McAb与MDA-MB-231细胞KD值为60~64（62±2）nmol/L。3只裸鼠均成功建立乳腺癌荷瘤小鼠模型，接种乳腺癌MDA-MB-231细胞后第6天触及肿块，第15天测量肿瘤体积为0.92~1.12（1.00±0.11）cm 3。尾静脉注射 131I-PD-L1 McAb后，不同时间点小动物活体放射性核素成像显示， 131I-PD-L1 McAb早期主要在荷瘤鼠腹部浓聚，24 h时荷瘤鼠右前肢肿瘤部位开始显影，48 h时肿瘤显影最为清晰，72 h时肿瘤部位显影开始模糊。不同时间点放射性计数T/NT值随着注射时间的延长逐渐增加，48 h时T/NT值最大（6.66±1.10），72 h时开始下降，不同时间点T/NT值比较，差异有统计学意义（ F=38.04， P=0.011）。 结论:放射性核素 131I标记PD-L1 McAb，具有较高的标记率。标记产物 131I-PD-L1 McAb具有较高的放射性化学纯度及适宜的放射性比活度，在体外有良好的稳定性，且与MDA-MB-231细胞亲和力较高，可用于人乳腺癌荷瘤小鼠模型的分子成像研究。

目的:构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(EGFR-CAR)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法:人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤，酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测抗体特异性，流式细胞术(FACS)鉴定对PD-1配受体封阻性能，Fortebio测定抗体亲和力，抗体全长测序，经保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后构建单链抗体(single-chain variable fragment，scFv)；人EGFR单克隆抗体杂交瘤系，经5′RACE技术扩增其轻链和重链可变区(VL和VH)基因，构建scFv，克隆至真核载体pcDNA3.1表达鉴定。基因合成EGFR-CAR(引入CD137协同信号胞内功能域)与PD-L1-scFv借助2A序列连接，克隆入慢病毒pLVX-EF1a-IRES-ZsGreen1表达载体，使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)共同转染293T细胞，获得包装病毒，感染293V细胞，FACS测定CAR膜表达，ELISA检测CAR感染293V细胞培养上清中PD-L1-scFv表达情况，转染激活人外周血T细胞，验证CAR膜表达。结果:获得PD-L1抗体11E3，具备高度配受体封阻性能，经人源化改造后，亲和力稳定(2.67×10 －10 mol/L)，EGFR-scFv获得有效表达。进一步构建了EGFR-CAR和PD-L1双修饰慢病毒分泌型CAR(CTC0537-1)及膜表达型CAR(CTC0537-2)，其病毒感染293V细胞阳性率为10%。CTZ0431-1感染293V细胞后，细胞膜表面表达EGFR-scFv，检测培养上清存在PD-L1-ScFv；CTZ0431-2感染293V细胞后，细胞膜表面EGFR-scFv和PD-L1-scFv有效表达，双表达病毒感染活化T细胞的CAR表达率为39.3%。 结论:成功构建了EGFR-CAR和PD-L1-scFv双表达慢病毒载体，EGFR-CAR中度结合亲和力，此为EGFR靶向和PD-L1抗体双修饰CAR-T细胞的实体瘤治疗研究提供了关键工具。