目的:探讨前列腺癌组织蛋白质组学及其差异表达蛋白分析。方法:选取2022年1月至2023年12月郑州大学附属肿瘤医院收治的12例前列腺癌组织和癌旁组织作为研究对象。12个癌旁组织和前列腺癌组织采用组织裂解液提取总蛋白，采用梯度重叠的固定化PH梯度胶对肿瘤样本和正常组织样本进行双向电泳，获得总蛋白质图谱，对两组图谱进行差异分析，选取差异表达的印迹点，切割后进行质谱鉴定和数据库检索，分析差异蛋白的生物学功能。采用蛋白质免疫印迹验证质谱筛选差异表达蛋白水平。计量数据比较采用独立样本 t检验。 结果:采用双向电泳共得到125个差异表达的蛋白质点，串联质谱分析，获得肽段指纹图谱，共获得54个显著表达的的蛋白，其中上调31个，下调23个。其中表达增加排名前5的蛋白分别为L-乳酸脱氢酶B、α-烯醇酶、内质网蛋白ERp29、转录激活因子6、高迁移率蛋白A2。表达下调排名前5的蛋白分别为蛋白质二硫化物异构酶、血小板反应素-1、WW结构域的氧化还原酶、内质网蛋白ERp29、乙醛脱氢酶。上述蛋白主要参与细胞中心碳代谢、蛋白质翻译、基因转录调控、内质网应激反应、细胞外基质重塑等生物过程。癌旁组织中L-乳酸脱氢酶B、α-烯醇酶、波形蛋白、转录激活因子6和高迁移率蛋白A2蛋白表达水平(0.87±0.09、1.05±0.15、0.75±0.06、0.76±0.09、0.62±0.09)明显低于前列腺癌组织(1.85±0.13、1.71±0.14、1.47±0.12、1.24±0.12、1.40±0.22)，差异有统计学意义( t＝21.530、11.090、18.930、11.450、11.460， P<0.05)。癌旁组织中蛋白质二硫化物异构酶、血小板反应素-1、WW结构域的氧化还原酶、内质网蛋白ERp29和乙醛脱氢酶蛋白表达水平(1.43±0.19、1.14±0.14、1.37±0.14、1.03±0.09、0.91±0.06)明显高于前列腺癌组织(0.42±0.12、0.74±0.11、0.79±0.07、0.69±0.07、0.60±0.13)，差异有统计学意义( t＝15.430、7.620、12.750、10.280、7.418， P<0.05)。 结论:前列腺癌组织细胞中心碳代谢、蛋白质翻译和基因转录调控等相关的蛋白表达异常，可能与前列腺癌的形成和进展密切相关。

目的:探讨脐血间充质干细胞(MSC)联合艾曲波帕治疗异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后移植物功能不良(PGF)患者的疗效及安全性。方法:选择2018年3月至2019年6月，在航天中心医院血液科接受allo-HSCT后，发生PGF的6例患者为研究对象。其中，男性患者为5例，女性为1例；患者中位年龄为33岁(范围：16~45岁)。根据血常规、骨髓细胞形态学、免疫表型及DNA指纹图谱等检查结果，患者被确诊为PGF。采用脐血MSC(1×10 6/kg)联合艾曲波帕(25~75 mg/d)对患者进行治疗。本研究对患者的随访截至2020年3月1日。回顾性分析患者的临床资料、相关实验室检查结果、脐血MSC联合艾曲波帕治疗PGF患者的临床疗效、不良反应及预后。本研究获得航天中心医院医学伦理委员会批准(批准号：20160420-XYZZ-02)，并与全部患者签署临床研究知情同意书。 结果:①本组6例患者的原发疾病中，急性髓细胞白血病(AML)为2例，肝脾T细胞淋巴瘤(HSTCL)为1例，T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病(T-LBC/ALL)为2例，慢性粒单核细胞白血病(CMML)为1例。所有6例患者移植前均处于未缓解状态。allo-HSCT后，均获造血功能重建，粒细胞植入的中位时间为移植后13 d(范围：12~14 d)，有4例患者治疗前血小板未植入，剩余2例患者血小板植入时间分别为移植后13 d及90 d，所有患者在移植后28 d经骨髓DNA指纹图谱证实为完全供者嵌合。6例患者中有5例发生急性移植物抗宿主病(aGVHD)，均为Ⅲ~Ⅳ度aGVHD，经系统治疗后均获得良好控制。②患者的PGF中位诊断时间为移植后57 d(范围：28~370 d)；其临床特征包括血常规检查结果示，2系或者3系血细胞计数持续减少，骨髓细胞形态学检查结果示骨髓增生减低或者明显减低，巨核细胞少见或者缺如，微小残留病(MRD)检查未见原发疾病复发证据。③患者输注脐血MSC的中位次数为3.5次(范围：2~4次)。治疗后，1例患者无效，5例有效，达治疗有效的中位时间为19 d(范围：12~56 d)，并且最终获得造血功能恢复。④患者输注脐血MSC过程中均无不良反应，亦未发生aGVHD及慢性GVHD(cGVHD)症状加重。2例出现间接胆红素水平升高，予以艾曲波帕减量后改善。⑤本组患者的中位随访时间为10.5个月(范围：6~19个月)，截至随访结束，6例患者中5例存活，并处于无病生存状态，存活患者中位总体生存(OS)期为11个月(范围：8~19个月)；1例死亡，其死亡原因为严重肺部感染。结论:脐血MSC联合艾曲波帕治疗allo-HSCT后PGF患者，疗效及安全性均良好。

目的:研究鹿骨的指纹图谱与免疫调节作用的关联性,明确鹿骨能够发挥免疫作用的活性成分.方法:以不同提取温度制备10组鹿骨样品,建立指纹图谱;对指纹图谱中的共有峰进行多元统计分析,采用液质联用技术和标准品对照对其进行指认;通过测定10组鹿骨提取物作用于RAW264.7损伤模型的细胞活力和一氧化氮(NO)浓度,以此为指标评价鹿骨的免疫调节作用,并通过灰色关联度建立鹿骨的谱效关系.结果:鹿骨指纹图谱有10个共有峰,利用液质联用技术对这10个峰进行结构鉴定,并通过标准品比对确定了 6个化合物.鹿骨指纹图谱相似度大于0.9.聚类分析和主成分分析结果相同,将鹿骨聚为6类,OPLS-DA筛选出5个变量投影重要性(VIP)大于1的色谱峰,分别是4号、7号(尿苷)、10号(鸟苷)、5号、9号(肌苷).而灰色关联度结果显示10个色谱峰关联度均大于0.6,表明鹿骨可能通过多成分起到免疫调节作用;有9个色谱峰关联度大于0.7表明有较大的关联性;前6个色谱峰是7号(尿苷)、10号(鸟苷)、9号(肌苷)、2号(胞苷)、3号(尿嘧啶)、6号(次黄嘌呤).综上所述,表明7号(尿苷)、10号(鸟苷)、9号(肌苷)这3个核苷类成分可能是鹿骨中的主要的免疫调节成分.结论:鹿骨免疫调节作用可能是多种核苷类成分协同作用的结果,尿苷、鸟苷和肌苷可能是鹿骨发挥免疫作用的主要活性成分.

麻杏石甘汤起源于《伤寒论》,是新冠疫情使用的中药基础方剂,在抗疫中发挥极其重要的作用.针对的病机是外邪郁闭、痰热阻肺,用于治疗肺热喘嗽与温热类疾病,在治疗呼吸道感染、肺炎、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、支气管哮喘等疾病疗效显著.临床应用治疗哮喘中生石膏多为麻黄的4倍,麻黄最佳剂量为24 g;肺炎的治疗中石膏用量多为麻黄的5倍,麻杏石甘汤发挥抗病毒、抗炎等药理作用的相关靶点包括白细胞介素-6(IL-6)、IL-17、肿瘤坏死因子(TNF)、促分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)等.临床治疗疾病中与免疫调控(包括成熟的T淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+等)密切相关.现对麻杏石甘汤的古代文献、治疗肺系疾病量效、药理作用、现代基础及临床研究进行概述.总结现有研究不足,在以后的研究应侧重于中药复方指纹图谱、药效机制、标准汤剂和治疗疾病疗效评价的标准化等方面开展.

目的 分析地五养肝方调控TLR4/NF-κB信号通路对肝癌模型肠道菌群及其菌群代谢功能的调节作用.方法 选择24只SPF级大鼠随机分为对照组、模型组和观察组;模型组和观察组建立大鼠肝癌模型;末次给药后24 h时大鼠处死后取出肝脏组织,观察肝组织病理学变化;采用酶联免疫吸附法检测CA19-9、AFP、ALT水平;采用变性梯度凝胶电泳法(DGGE)绘制DGGE指纹图谱;利用气相色谱法检测大鼠粪便中短链脂肪酸水、D-乳酸水平;采用Western blotting法检测瘤组织中TLR4、NF-κB、GAPDH水平.结果 对照组大鼠肝功能正常无受损,肝脏健全,模型组出现明显的癌细胞,且肝脏受损严重,观察组大鼠肝脏结构较为完整,肝脏组织炎性细胞减少,损伤程度减弱;观察组大鼠血清标志物CA19-9、AFP及ALT水平均明显低于模型组,且差异存在统计学意义(P<0.05);观察组大鼠大肠道菌群中双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠埃希菌、肠球菌水平均明显低于模型组,且差异存在统计学意义(P<0.05);观察组大鼠肠道菌群DGGE指纹图谱的多样性指数、丰富度和均匀度明显高于模型组,且差异存在统计学意义(P<0.05);观察组大鼠TLR4蛋白和NF-κB蛋白表达水明显低于模型组,且差异存在统计学意义(P<0.05).结论 地五养肝方可有效调控TLR4/NF-κB信号通路,并改善肝癌模型肠道菌群及其菌群代谢功能.

药食两用植物沙棘Hippophae rhamnoides的叶,已被批准为普通食品原料,同时还具有传统药用记载和广泛的药理活性,显示出较好的药用价值潜力,但其潜在的药效物质和作用机制尚不清楚.同时,由于沙棘叶来源广泛,品质变异大,没有相应的质量评价标准.该研究采用网络药理学和分子对接技术预测沙棘叶的活性成分、核心靶点、关键通路及其潜在治疗疾病,同时结合UPLC-DAD含量测定、化学指纹图谱分析,遴选出沙棘叶潜在的质量标志物(Q-marker),并利用酶活性抑制方法进行初步验证.结果表明,沙棘叶对多种消化道疾病、代谢类疾病、肿瘤和自身免疫性疾病等均具有潜在干预作用,与传统应用和现代药理学活性研究结果相符,作用核心靶点包含PTPN11、AKT1、PIK3R1、ESR1、SRC等;关键信号通路主要涉及PI3K-AKT、MAPK、HIF-1等.沙棘叶发挥药效活性与其含有丰富且结构多样的黄酮类和鞣质类成分密切相关,其中槲皮苷、水仙苷和鞣花酸可作为沙棘叶的质量标志物.该研究为沙棘叶的质量控制和后续药用价值的深入开发利用提供参考.

[目的]五日热巴尔通体(Bartonella quintana)由体虱在人群中传播,可引起多种人类疾病包括战壕热.为进一步搜集猕猴是五日热巴尔通体自然宿主的证据,本研究调查了国内4个地区实验用猕猴五日热巴尔通体的感染状况,对菌株遗传特征进行了分析.[方法]采集猕猴全血和血清样品各550份,用于菌株分离、核酸和血清IgG抗体检测.应用6个管家基因扩增及测序方法进行菌株鉴定、系统发育及核苷酸多态性分析;应用随机扩增多态性DNA标记(Random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术分析不同宿主来源菌株RAPD指纹图谱差异;应用间接免疫荧光法(Indirect immunofluorescence assay,IFA)检测血清中抗五日热巴尔通体IgG抗体水平.[结果]从550只猕猴中分离到8株五日热巴尔通体菌株,带菌率为1.5％;直接PCR检测550份全血核酸的总感染率为8.2％.普通猕猴血清阳性率为19.0％,感染水平明显高于食蟹猕猴(5.6％).五日热巴尔通体与汉赛巴尔通体RAPD指纹图谱的带型完全不同,猴源和人源五日热巴尔通体菌株Fuller带型基本一致.不同宿主来源菌株核苷酸多态性分析显示,猴源菌株之间差异小,其与人源菌株差异较大.[结论]中国猕猴五日热巴尔通体感染水平较高,普通猕猴自然感染率及抗体水平明显高于食蟹猕猴,猴源与人源菌株的基因型有明显差异.

[目的]观察清热利湿活血方对乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠的抗病毒作用及对肝组织TANK结合激酶1(TKB1)、干扰素调控因子3(IRF3)表达的影响,以阐明其作用机制.[方法]首先建立清热利湿活血方的HPLC指纹图谱.再将HBV转基因小鼠随机分为4组,即模型组,苦参素组,清热利湿活血方高、低剂量组,每组8只.苦参素组小鼠给予灌胃剂量为0.15 g·kg-1·d-1的苦参素混悬液,清热利湿活血方高、低剂量组小鼠分别给予灌胃剂量为7、2 g·kg-1·d-1的清热利湿活血方混悬液,给药共5周.治疗结束后,采用酶链免疫吸附法(ELISA)检测血清及肝组织乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg),采用常规苏木素—伊红(HE)染色观察肝组织病理变化,采用定量聚合酶链反应(qPCR)法检测血清中HBV DNA及肝组织中HBV DNA、TKB1 mRNA、IRF3 mRNA表达,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肝组织TKB1、IRF3的蛋白表达.[结果]标定14个特征峰构成清热利湿活血方的指纹图谱,其中1号峰为没食子酸,8号峰为柯里拉京,9号峰为虎杖苷,10号峰为鞣花酸,13号峰为甘草酸,14号峰为齐墩果酸.高剂量清热利湿活血方可减轻肝细胞轻度脂肪变性、肝细胞轻度水肿及Kuffer细胞增生等病理改变,显著降低HBV转基因小鼠肝脏和血清中的HBsAg、HBV DNA水平(P<0.05或P<0.01),显著增强小鼠TKB1、IRF3的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01).[结论]清热利湿活血方有抗HBV作用,其抗病毒机制可能与增强TKB1、IRF7 mRNA及蛋白表达,进而影响干扰素分泌有关.

目的 建立10个不同批次金泽排石颗粒的HPLC指纹图谱,并初步建立其抗炎生物活性效价检测方法,构建环氧合酶-2 (COX-2)与金泽排石颗粒的量效关系,科学评价并有效控制颗粒的质量.方法 采用HPLC法分析10个不同批次金泽排石颗粒共有峰的相似度,并将19个共有峰归属到药材,将相似度结合SPSS统计软件聚类分析以及主成分分析结果评价10批次颗粒;用酶免疫法测定金泽排石颗粒对COX-2的半数抑制浓度(IC50).结果 10个批次金泽排石颗粒的HPLC指纹图谱的相似度均≥0.955,聚类分析和主成分分析结果与相似度结果具有一致性.金泽排石颗粒对COX-2有明显的抑制作用,IC50为10.272 mg/mL,具有明显的量效关系.结论 采用化学指纹图谱与生物活性检测多元质控体系,具有高效、快速、准确、灵敏、重现性好等特点,可以有效地评价金泽排石颗粒的抗炎生物活性,更加科学合理地控制其质量,也为其他中药制剂建立更加科学的质量控制标准提供了参考.

目的:观察维药菊苣提取物对高血尿酸状态下肠道屏障的影响,明确其促肠道尿酸排泄的作用环节.方法:质量浓度为100g/L的果糖饮水制备高尿酸血症大鼠模型.检测血清尿酸(SUA)、粪便尿酸排泄量(FUA)、血清二胺氧化酶(DAO)水平,Elisa检测血清D-乳酸、血清内毒素(LPS)、肠道分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、肠道β-防御素1(DEFB1)水平,HE染色观察肠道病理形态,Eric-PCR指纹图谱分析肠道菌群宏观结构,实时荧光PCR分析肠道主要宿主菌数量.结果:高尿酸血症大鼠SUA、FUA、DAO、D-乳酸、LPS、肠道DEFB1水平较正常组显著升高(P＜0.01,P＜0.05),肠道sIgA水平显著降低(P＜0.01),肠道组织形态与肠道菌群宏观结构发生病理改变,大肠杆菌数量显著增加(P＜0.01).菊苣提取物可显著降低模型大鼠SUA、FUA、 DAO、D-乳酸、LPS与肠道DEFB1水平,升高肠道sIgA水平,改善模型动物肠道组织形态及肠道菌群宏观结构,显著减少大肠杆菌、粪肠球菌数量,增加双歧杆菌数量.结论:高尿酸血症状态下肠道尿酸排泄异常与肠道屏障病理改变有关,综合调节肠道屏障,维护肠道内稳态,是维药菊苣提取物促进肠道尿酸排泄的重要环节.