目的 研究芩百清肺浓缩丸治疗支原体肺炎的作用机制.方法 采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)联用技术的代谢组学方法,分析肺炎支原体感染小鼠肺组织中内源性化合物的变化.采用Progenisis QI软件进行色谱峰识别及匹配,并采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)对获得数据进行降维,通过分析对不同组间分离贡献度较大(VIP＞1,P＜0.05)化合物的串联质谱数据,经HMDB等数据库检索,确定潜在生物标志物.结果 从肺组织中共鉴定出视黄醛、全反式维甲酸、焦谷氨酸、白三烯C4、维生素A、花生四烯酸、前列腺素12等20个潜在生物标志物.与模型组比较,芩百清肺浓缩丸对20个潜在生物标志物均具有回调作用.结论 芩百清肺浓缩丸通过影响视黄醇代谢、亚油酸代谢、花生四烯酸代谢等通路发挥治疗支原体肺炎的作用.

目的:探讨视网膜中全反式视黄醛(atRal)能否代谢生成全反式维甲酸(atRA),并比较两者对视网膜色素上皮细胞(RPE)的细胞毒性作用,以阐明atRA生成的意义.创新点:建立atRA的超高效液相串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法,并证明atRA的生成是视网膜中atRal的重要解毒代谢通路.方法:利用UPLC-MS/MS分别检测猪眼神经视网膜及RPE层中atRA的含量;利用ARPE-19细胞系模拟atRal在RPE中累积,用UPLC-MS/MS检测细胞内及培养基中atRA的含量,并用定量聚合酶链反应(qPCR)检测CYP26b1的表达;利用CCK8、DCFH-DA染色、qPCR、western blot等方法对比等浓度atRA和atRal在RPE细胞中所诱导的细胞毒性、氧化应激、凋亡相关蛋白表达水平;用UPLC-MS/MS检测视网膜atRal清除障碍的ABCA4?/?RDH8?/?小鼠眼球中atRA及全反式视黄醇.结论:明确atRA在正常视网膜中能够代谢产生;证明其形成有利于RPE细胞中累积的atRal迅速代谢消除;其自身诱导细胞氧化应激的能力显著低于atRal,因而能显著减弱后者的细胞毒性.

天然的类视黄醇(retinoids):维生素A及其重要的代谢衍生物――视黄醛与维甲酸都是脂溶性不饱和的异戊间二烯化合物,由三甲基环己基与一带有四个双链的全反式多烯链组成。这些化合物的纯结晶体在氧气、光线与高温中不稳定。类胡萝卜素是存在于蔬菜中无生理活性的维生素A二聚体。合成的类视黄醇:为了寻求具有更大生物活性与更小毒性的化合物,维生素A分子的所有三个部分均曾被置换过。一般改变类视黄醇的多烯链可明显地减低其活性,而改变维甲酸的羧基使其成为乙烯胺或乙氧羰基终末基团,则可减低其毒性并保留或增强其生物活性,如再置换以某些芳香性化合物,则可使其毒性更小且活性增强达10倍之多。

几种维A酸如全反式(全反式维A酸)、顺式(13-顺维A酸)、莫维A胺、视黄醛、阿达帕林和他扎罗汀,当外用或系统给药时治疗轻度至严重痤疮有效.然而在使用0.05%～0.1%的全反式维A酸润肤霜时,皮肤反应,如干燥、脱屑、红斑、灼热感及针刺感较为常见.在最初的2周时红斑和主观感觉(灼热感和针刺、瘙痒)最严重,以后随时间的推移而减轻,12～16周时皮肤干燥和脱屑最严重并趋于持久存在.一些患者因为这些不良反应而停止治疗.

目的 观察豆豉对雄激素源性脱发(AGA)小鼠血液内源性代谢物的干扰规律,从代谢组学方面探讨豆豉防治脱发的作用机制.方法 除空白组外,其余各组均在小鼠背部平行于脊柱区皮下注射丙酸睾酮溶液建立AGA小鼠模型,阳性药组灌胃非那雄胺,给药组灌胃高、中、低剂量的豆豉溶液,空白组和模型组灌胃蒸馏水.给药周期为10周,给药期间观察小鼠的状态.给药治疗后,收集小鼠血清,应用UPLC/Q-TOF-MS技术结合多元统计学分析方法,阐释其代谢谱的变化规律.结果 豆豉可以明显改善AGA小鼠的脱发现象,在正负离子的模式下,共筛选出12个差异性标志物,包括全反式维甲酸、9-顺式-视黄醛、鞘氨醇-1-磷酸、亚油酸、磷脂酰胆碱等.结论 豆豉改善AGA脱发小鼠的机制可能与甘油磷脂代谢、鞘脂代谢、亚油酸代谢、视黄醇代谢、氨基酸代谢等代谢路径有关.

细菌视紫红质(bacteriorhodopsin,bR)是一种光驱受体蛋白,每个活性单元由3个单体组成,每个单体由一分子视蛋白和一分子的视黄醛发色团共价结合而成,其功能为从胞内向胞外定向传输质子,利用形成的质子浓度梯度将光能转化为化学能.光照后视黄醛发色团构型发生all-trans向13-cis转变,蛋白的构象也随之发生了一系列具有稳定中间态的变化并驱动质子的定向传递.为探讨bR视黄醛键合区保守性氨基酸色氨酸86 (Tryptop-han86,w86)对其光循环中间态和质子泵功能的影响,本研究采用定点突变技术将W86突变为侧链大小不同的F86和A86,通过原位紫外-可见光吸收光谱、闪光光解光谱、pH滴定、固体核磁共振等技术手段,探究W86F和W86A突变对bR光循环及质子泵功能影响差异性的分子机制.结果 表明,W86F和W86A突变均造成了bR暗适应状态下视黄醛顺反异构平衡向顺式构型占优的方向移动,且W86F突变可造成反式构型的完全消失.此外,无论是W86F还是W86A突变都造成了蛋白光循环中间态的减弱且衰减延长,以及质子泵功能减弱,但影响机制各有所不同,这可能与这两个突变对视黄醛多烯链上电子云的分布以及周围残基造成的扰动程度不同有关.

乙醛脱氢酶1A3(ALDH1A3)是醛类代谢酶系醛脱氢酶家族中的重要成员之一,其主要通过将全反式视黄醛氧化成视黄酸,来参与人体细胞的生理过程.大量证据表明ALDH1A3参与调节肿瘤细胞的生物学特性,具有作为癌症诊断和治疗靶点的潜力.ALDH1A3在促进平滑肌细胞的增殖方面发挥作用,可能与动脉粥样硬化的形成密切相关.笔者从ALDH1A3在恶性肿瘤、血管平滑肌调控中的作用及机制等方面进行综述.

光驱动质子泵细菌视紫红质(bacteriorhodopsin,bR)是存在于嗜盐杆菌(Halobacterium salinarumn)细胞膜上的一种七-跨膜蛋白,其视黄醛发色团与螺旋F上的赖氨酸216(K216)共价结合形成希夫碱.光激发后,视黄醛由全反式构型向13-顺式构型的异构化驱动蛋白进入光循环,在经历了一系列具有特定紫外吸收的光循环中间态后将质子由胞内泵出到胞外,形成质子梯度差驱动ATP酶合成ATP.荷正电的赖氨酸129(K129)是bR胞外界面上唯一的一个赖氨酸残基,它对胞外侧质子传输半通道氢键网络以及整个光循环的调控作用目前仍不甚明了.为弥补这一研究上的空白,本研究通过基因定点突变技术并结合紫外-可见光吸收光谱、动力学闪光光解光谱、酸碱滴定等手段,通过与重组表达的野生型bR的对比,深入探究不同极性的K129E和K129L突变对bR质子释放基团(proton release complex,PRC)的调制作用以及对整个光循环的影响.研究结果表明,K129作为胞外侧的荷正电性氨基酸残基,对于稳定质子释放基团的电荷和质子传输通道氢键网络具有重要的调控作用,直接影响着bR的光循环动力学和质子泵功能.