目的 探讨养精胶囊促进睾丸间质细胞合成睾酮(T)的具体机制.方法 将雄性BALB/c小鼠饲养至18 月龄,以生理盐水和不同剂量养精胶囊混悬液灌胃处理30 天.ELISA法检测小鼠血清T水平;Western blot检测小鼠睾丸组织Beclin-1 和LC3 蛋白的表达水平;透射电镜观察小鼠睾丸间质细胞的自噬情况.结果 养精胶囊灌胃处理后,老年小鼠的血清T水平增加,且呈剂量依赖性,养精胶囊低、中、高剂量组小鼠的血清 T与老年对照组相比,均有显著差异(P<0.01);养精胶囊低、中、高剂量组小鼠睾丸组织中的 Beclin-1 和 LC3 II/I均显著高于老年对照组(P<0.05);透射电镜结果显示,与老年对照组相比,养精胶囊低、中、高剂量组小鼠睾丸组织中间质细胞内自噬小体明显增多,尤其是养精胶囊高剂量组.结论 养精胶囊可以通过调控睾丸间质细胞的自噬,从而提高其合成T的功能.

目的 探索补肾活血方养精胶囊促进生精障碍模型小鼠睾丸微循环的作用及其机制.方法 成年小鼠分为空白组、环磷酰胺(CP)模型组、养精胶囊(YC)治疗组(低、中、高剂量).以石蜡切片HE染色观察小鼠睾丸组织形态;以石蜡切片免疫组化及Western-blotting检测小鼠睾丸CD34表达;RT-qPCR与Western-blotting分别检测组织VEGFR2、SRC、AKT1的mRNA与蛋白表达.结果 模型组CD34染色深度与蛋白表达均明显低于空白组,虽然YC低、中、高剂量组CD34的染色深度逐步加深,但只有YC高剂量组CD34蛋白表达明显高于模型组;模型组小鼠睾丸Vegfr2的mRNA表达明显高于空白组,而模型组小鼠睾丸VEGFR2的蛋白表达较空白组明显下降,YC高剂量组小鼠睾丸VEGFR2的蛋白水平较模型组明显上升.各组小鼠睾丸在Src与Akt1的mRNA表达上无统计差异,但在蛋白表达上,模型组小鼠睾丸SRC表达较空白组明显降低,而YC高剂量组小鼠睾丸SRC蛋白水平较模型组明显提高;模型组AKT1蛋白表达较空白组明显下降,YC治疗组小鼠睾丸AKT1蛋白表达与模型组比较无统计学差异.结论 补肾活血方能够通过上调小鼠睾丸VEGF/VEGFR2通路中VEGFR2与SRC的蛋白表达进而改善CP模型小鼠睾丸微循环.

男性性功能障碍(MSD)和精子异常是临床上常见的男科疾病,严重影响夫妻性生活的质量和家庭和谐.中医学认为"肾藏精,主生殖","肾者作强之官,伎巧出焉",因此,中医补肾法是治疗MSD和精子异常的基本治法.养精胶囊[由南京军区南京总医院制剂科生产提供,院内批准文号为:院临(2004)第01002号]是根据"肾藏精"理论,秉承"阴成形,阳化气"的理念设计而成,由淫羊藿、熟地、生黄芪、黄精、紫河车、当归等中药组成.方中淫羊藿有益肾助阳之功,熟地黄甘温质润入肾,善滋补肾阴,填精益髓,为补肾阴之要药,两者合用有补肾填精、补阴益阳的作用,共为君药;黄精补肾健脾,除了补益肾精外,更能以后天之精养先天之精,紫河车系血肉有情之品,能补肾益精,沙苑子与黄芪共用补气固精,当归养血活血,取精血同源、养血填精之功,共为臣药;煅牡蛎收敛固精,恢复"肾藏精"的功能,且能补充精子生长发育所需多种微量元素,为佐药.全方共奏补肾生精,补气养血之效.前期的研究表明,养精胶囊能够提高性欲,改善勃起功能和射精功能;可以提高少、弱精症患者的精子质量,在改善MSD和提高男性生育力方面均有良好的疗效.本文旨在整理前期养精胶囊在男性生殖领域的应用研究,现综述如下.

目的 研究养精胶囊促进小鼠精原干细胞(SSCs)增殖的分子机制.方法 提取4～6 d雄性BALB/c小鼠睾丸中的SSCs,纯化并传代获得稳定的细胞.将不同浓度的养精胶囊水提物加入SSCs中,CCK-8检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期,qRT-PCR以及Western blot检测Cyclin D各个亚型的表达.之后进行阻断实验,在加入养精胶囊前预先加入siRNA-Cyclin D1或者LY294002(PI3K阻断剂),同样的方法检测细胞的增殖活性和细胞周期,以及p-Akt/Akt、Cyclin D1的表达情况.结果 0.01、0.1、1 mg/mL浓度的养精胶囊在24、36、48 h这三个时间点可以促进SSCs的增殖,1 mg/mL养精胶囊作用细胞48 h后,S期细胞比例升高22.7％,有统计学差异.1 mg/mL养精胶囊可以促进Cyclin D1的表达,而对Cyclin D2、Cyclin D3的表达无影响.阻断实验表明,预先加入siRNA-Cyclin D1或者LY294002可以阻断PI3K-Akt-Cyclin D1通路,降低SSCs的增殖活性,减少S期细胞比例,抑制p-Akt/Akt、Cyclin Dl的表达.结论 补肾填精中药养精胶囊可以通过PI3K-Akt通路作用于CyclinD1,提高S期细胞比例,促进SSCs增殖.

目的:研究养精胶囊促进小鼠精原干细胞(SSCs)增殖的分子机制.方法:将不同浓度的养精胶囊提取物加入SSCs中培养48 h,CCK-8检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期,荧光素酶报告基因检测Cyclin D1启动子的活性,qRT-PCR以及免疫荧光检测Cyclin D1的表达.之后进行阻断实验,在加入养精胶囊前预先加入siRNA-Cyclin D1,同样的方法检测细胞的增殖活性、细胞周期、Cyclin D1启动子的活性以及Cyclin D1的表达情况.结果:低、中、高浓度的养精胶囊可以促进SS-Cs的增殖,提高S期细胞的比例,增强Cyclin D1启动子的活性,促进Cyclin D1的表达.阻断Cyclin D1后,SSCs的增殖活性降低,S期细胞比例减少,Cyclin D1启动子的活性降低,Cyclin D1的表达减少.结论:养精胶囊通过增强Cyclin D1启动子的活性提高Cyclin D1的转录和翻译水平,进而促进SSCs增殖.

微循环是循环系统中最基本的结构和功能单位,良好的微循环是体内各脏器行使正常功能的前提与保障.男性生殖系统微循环被证实在男性性功能障碍(MSD)、男性不育症等疾病中扮演着重要的角色.养精胶囊能通过补肾活血、养精通络等方面改善男性生殖微循环,对MSD和男性不育症等男性生殖系统疾病有良好的疗效.

目的:研究养精胶囊对LncRNA H19调控StAR作用及促进睾酮合成机制.方法:以体外MLTC-1细胞培养为模型,分别加入2 mL的培养基以及终浓度为0.01 mg/mL、0.1 mg/mL、1 mg/mL的养精胶囊水提物,并将其分别作为对照组和养精胶囊低、中、高剂量组,作用24 h.通过ELISA测定细胞上清睾酮和游离睾酮浓度,通过qRT-PCR、Western Blot分别检测养精胶囊对MLTC-1中Ln?cRNA H19 mRNA、StAR mRNA以及StAR蛋白表达的影响.结果:养精胶囊水提物可以显著提高MLTC-1细胞上清睾酮和游离睾酮浓度,同时还可以明显促进LncRNA H19 mRNA以及StAR mRNA和蛋白的表达水平,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:养精胶囊可以通过LncRNA H19调控StAR,进而增加睾酮合成.

目的:探讨中药养精颗粒对男性不育患者精液质量及精浆微小核糖核酸424(miR-424)水平变化的影响.方法:将90例特发性少弱精子症患者随机分为对照组和治疗组各45例,对照组口服天然维生素E胶囊,治疗组口服养精颗粒,两组均治疗3个月.观察两组治疗前后精液量、精子浓度、精子前向活力、精子DNA碎片指数(DFI)及精浆miR-424水平变化情况.结果:与治疗前相比,治疗后对照组精子前向运动力及治疗组精液量、精子浓度、精子前向活力、精浆miR-424水平显著升高,治疗组DFI明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且治疗组精液量、精子浓度、精子前向活力、精浆miR-424水平高于对照组,DFI低于对照组(P<0.05).结论:养精颗粒能提高不育患者的精液量、精子浓度、活力,降低精子DFI值,其对精子质量的影响可能与调节精浆miR-424水平有关.