目的:了解杭州市淡色库蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性，探究淡色库蚊的击倒抗性（knock down resistance，kdr）基因突变情况，为该地区淡色库蚊防治提供科学依据。方法:2022年9月，在杭州市上城区、拱墅区国家监测点不同方位采集淡色库蚊幼虫和蛹，在实验室饲养繁殖，按照世界卫生组织推荐的成蚊接触筒法和幼虫浸渍法测定其对3种常用拟除虫菊酯类杀虫剂（氯菊酯、溴氰菊酯、高效氯氰菊酯）的抗药性。提取单只淡色库蚊成蚊基因组DNA，经PCR扩增和Sanger测序，检测kdr基因突变情况。结果:杭州市淡色库蚊成蚊接触0.25%氯菊酯、0.025%溴氰菊酯和0.025%高效氯氰菊酯的24 h死亡率分别为20.00%（15/75）、17.33%（13/75）和18.67%（14/75），均表现为抗性。淡色库蚊幼虫对氯菊酯、溴氰菊酯和高效氯氰菊酯的抗性倍数分别为27.08、341.00和15.88倍。共检测183只拟除虫菊酯类杀虫剂诊断剂量下存活成蚊的kdr基因，其中180只成蚊检测出kdr基因第1014位点（L1014）的基因突变，突变率为98.36%；共检测42只拟除虫菊酯类杀虫剂诊断剂量下死亡成蚊的kdr基因，其中5只成蚊检测出kdr基因L1014的基因突变，突变率为11.90%。结论:杭州市淡色库蚊对氯菊酯、溴氰菊酯和高效氯氰菊酯均产生了不同程度的抗药性，且抗性蚊虫kdr基因也存在较高频率的突变。应加强对杭州市淡色库蚊抗药性监测，合理使用化学杀虫剂。

目的 了解海南省埃及伊蚊抗性水平,为制定当地登革热媒介埃及伊蚊防控措施提供参考.方法 2020年,在海南省儋州和昌江2地采集埃及伊蚊的幼虫和蛹,繁殖至子一代(F1).采用成蚊接触筒法测定埃及伊蚊对常用杀虫剂的抗性,然后利用等位基因特异性聚合酶链反应(allele-specific polymerase chain reaction,AS-PCR)法测定埃及伊蚊击倒抗性(knockdown resistance,kdr)基因V1016G和F1534C突变情况.结果 海南昌江与儋州埃及伊蚊接触溴氰菊酯(0.03%)、氯菊酯(0.40%)、高效氯氰菊酯(0.04%)和高效氯氟氰菊酯(0.02%)4种拟除虫菊酯类杀虫剂1h的击倒率差异无统计学意义,24 h后的死亡率分别为95.56%、85.56%、81.11%、48.89%与94.44%、68.60%、61.11%、30.00%,除溴氰菊酯(0.03%)外,其他差异有统计学意义.昌江埃及伊蚊接触残杀威(0.03%)和噁虫威(0.20%)2种氨基甲酸酯类杀虫剂的死亡率均为100.00%,儋州埃及伊蚊分别为100.00%和98.89%;昌江与儋州埃及伊蚊接触马拉硫磷(1.50%)、毒死蜱(0.80%)2种有机磷类死亡率均为100.00%,接触杀螟硫磷(0.25%)死亡率分别为100.00%和98.89%.海南儋州和昌江埃及伊蚊检测到V1016G和F1534C 2种突变,其突变频率分别为12.50%(20/160)和97.50%(156/160),差异有统计学意义(χ2=233.54,P<0.001),其中昌江埃及伊蚊同时存在V1016G和F1534C突变,其突变频率分别为20.00%和100.00%,而儋州埃及伊蚊仅F1534C发生突变,突变频率为98.75%.结论 海南省埃及伊蚊对溴氰菊酯、氯菊酯、高效氯氰菊酯和高效氯氟氰菊酯4种杀虫剂均产生不同程度的抗性,但对残杀威、噁虫威、马拉硫磷、毒死蜱和螟硫磷均为敏感,其击倒抗性基因以F1534C突变为主.

目的 了解广东省珠海市白纹伊蚊击倒抗性(kdr)基因分布情况及其对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性程度,为该地区蚊虫防治提供科学依据.方法 2023年8-9月分别在珠海市5个行政区采集野外白纹伊蚊幼虫,带回实验室饲养至成蚊,通过形态学鉴定后提取单只成蚊的基因组DNA.扩增电压门控钠离子通道(VGSC)基因片段并进行基因测序后,使用SnapGene软件分析kdr基因的突变情况.使用世界卫生组织推荐的幼虫浸渍法,测定白纹伊蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性水平,利用SPSS 20.26软件计算毒力回归方程和幼虫的半数致死浓度(LC50).结果 珠海市野外种群白纹伊蚊在V1016和F1534位点均检测到kdr基因突变.5个行政区的154只白纹伊蚊发现1016位点野生型纯合子V/V(94.81%)和突变型纯合子G/G(5.19%)2种基因型;1534位点发现8种基因型,即野生型纯合子F/F(45.45%),野生/突变型杂合子F/C(1.30%)、F/S(18.18%)与F/L(0.65%),突变型纯合子C/C(13.64%)、S/S(10.39%)、L/L(9.74%)和突变型杂合子S/L(0.65%).5个行政区白纹伊蚊幼虫对溴氰菊酯的抗性倍数为12.00～26.00,其中香洲区和高新区、金湾区呈高抗性水平,其余行政区均呈中抗性水平;对高效氯氰菊酯的抗性倍数为10.33～17.33,5个行政区均呈中抗水平;对氯菊酯的抗性倍数为4.10～7.40,5个行政区均呈低抗水平.结论 珠海市白纹伊蚊野外种群已对3种拟除虫菊酯类杀虫剂表现出不同程度的抗性,并且观察到较高频率的kdr基因突变.蚊虫抗性水平的持续监测可为杀虫剂合理使用和延缓抗性产生提供科学基础.

目的 了解贵阳市白纹伊蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性程度并检测击倒抗性基因突变,为该地区白纹伊蚊防治提供科学依据.方法 2022年7-8月在贵阳市不同方位采集白纹伊蚊幼虫,带回实验室饲养至F1～F2代,采用幼虫浸渍法和成蚊接触筒法测定其对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性;单只提取白纹伊蚊成蚊基因组DNA,采用普通PCR扩增后直接测序的方法分析击倒抗性基因突变.x2检验用于分析各组间突变基因频率差异.结果 贵阳市白纹伊蚊幼虫对溴氟菊酯、氯菊酯和高效氯氟菊酯的半数致死浓度(LC50)分别为0.559、0.021和0.012 mg/L,抗性倍数分别为433.33、46.67和16.44倍;0.03％溴氟菊酯、0.4％氯菊酯和0.08％高效氯氰菊酯处理后白纹伊蚊成蚊的死亡率均＜80.00％;敏感品系白纹伊蚊在1016、1532和1534基因位点均未检测到突变,自然种群白纹伊蚊在3个位点均检测到击倒抗性基因突变.1016位点有2种等位基因,即野生型GTA(V)(76.35％)和突变型GGA(G)(23.65％),其敏感表型与抗性表型突变基因频率差异无统计学意义(x2=1.810,P=0.178);有3种基因型,即野生型纯合子V/V(58.78％)、野生/突变型杂合子V/G(35.14％)和突变型纯合子G/G(6.08％).1532位点有2种等位基因,即野生型ATC(Ⅰ)(99.83％)和突变型ACC(T)(0.17％);有2种基因型,即野生型纯合子Ⅰ/Ⅰ(99.66％)和野生/突变型杂合子I/T(0.34％).1534位点有2种等位基因,即野生型TTC(F)(48.48％)和突变型TCC(S)(51.52％),其敏感表型与抗性表型突变基因频率差异无统计学意义(x2=0.603,P=0.437);有3种基因型,即野生型纯合子F/F(8.11％)、野生/突变型杂合子F/S(80.74％)和突变型纯合子S/S(11.15％).结论 贵阳市白纹伊蚊幼虫和成蚊对3种拟除虫菊酯类杀虫剂均已产生中高抗性,并发生击倒抗性基因突变,但未发现其基因突变与抗性表型有明显关联;可持续监测该地区白纹伊蚊抗药性水平,指导杀虫剂科学合理使用,以有效防治蚊虫和延缓杀虫剂抗性产生和发展.

[目的]研究中华按蚊Anopheles sinensis细胞色素P450基因AsCYP9J5是否与溴氰菊酯抗性有关.[方法]PCR克隆中华按蚊AsCYP9J5的开放阅读框并进行生物信息学分析.采用RT-qPCR检测AsCYP9J5在中华按蚊溴氰菊酯敏感品系(WX-LS)和抗性品系(YN-LR和CQ-LR)雌蛹和雌成蚊以及WX-LS雌蛹头、胸、腹部前3节(腹部前端)、腹部剩余部分(腹部后端)和25 mg/mL溴氰菊酯诱导体外培养的雌蛹头中的表达量.基于上述AsCYP9J5表达量,于YN-LR和CQ-LR化蛹后20 h时雌蛹头部注射dsAsCYP9J5和dsEGFP进行RNAi,采用RT-qPCR检测成蚊中AsCYP9J5的表达量,统计溴氰菊酯处理后成蚊半数击倒时间(half knockdown time,KT50)、击倒率和死亡率.通过分子对接模拟预测AsCYP9J5与溴氰菊酯相互作用的氨基酸残基.[结果]克隆获得AsCYP9J5开放阅读框,全长1 626 bp,编码541个氨基酸,无信号肽和跨膜结构域.AsCYP9J5在YN-LR和CQ-LR不同发育阶段表达量不同,化蛹末期至羽化后9 h在YN-LR中的表达量显著高于在WX-LS中的,在化蛹后30 h至羽化后72 h期间CQ-LR中高表达,各发育阶段(化蛹后20 h除外)CQ-LR中的表达量均显著高于在WX-LS中的;AsCYP9J5在WX-LS雌蛹头部的表达量最高,其次是在胸部,而在腹部前端和腹部后端的表达量接近并最低.溴氰菊酯诱导12 h时WX-LS雌蛹头部AsCYP9J5的表达量比对照组上调了 11倍,诱导24 h时AsCYP9J5的表达量略低于对照组.与注射dsEGFP的对照组相比,注射dsAsCYP9J5的YN-LR和CQ-LR处理组成蚊AsCYP9J5的表达量分别下调了约68％和38％,分别约提前10和20 min出现明显的击倒现象,击倒率明显升高,死亡率分别增加了 28.6％和24.0％,表明沉默AsCYP9J5导致中华按蚊对溴氰菊酯的敏感度显著增加.分子对接模拟结果显示,溴氰菊酯可以进入AsCYP9J5的结合口袋,并且与Arg-488形成二元的Pi-阳离子相互作用,与AsCYP9J5的Phe-109发生稳定的T型Pi-Pi叠合,与Cys-348和Thr-344形成Pi-硫与Pi-孤对电子相互作用,侧链可以与AsCYP9J5的Gln-224形成稳定氢键相互作用,也可以与Ile-227,Leu-413和Lys-53形成稳定的疏水相互作用网络.[结论]本研究结果表明AsCYP9J5参与中华按蚊溴氰菊酯抗性表型的维持,这为进一步探究该基因编码的蛋白酶代谢溴氰菊酯的分子机理奠定了前期基础.

目的 检测广西壮族自治区南宁市登革热媒介白纹伊蚊现场种群的击倒抗性基因型及其分布特点,以了解其抗药性水平,为科学防控白纹伊蚊提供依据.方法 2022年在南宁市采用勺捕法采集伊蚊幼蚊,送实验室饲养至成虫,经形态学方法鉴定后,将白纹伊蚊用75％乙醇溶液浸泡,于-20℃保存备用.采用磁珠法试剂盒提取单只成蚊DNA,PCR扩增电压门控钠离子通道(VGSC)基因部分片段,测序结果在美国国立生物技术信息中心进行BLAST比对,对确认为白纹伊蚊VGSC基因的序列使用DNAStar 7.1分析其VGSC基因单位点及多位点联合突变情况.结果 共检测175只白纹伊蚊,获得350条基因序列,长度约为400 bp,VGSC基因1532位点未发现突变,1016和1534位点均存在突变.1016位点有2种等位基因,分别为野生型1016V(148,78.28％)和突变型1016G(49,21.72％);3种基因型分别为野生型纯合子1016V/V(126,72.00％)、突变型纯合子1016G/G(27,15.43％)和野生/突变型杂合子1016V/G(22,12.57％).1532位点有1种等位基因,即野生型1532I(175,100％);基因型均为野生型纯合子1532I/I.1534位点有3种等位基因,分别为野生型1534F(51,16.86％)、突变型1534S(116,36.29％)和突变型1534C(135,46.85％);6种基因型分别为野生型纯合子1534F/F(8,4.57％)、野生/突变型杂合子1534F/S(21,12.00％)、野生/突变型杂合子1534F/C(22,12.57％)、突变型杂合子1534S/C(64,36.57％)、突变型纯合子1534S/S(21,12.00％)和突变型纯合子1534C/C(39,22.29％).结论 南宁市VGSC基因突变率较高,应密切关注白纹伊蚊抗药性水平,科学、规范、高效地指导卫生杀虫剂的使用.

近20 多年,臭虫(Cimex spp.)在世界范围内成为常见的卫生害虫,其防治主要采用化学防治,但很多种群发现击倒抗性(Knockdown resistance gene,kdr)基因突变的存在以及抗药性.监测kdr的发生频率以及不同种群对农药的抗性对臭虫有效防治很重要,但我国对臭虫种群的抗药性报道很少.本试验采用点滴法测定了 1 个温带臭虫Cimex lectularius野外种群对氯虫苯甲酰胺、呋虫胺、吡虫啉、噻虫嗪和高效氯氰菊酯等5 种药剂的毒性及抗性水平,使用区分剂量快速鉴定抗性方法对2 个温带臭虫和2 个热带臭虫Cimex hemipterus种群对高效氯氰菊酯的抗性水平进行了检测,此外用PCR方法检测8 个臭虫地理种群(1 个温带臭虫实验室种群,1 个温带臭虫野外种群和6 个热带臭虫野外种群)174 个个体的kdr突变频率.点滴法结果表明,5 种杀虫剂对温带臭虫的毒性是吡虫啉和呋虫胺>噻虫嗪>氯虫苯甲酰胺和高效氯氰菊酯,测试的野外温带臭虫种群仅对噻虫嗪无明显抗性.热带臭虫2 个野外种群对高效氯氰菊酯的抗性均远高于温带臭虫.在温带臭虫的实验室种群中未检测到突变,在野外种群中检测到了V419L和L925I突变,可分为 2 种基因型类型(A:无突变位点;B:同时有L925I和V419L),而在热带臭虫的6 个种群检测到M918I和L1014F突变,只有 1 种基因型类型,即M918I和L1014F双位点突变.温带臭虫1 个野外种群及热带臭虫6 个野外种群kdr突变的存在与臭虫对高效氯氰菊酯敏感密切关联.基于kdr基因突变检测结果推测我国臭虫种群广泛存在对拟除虫菊酯的抗性.

目的 分析经接触DDT和溴氰菊酯敏感性测定的三带喙库蚊(Culextritae niorh ynch us)的抗性(存活)与敏感(死亡)表型样本的击倒抗性基因(knockdown resistance,kdr)序列,阐明其抗性表型与kdr基因突变的关系. 方法 收集云南昭阳、芒市、江城和孟连等地的三带喙库蚊经接触DDT和溴氰菊酯测定后死亡和存活的个体,分别提取单蚊基因组DNA,PCR扩增kdr部分基因片段,测定和分析序列,统计抗性与敏感表型个体中kdr突变的基因型和频率,采用x2检验分析kdr基因突变与抗性表型的相互关系. 结果 共获得411条三带喙库蚊kdr基因序列,检测结果显示,在1014位点存在突变,等位基因有2种,即野生型TTA/L和突变型TTT/F;基因型共3种,分别为野生型纯合子L/L,突变型纯合子F/F,以及野生型/突变型杂合子L/F,频率分别为96.35％ (396/411)、0.73％ (3/411)和2.92％(12/411).在接触DDT的抗性与敏感表型个体中,突变基因型频率分别为3.42％(4/117)和3.88％ (4/103);在接触溴氰菊酯的抗性与敏感个体中,突变基因型频率为3.96％(4/101)和3.33％ (3/90).接触DDT和溴氰菊酯的三带喙库蚊抗性与敏感表型与kdr基因型频率无相关性(x2=0.034,P＞0.05;x2=0.053,P＞ 0.05). 结论 云南省三带喙库蚊中发现kdr新的等位基因L1014F,但频率较低.该蚊对DDT和溴氰菊酯产生抗性与kdr基因突变未见相关性.

目的 检测我国白纹伊蚊现场群体的击倒抗性(kdr)基因突变,初步探讨现场群体kdr基因的适应性进化.方法 2016年10月及2017年6-10月,在上海市杨浦区、江苏省南京市、浙江省杭州市和云南省景洪市外环境或公园白纹伊蚊孳生地舀取蚊幼虫和蛹,带回实验室饲养至成蚊;或直接采集成蚊.鉴定种类后,单只蚊抽提基因组DNA,PCR扩增神经细胞膜上电压门控钠离子通道(VGSC)基因部分片段,测序并进行序列分析,检测kdr基因突变情况,应用GENPOP软件进行连锁不平衡和哈代-温伯格平衡检验.结果 共检测4个现场群体299只白纹伊蚊,发现kdr基因I1532和F1534位点突变.1532位点有2种等位基因,分别为野生型ATC/I(91.30％)和突变型ACC/T(8.70％);1534位点共有5种等位基因,分别为野生型TTC/F,突变型TCC/S、TCG/S、TTG/L和TGC/C,等位基因频率为45.99％、52.01％、0.33％、1.00％和0.67％.2个位点同时突变的个体共有27个(9.03％).群体符合哈代-温伯格平衡(P>0.001),2个位点在遗传中为连锁关联关系(P<0.01).结论 首次记录了我国白纹伊蚊群体在1532位点存在突变I1532T和1534位点新的突变等位基因TCG/S,以及1个个体存在2个位点同时突变的新问题.结果提示,4个白纹伊蚊现场群体对菊酯类杀虫剂已产生抗性,多个位点突变可能与杀虫剂的选择压力有关.

菊酯杀虫剂长期使用会导致昆虫产生抗性, 严重影响德国小蠊等有害昆虫的治理.德国小蠊产生菊酯击倒抗性 (kdr) 与钠离子通道发生kdr突变有关.本文介绍了德国小蠊钠离子通道的跨膜分子结构、功能和基因表达调节方式, 同时讨论了钠离子通道kdr突变导致德国小蠊产生菊酯抗性的机制.理解钠离子通道kdr突变机制, 不仅为德国小蠊种群抗性监控提供有效分子靶标, 还可为新型杀虫剂研制提供思路.