基孔肯雅病毒(Chikungunya virus，CHIKV)隶属披膜病毒科的甲型病毒属，可通过埃及伊蚊和白蚊伊蚊传播，主要引起以高热、皮疹、多发性关节炎/多关节痛为主要临床症状的基孔肯雅热(Chikungunya fever，CHIKF)，是全球关注的重要公共卫生威胁。目前仍无针对基孔肯雅病毒的疫苗和有效的抗病毒药物。本篇综述简要概述基孔肯雅病毒的基因组与流行病学特征、主要抗原的免疫应答特点及疫苗的最新研发进展。

目的:阐明2020—2021年瑞丽市登革热流行特征和伊蚊分布特点。方法:用描述流行病学方法对登革热病例和伊蚊监测资料进行分析。结果:这两年瑞丽市共确诊登革热259例，其中2020年249例（本地病例245例，输入病例4例），发病率为116.89/10万；2021年10例（本地病例9例，输入病例1例），发病率为4.75 /10万。主要流行于主城区、勐卯镇、姐告开发区和畹町镇。病例主要发生于7—11月，以青壮年为主，男性明显多于女性，职业主要为商业服务者、家务及待业者和学生。布雷图指数6—11月为10~58，其他月份为<5，白纹伊蚊、埃及伊蚊和其它蚊种构成比分别为40.41%、35.72%和23.87%。结论:瑞丽市2020—2021年每年都发生登革热本地流行，发病率下降与新型冠状病毒肺炎边境管制下登革热输入病例减少和本地流行减弱有关。

目的 分析2019-2023年思明区登革热媒介伊蚊密度、季节消长规律,为预防控制登革热提供科学依据.方法 采用布雷图指数法(BI)、容器指数法(CI),对辖区10个街道每月开展登革热媒介伊蚊蚊幼监测;利用Execl进行数据整理分析,SPSS 19.0软件分析容器阳性率的差异性.结果 2019-2023年监测到的登革热媒介伊蚊均为白纹伊蚊,未发现埃及伊蚊,年均BI为8.34,不同街道BI呈现出不同的变化趋势,滨海、筼筜、梧村街道的BI在5年间呈现逐步上升的趋势,鼓浪屿、开元、嘉莲、中华、鹭江、莲前街道BI先升后降,厦港街道BI在6～7间波动;6-8月(夏季)是BI的高峰期;5年年均CI为48.67％,监测显示孳生地种类中闲置容器(碗、瓶等)积水最多(占比61.00％),竹头、树洞、石穴阳性率最高(70.97％).5年间容器阳性率差异有统计学意义(x2=945.916,P＜0.05),不同容器(水体)间阳性率差异有统计学意义(x2=466.083,P＜0.05).结论 思明区全年均监测到白纹伊蚊幼蚊孳生活动,存在登革热传播风险,应加强环境整治,开展公众健康教育及宣传,降低登革热传播及流行的风险.

目的 了解海南省埃及伊蚊抗性水平,为制定当地登革热媒介埃及伊蚊防控措施提供参考.方法 2020年,在海南省儋州和昌江2地采集埃及伊蚊的幼虫和蛹,繁殖至子一代(F1).采用成蚊接触筒法测定埃及伊蚊对常用杀虫剂的抗性,然后利用等位基因特异性聚合酶链反应(allele-specific polymerase chain reaction,AS-PCR)法测定埃及伊蚊击倒抗性(knockdown resistance,kdr)基因V1016G和F1534C突变情况.结果 海南昌江与儋州埃及伊蚊接触溴氰菊酯(0.03%)、氯菊酯(0.40%)、高效氯氰菊酯(0.04%)和高效氯氟氰菊酯(0.02%)4种拟除虫菊酯类杀虫剂1h的击倒率差异无统计学意义,24 h后的死亡率分别为95.56%、85.56%、81.11%、48.89%与94.44%、68.60%、61.11%、30.00%,除溴氰菊酯(0.03%)外,其他差异有统计学意义.昌江埃及伊蚊接触残杀威(0.03%)和噁虫威(0.20%)2种氨基甲酸酯类杀虫剂的死亡率均为100.00%,儋州埃及伊蚊分别为100.00%和98.89%;昌江与儋州埃及伊蚊接触马拉硫磷(1.50%)、毒死蜱(0.80%)2种有机磷类死亡率均为100.00%,接触杀螟硫磷(0.25%)死亡率分别为100.00%和98.89%.海南儋州和昌江埃及伊蚊检测到V1016G和F1534C 2种突变,其突变频率分别为12.50%(20/160)和97.50%(156/160),差异有统计学意义(χ2=233.54,P<0.001),其中昌江埃及伊蚊同时存在V1016G和F1534C突变,其突变频率分别为20.00%和100.00%,而儋州埃及伊蚊仅F1534C发生突变,突变频率为98.75%.结论 海南省埃及伊蚊对溴氰菊酯、氯菊酯、高效氯氰菊酯和高效氯氟氰菊酯4种杀虫剂均产生不同程度的抗性,但对残杀威、噁虫威、马拉硫磷、毒死蜱和螟硫磷均为敏感,其击倒抗性基因以F1534C突变为主.

CRISPR/Cas9基因编辑系统自问世以来,极大地推进了人类对生物基因功能的认识.CRISPR/Cas9通常采用显微注射昆虫胚胎的途径来递送基因编辑试剂,由于昆虫具有多种生殖方式,因此对于某些昆虫种类如具有坚硬卵鞘的蟑螂和胎生的蚜虫等,应用传统的CRISPR/Cas9系统的递送方式来了解其基因功能就难以实现.目前,在传统的CRISPR/Cas9递送方式上发展出来的不需要注射昆虫早期单细胞胚胎的方法已有相关报道:ReMOT(receptor-mediated ovary transduction)和 DIPA-CRISPR("direct parental"CRISPR),它们可以将编辑试剂直接注射到成年雌性个体的血腔中,能够有效地在发育中的卵母细胞中引入遗传突变,同时简化了基因编辑的过程,这类方法已经成功应用于埃及伊蚊、德国小蠊和赤拟谷盗等昆虫的研究.本文对CRISPR/Cas9系统的结构、作用机制、传统递送方式及其发展出的ReMOT和DIPA-CRISPR递送方法在昆虫研究中的应用现状与前景进行了综述,以期为更多物种的基因编辑研究提供参考.

目的 建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片技术的快速检测蚊媒携带登革病毒的方法.方法 根据登革病毒衣壳蛋白(C)、前膜蛋白(prM)和非结构蛋白2A(NS2A)基因片段构建pUC-GW-Amp-CprM和pUC-GW-Amp-NS2A质粒,设计多组环介导等温扩增特异性引物组.制备LAMP微流控芯片,以靶基因质粒、登革病毒核酸为模板进行检测,根据起峰时间、相对荧光单位、假阳性、重复实验稳定性、检测灵敏度等指标筛选最优引物组.用最优引物组分别检测埃及伊蚊、白纹伊蚊等主要登革热传播媒介和常见的致倦库蚊、中华按蚊、摇蚊的cDNA,并与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒等常见蚊媒传播病原体进行交叉检测,评价LAMP法的特异性.评价LAMP法检测CprM和NS2A靶基因质粒的灵敏度,分别与PCR、实时荧光定量PCR(qPCR)检测结果进行比较.用登革病毒RNA与传播媒介埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA分别以1∶10、1∶100和1∶1 000混合,模拟媒介携带登革病毒的样品进行LAMP微流控芯片检测.对采集自宁德市三都岛、西安市、上海朱家角、长兴岛和五角场等5地的白纹伊蚊的cDNA进行检测.结果 引物组筛选结果显示,CprMG2和NS2AG1引物组起峰时间早,相对荧光单位高,灵敏度最高,为最优引物组.CprMG2引物组可检测浓度低至10-6ng/μl的pUC-GW-Amp-CprM质粒,最低检测限为1.3 × 103拷贝;NS2AG1引物组可检测浓度低至10-9 ng/pl的pUC-GW-Amp-NS2A质粒,最低检测限为1拷贝.最优引物组CprMG2、NS2AG1对埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊、致倦库蚊、摇蚊等蚊虫cDNA无非特异性扩增,与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒核酸无交叉反应.LAMP微流控芯片检测CprM靶基因的最低检测限为1.3 × 103拷贝,较PCR检测的最低检测限(1.3 × 104拷贝)高1个数量级;LAMP微流控芯片检测CprM和NS2A靶基因的最低检测限分别为1.3×103拷贝、1拷贝,与qPCR检测的最低检测限(1.3 × 103拷贝、1拷贝)相当.LAMP微流控芯片检测模拟现场样品的结果显示,CprMG2可检出与埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA 1∶10、1∶100和1∶1 000混合的登革病毒RNA,NS2AG1最低可检出1∶100混合的登革病毒,特异性均为100％.LAMP微流控芯片检测5地现场采集白纹伊蚊的结果均为阴性.结论 建立了基于LAMP微流控芯片检测登革病毒的方法,该法敏感性和特异性高,检测时间短,可用于现场蚊媒携带登革病毒的检测.

目的 分析 2015-2021 年芜湖市输入性登革热病例流行病学特征,了解媒介伊蚊分布特点,为登革热风险评估和疫情防控提供科学依据.方法 采用描述流行病学方法对输入性登革热病例资料进行流行病学特征分析;采用布雷图指数法对媒介伊蚊监测并收集数据统计分析.结果 2015-2021 年芜湖市共报告登革热病例12 例,均为输入性病例;病例多集中在7-10 月,共报告9 例,占报告病例总数的75.0%;输入病例男性11 例,女性 1 例,病例年龄集中在 20～49 岁组;东南亚国家输入 11 例,国内其它省输入 1 例.媒介伊蚊监测未发现埃及伊蚊;2015-2021 年平均布雷图指数范围为 9.5～19.1,其中每年的 7-8 月为平均布雷图指数较高期间(16.1～19.1),10 月份平均布雷图指数最低(7.0);调查蚊幼的孳生地类型以闲置容器积水数量最多(2 483 处),占积水总数的 57.1%;其孳生有伊蚊幼虫的阳性数也最多(448 处),阳性率为 18.0%.结论 芜湖市输入性登革热病例以东南亚国家输入为主,输入时间和地点存在不确定性,2020-2021 年受新冠肺炎疫情影响无输入性病例报告,主要媒介白纹伊蚊在芜湖市孳生地的类型多样、数量较多,每年 7-8 月白纹伊蚊平均密度较高,提示存在本土登革热疫情暴发的可能,今后需持续加强对输入性病例的监测和健全媒介伊蚊监测网络,适时开展疫情风险评估.

为了解云南省西双版纳傣族自治州(西双版纳州)登革热流行季节城区的媒介伊蚊携带虫媒病毒的种类,对 2018 年 8-10 月在西双版纳州城区采集的媒介伊蚊(白纹伊蚊和埃及伊蚊)和 7-11 月采集的登革病毒(dengue virus,DENV)NS1 阳性血清采用实时荧光RT-PCR进行DENV分型检测,用RT-PCR扩增DENV E基因.用 C6/36 白纹伊蚊细胞对蚊悬液进行病毒分离,对有细胞病变效应(cytopathic effects,CPE)的分离物进行虫媒病毒和昆虫特异病毒 RT-PCR 检测.对阳性的 RT-PCR 扩增产物测序后采用BLAST 在线将序列与 GenBank 数据库中相似序列进行比对,用MEGA7 进行进化分析.结果从 51 组伊蚊(共1 431 只)中检测到2 组埃及伊蚊为DENV-1 阳性,从54 份血清中检测到52 份为DENV-1 阳性,得到1 条来源于埃及伊蚊和 27 条血清来源的DENV-1 E基因序列,蚊虫来源的E基因与血清来源的E基因核苷酸相似性为 97.4%～100.0%,均属于基因Ⅰ型,与近年东南亚国家流行的DENV-1 进化关系最近.从分离到的 18 株有CPE的培养液中鉴定出 17 株拉蒂纳病毒(La Tina virus,LTNV,属于黄病毒科)和 4 株砂拉越病毒(Sarawak virus,SWKV,属于T4 病毒科),其中 3 株为LTNV和SWKV同时检测阳性.本研究结果表明,西双版纳州媒介伊蚊中携带DENV、LTNV和SWKV,有必要持续开展虫媒病毒和昆虫特异性病毒的调查和研究.

AAlagille综合征Alagille综合征误诊为胆道闭锁1例并文献复习(符高佳,林道炯),(7):(773)埃博拉病毒病 埃博拉病毒病——病死率极高的人畜共患病(殷启凯,梁国栋),(1):(1)艾滋病 武汉市男男性行为人群艾滋病非职业暴露后预防用药需求及影响因素(刘玉新,孔德广,王夏,等),(2):(167)按蚊 中国传疟媒介按蚊幼虫防制的主要实践及基本策略(王海防,周正斌,肖宁,等),(12):(1294)埃及伊蚊 氟虫腈处理埃及伊蚊幼虫的转录组学分析(王凯旋,索鹏辉,赵培真,等),(5):(462)利用无缝克隆方法构建埃及伊蚊表皮蛋白基因AaCPR100A双向启动子苏云金芽孢杆菌穿梭载体(马晨昕,张莹心,刘思寒,等),(11):(1141)

目的 构建表达dsRNA的双向启动子以及靶基因AaCPR100A的大肠杆菌-苏云金芽孢杆菌穿梭载体pHT315-AaCPR100A.方法 以苏云金芽孢杆菌pSVP27A质粒为模板通过PCR扩增苏云金芽孢杆菌Cry3A正向启动子Pro-1(+);以埃及伊蚊RNA反转为cDNA为模板,扩增靶基因AaCPR100A;将大肠-苏云金穿梭载体pHT315质粒经Hind Ⅲ和Sal Ⅰ双酶切线性化;按照转录方向将正向启动子与靶基因通过无缝克隆插入穿梭载体pHT315中;以生物合成的含有Cry3A反向启动子序列的质粒为模版,经PCR克隆扩增Pro-1(-)反向启动子;将含有正向启动子与靶基因的中间载体通过EcoRⅠ限制性酶切酶线性化,按转录方向在靶基因下游通过无缝克隆插入反向启动子.结果 经琼脂糖凝胶电泳检测,正向启动子、靶基因AaCPR100A和反向启动子PCR产物条带清晰,质量良好,可用于无缝克隆实验;经无缝克隆连接双向启动子以及靶基因片段后,对含有重组载体pHT315-AaCPR100A的重组质粒进行PCR验证,在重组载体中成功扩增正向启动子、靶基因片段以及反向启动子,经核苷酸测序验证双向启动子序列以及靶基因序列测序结果与序列比对结果基本一致,符合构建载体元件的要求,证明重组载体构建成功.结论 本研究利用无缝克隆技术成功构建含有双向启动子以及靶基因的重组穿梭载体,为构建表达伊蚊表皮蛋白基因AaCPR100A dsRNA的苏云金芽孢杆菌工程菌奠定基础.