目的 探讨乌司他丁联合奥曲肽在新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)的临床疗效.方法 纳入新生儿坏死性小肠结肠炎患儿89例,按随机数表法分为对照组与观察组.对照组45例予奥曲肽治疗,观察组44例予奥曲肽联合乌司他丁治疗.比较2组临床症状改善情况,检测2组肠道菌群指标以及炎性因子指标C反应蛋白(CRP)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8),测定2组细胞免疫功能指标抗原分化簇4受体(CD4+)、抗原分化簇8受体(CD8+)、CD4+/CD8+,比较2组不良反应发生情况.结果 观察组临床症状改善优于对照组(P＜0.05).治疗后,2组肠道菌群指标高于治疗前,观察组高于对照组(P＜0.05);2组炎性因子指标低于治疗前,观察组低于对照组(P＜0.05);2组CD4+、CD4+/CD8+指标高于治疗前,CD8+指标低于治疗前,观察组免疫功能指标改善优于对照组(P＜0.05);2组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 乌司他丁联合奥曲肽治疗新生儿坏死性小肠结肠炎,能改善患儿临床症状、肠道菌群失调、炎性因子水平与免疫功能,安全性良好.

目的:分析结膜淋巴上皮癌的临床病理学和基因突变特征。方法:回顾性病例系列研究。收集2006年1月至2022年12月于天津市眼科医院诊断为结膜淋巴上皮癌且接受肿瘤切除手术的3例患者资料和4份石蜡标本（其中1例患者先后行2次手术），采用免疫组织化学染色方法检测上皮抗原和淋巴细胞性抗原，采用原位杂交方法检测Epstein-Barr病毒（EBV）编码的RNA（EBER），应用二代测序方法对2例患者的3份标本进行全外显子组测序。结果:3例患者均为男性，年龄均大于65岁，病程3~44个月。均为单眼发病，肿瘤位于球结膜或角结膜缘，呈红色，肿瘤最大径4~20 mm。影像学检查显示肿瘤位于眼球前方，眶骨、眼外肌、视神经和副鼻窦未受累。所有患者均无局部淋巴结转移。病理表现为未分化癌巢伴有显著的反应性淋巴细胞、浆细胞浸润；肿瘤细胞呈广谱细胞角蛋白、上皮膜抗原、肿瘤蛋白40和肿瘤蛋白63阳性，细胞增殖抗原Ki67增殖指数大于80%；淋巴细胞分化簇20阳性、CD3阳性、CD8阳性；原位杂交显示例1患者的2份标本部分瘤细胞表达EBER。二代测序显示3份标本发生体细胞突变的基因个数分别为58、50和36个，突变基因参与的信号通路富集于黑色素瘤信号通路、缺口蛋白1信号通路和大鼠肉瘤同源物家族Q三磷酸鸟苷酶循环；生化过程富集于氨基酸饥饿后反应，程序性坏死，调控脂类合成、钠离子转运和染色体分离等；3份标本均发生突变的基因是癫痫阈值2（SZT2），并且SZT2参与氨基酸饥饿后反应。1例行部分切除手术后40个月行第2次完整切除手术，另外2例行完整切除手术；3例均未行放射治疗或化学治疗，2例未复发，1例失访。结论:结膜淋巴上皮癌伴有明显的淋巴细胞、浆细胞浸润，部分病例与EBV感染有关，结膜淋巴上皮癌存在SZT2等基因突变。

目的 构建一株具备干细胞表型的胶质母细胞瘤细胞系Y1203,用于研究肿瘤细胞干性维持以及治疗耐药的潜在机制.方法 Y1203 细胞来源于一位 49 岁女性胶质母细胞瘤患者复发再手术切除的肿瘤组织.使用Y1203 细胞构建人源胶质母细胞瘤原位及皮下移植(patient derived tumor xenograft,PDX)模型.采用流式细胞术检测不同代数Y1203 细胞的细胞周期.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测Y1203 细胞的干细胞标志物转录因子SOX-2(transcription factor SOX-2,SOX2)和细胞黏附分子分化抗原簇-44(cluster of differentiation-44,CD44)表达.基于转录组测序技术(RNA sequencing,RNA-Seq)比较Y1203 细胞和U87 细胞表达谱差异.结果 短串联重复序列(short tandem repeats,STR)鉴定确认Y1203 细胞与患者肿瘤组织同源,且其与ExPASy数据库中涵盖的常见细胞系完全不同.基因检测结果提示异柠檬酸脱氢酶 1(isocitrate dehydrogenase 1,IDH1)无突变,端粒酶反转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)启动子突变,原癌基因(B-Raf proto-oncogene,BRAF V600E)、抑癌基因(tumor protein p53,TP53)和转录调控因子(ATRX chromatin remodeler,ATRX)基因突变.人胶质母细胞瘤细胞系Y1203 可实现在体外无限增殖并用于建立PDX模型.与其他胶质瘤细胞系相比,Y1203 细胞中高表达的肿瘤干细胞标志物为SOX2 和CD44,并显著富集胶质瘤干细胞相关通路.结论 人胶质母细胞瘤细胞系Y1203 分化低,恶性程度较高,对放射性治疗和化学治疗抵抗性强,具有胶质母细胞瘤干细胞特性.该细胞系的建立为胶质母细胞瘤临床前研究提供了实验基础.

目的 探讨乳腺癌患者血清透明质酸合成酶2(HAS2)和分化抗原簇44(CD44)水平的变化及其临床意义.方法 选取2020年1月—2021年6月上海交通大学医学院附属第六人民医院乳腺癌患者52例(乳腺癌组)、乳腺良性疾病患者40例(乳腺良性疾病组)、健康体检者34名(正常对照组).收集所有研究对象的临床资料,并检测血清HAS2和CD44水平.采用Pearson相关分析评估HAS2与CD44的相关性.采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清HAS2、CD44、癌胚抗原(CEA)和糖类抗原(CA)15-3单项检测和联合检测诊断乳腺癌的效能.结果 正常对照组、乳腺良性疾病组和乳腺癌组血清HAS2和CD44水平依次升高(P<0.000 1).Pearson相关分析结果显示,正常对照组、乳腺良性疾病组和乳腺癌组血清HAS2与CD44均呈正相关(r值分别为0.364 4、0.415 2、0.290 5,P<0.05).ROC曲线分析结果显示,血清HAS2、CD44、CEA、CA15-3单项检测和4项指标联合检测诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)分别为0.800、0.805、0.560、0.621、0.883;4项指标联合检测模型诊断早期(TNM分期 Ⅰ～Ⅱ)和晚期(TNM分期 Ⅲ～Ⅳ)乳腺癌的AUC分别为0.860、0.919.不同肿瘤大小、组织学分级、人表皮生长因子受体2(HER2)表达和有无淋巴转移的乳腺癌患者之间血清HAS2水平差异均有统计学意义(P<0.05),不同年龄、雌激素受体(ER)表达、孕激素受体(PR)表达、Ki67表达和有无脉管侵犯的乳腺癌患者之间血清HAS2水平差异均无统计学意义(P>0.05).不同临床病理特征的乳腺癌患者之间血清CD44水平差异均无统计学意义(P>0.05).血清HAS2诊断乳腺癌淋巴转移的AUC为0.739.结论 HAS2和CD44可作为乳腺癌的辅助诊断指标.血清HAS2水平与乳腺癌恶性进展密切相关,或可作为预后判断的指标之一.

目的 分析变异型分化抗原簇44(17)(CD44v17)在宫颈上皮内瘤变(CIN)向宫颈癌发生、发展中的表达及意义,探讨其与CIN及宫颈癌之间的关系.方法 实时荧光定量PCR检测CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ级和宫颈鳞状细胞癌组织中CD44v17、基质金属蛋白酶9(MMP9)和细胞核增殖相关抗原Ki67的表达;CD44v17siRNA干扰宫颈癌HeLa、SiHa细胞RNA后,检测CD44v17、MMP9和Ki67的表达;以CD44v17基因慢病毒颗粒作用于荷瘤裸鼠,分析CD44v17 siRNA对裸鼠成瘤能力的影响.结果 CD44v17的表达水平在CIN Ⅰ、CIN Ⅱ、CIN Ⅲ级和宫颈鳞状细胞癌组织中逐渐升高;以正常宫颈组织为对照,CD44v17、MMP9、Ki67表达水平在CIN Ⅰ级组织无明显上升(P＞0.05),在CIN Ⅱ、CIN Ⅲ级和宫颈鳞状细胞癌组织明显上升(P＜0.05);将CD44v17 siRNA转染宫颈癌细胞后,MMP9、Ki67的表达明显降低(P＜0.01);CD44v17基因慢病毒颗粒作用于荷瘤裸鼠后,肿瘤体积、质量均明显降低(P＜0.01),荷瘤裸鼠的成瘤能力降低.结论 CD44v17在CIN向宫颈癌发展的过程中可能有一定的促进作用,有望作为判定CIN是否具有恶变潜能的指标之一.

目的 利用RNA免疫沉淀技术和深度测序方法寻找人骨肉瘤细胞U2OS中与DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)蛋白结合的RNA,进一步研究特定RNA的功能.方法 提取对照组及8 Gy剂量照射组的U2OS细胞核蛋白,选择DNA-PKcs蛋白进行免疫沉淀,将复合体中RNA分离纯化并进行鉴定,行高通量测序分析.通过生物信息学分析得到与DNA-PKcs蛋白结合的所有RNA种类和染色体分布,KEGG和GO分析得到RNA的功能分类.最后选取特定RNA分子,利用qRT-PCR方法分别对U2OS细胞总RNA及RIP提取的RNA进行表达验证.结果 U2OS细胞经8 Gy照射后DNA-PKcs蛋白结合的RNA与对照组相比,与细胞黏附相关的基因:整合素α3(integrinα3,ITGA3)、α5(ITGA5)和αV(ITGAV),以及白细胞分化抗原分化簇44(cluster of differentiation44,CD44)和多配体聚糖4(syndecan 4,SDC4)均有更强的富集.结论 成功获得了与U2OS细胞DNA-PKcs蛋白结合的RNA高通量测序库;通过测序寻找到了DNA-PKcs蛋白结合的特定RNA分子,为下一步研究其功能奠定了基础.

目的 探讨肿瘤干细胞标志物CD133和CD44在肾母细胞瘤中的表达及其意义.方法 收集2010年1月至2017年10月在安徽省立医院未行放化疗而直接进行手术治疗的肾母细胞瘤患者手术切除组织标本,病理诊断同步进行免疫组织化学方法检测组织中CD133和CD44阳性信号强度和阳性细胞数目,计算免疫组织化学评分.同时收集临床病理参数,分析免疫组织化学评分与临床病理参数之间是否存在相关性.结果 共收集肾母细胞瘤患儿64例,其中男性30例,女性34例.年龄中位数为36个月,其中46例年龄≤36个月,18例年龄>36个月.肿瘤大小(最大直径)2～19 cm,中位数为6.5 cm,其中32例≤6.5 cm,另外32例>6.5 cm.58例表现为预后好的病理特征,6例表现为预后差的病理特征.根据NWTS的分期,24例为1期,26例为2期,4例为3期,8例为4期,2例为5期.免疫组织化学评分结果显示,44％(28/64)的标本为CD133阳性,13％(8/64)的标本为CD44阳性.CD133的免疫组织化学评分与肾母细胞瘤NWTS分期有正相关性(r=0.813,P<0.05);在女童中CD133评分高于男童(P<0.05);CD133评分与患者的年龄、肿瘤的大小及病理特征无相关性(P>0.05).结论 CD133在肾母细胞瘤中高表达,其表达水平与肾母细胞瘤的发生及恶性程度存在关系.

目的 探讨HA-CD44st-TGF-β信号通路对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞HER2表达及侵袭能力的影响.方法 应用脂质体转染法将真核表达载体pcDNA3.1-CD44st转染入MCF-7细胞中,以该转染细胞株(MCF-7/CD44st)为基础,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术及Western blot检测mRNA及相关蛋白的表达,电泳迁移率变动分析(EMSA)检测激活蛋白-1(AP-1)的活性,Transwell法检测HA-CD44st→TGF-β信号通路对MCF-7细胞侵袭能力的影响.结果 MCF-7细胞转染pcDNA3.1-CD44st后,CD44 mRNA和CD44蛋白的表达水平升高;透明质酸(HA)处理后,MCF-7/CD44st细胞中人表皮生长因子受体2(HER2)、转化生长因子-β(TGF-β)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达水平明显升高,转录因子AP-1活性增强,侵袭细胞数量增多.结论 HA与CD44st受体结合后,可以通过HA-CD44st→TGF-β信号转导通路调节HER2基因表达并增强MCF-7细胞的侵袭能力.

目的 探讨人体脂肪间充质干细胞生成胰岛素(insulin)分泌细胞的诱导方法及其对I型糖尿病大鼠的疗效评估.方法 在人体腹部收集脂肪组织,通过酶消化法和物理震荡相结合分离脂肪干细胞;通过多种细胞因子的搭配诱导脂肪干细胞生成胰岛素分泌细胞.采用流式细胞仪分析、双硫腙染色鉴定脂肪干细胞和诱生的胰岛素分泌细胞;ELISA法检测诱导后细胞培养液上清中胰岛素分泌水平;通过流式细胞仪检测诱生细胞中胰十二指肠同源框因子-1(PDX1)、Insulin、C肽(C-Peptide)以及葡萄糖转运体-2(Glut-2)等相关基因的表达变化.建立I型糖尿病大鼠模型,随机分为模型对照组和模型实验组,对模型实验组大鼠进行干细胞治疗实验和疗效评估.结果脂肪间充质干细胞表面抗原主要表达CD13(90.4％),CD29(89.3％),CD44(91.9％),CD105(80.1％),而不表达CD34、CD45和HLA-DR.诱导分化后脂肪干细胞形成β细胞小簇,具有胰岛素分泌能力,鉴定显示胰岛素,C肽,Glut-2和PDX-1呈阳性.模型实验组大鼠经胰岛分泌细胞治疗2周后血糖明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),但两组大鼠体重变化差异无统计学意义(P>0.05).结论 成功建立脂肪干细胞体外分离、培养的方法及其诱导向胰岛素分泌细胞定向分化的方法,为日后开展临床糖尿病的自体细胞移植治疗提供可靠的新的细胞来源和有效的细胞治疗方法.

目的 探讨癌组织及外周血中白细胞分化抗原分化簇第44号(CD44)、磷酯酶Cεl(PLCEl)、甲基化Sept9基因及DNA错配修复蛋白表达水平与结直肠癌病理分期及预后的相关性.方法 将2013年3月至2015年5月在西宁市第二人民医院确诊为结直肠癌的56例患者设为观察组,将同期于我院体检的55名健康成年人设为对照组.比较两组甲基化Sept9基因、CD44、PLCEl及DNA错配修复蛋白表达情况,分析以上指标在结直肠癌患者中的临床分布特点并进行相关性检验,比较不同甲基化Sept9基因、CD44、PLCEl及DNA错配修复蛋白表达情况并分析其与结直肠癌患者的预后相关性.结果 观察组甲基化Sept9基因及CD44表达阳性率、PLCEl表达阴性率、DNA错配修复蛋白表达缺失率高于对照组(P<0.05).甲基化Sept9基因、PLCEl及DNA错配修复蛋白在不同肿瘤浸润深度、肿瘤大小、病理分期及有无淋巴结转移结直肠癌患者中的表达差异有统计学意义(P<0.05).CD44在不同肿瘤浸润深度、病理分期及有无淋巴结转移结直肠癌患者中的表达差异有统计学意义(P<0.05).PLCEl与结直肠癌的浸润深度、病理分期呈负相关(r=-0.367,P=0.045;r=-0.522,P=0.008);甲基化Sept9基因与浸润深度、病理分期、淋巴结转移呈正相关(r=0.715,P=0.026;r=0.471,P=0.032;r=0.453,P=0.010),CD44与浸润深度、病理分期、淋巴结转移呈正相关(r=0.349,P=0.007;r=0.591,P=0.022;r=0.452,P=0.027),DNA错配修复蛋白与病理分期﹑淋巴结转移呈负相关(r=-0.487,P=0.041;r=-0.551,P=0.030).不同CD44、甲基化Sept9基因、PLCEl及DNA错配修复蛋白表达情况的结直肠癌患者3年生存率差异有统计学意义(P<0.05).PLCEl、DNA错配修复蛋白与结直肠癌患者3年生存率呈正相关(r=0.574,P=0.041;r=0.478,P=0.037),甲基化Sept9基因与结直肠癌患者3年生存率呈负相关(r=-0.515,P=0.034).结论 CD44、PLCEl、甲基化Sept9基因及DNA错配修复蛋白均与结直肠癌的病理分期相关,其检测有助于了解疾病的恶性程度,评估患者预后.