该实验旨在研究左归丸促进初老大鼠生殖器官卵巢、阴道血管生成与内皮祖细胞(EPCs)促动员因素粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及其受体的关系,探讨左归丸改善初老大鼠生殖功能低下的作用机制.采用超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)对左归丸浸膏进行中药化学成分分析.然后选用14月龄动情周期紊乱的雌性初老大鼠40只,随机分为初老空白组、结合雌激素组、左归丸低剂量组、左归丸高剂量组,每组各10只;另外选用10只4月龄雌性大鼠作为青年对照组.初老空白组和青年对照组均用20 g·kg-1蒸馏水灌胃,结合雌激素组用65μg·kg-1结合雌激素悬液进行灌胃,低剂量组用11g·kg-1左归丸浸膏灌胃,高剂量组用33 g·kg-1左归丸浸膏进行灌胃,每日1次,连续灌胃15 d.收集各组大鼠血清,用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中促EPCs动员因素SDF-1、GM-CSF水平;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察卵巢各级卵泡数目、黄体数目、阴道上皮层数、阴道皱襞数以及卵巢、阴道组织血管等在用药组的变化;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测卵巢、阴道组织雌激素受体(ER)、粒-巨噬细胞集落刺激因子受体(GM-CSFR)、趋化因子受体(CXCR)4、CXCR7蛋白表达水平.结果发现,初老空白组大鼠黄体数、各级生长卵泡数和血管数减少(P<0.05);阴道黏膜厚度、上皮层数、皱襞数、固有层血管数明显减少(P<0.05);外周血中SDF-1、GM-CSF含量明显降低(P<0.05);大鼠卵巢、阴道组织中ER、CXCR4、CXCR7、GM-CSFR蛋白水平明显下降(P<0.05).各用药组大鼠的各级生长卵泡数、黄体数、血管数目明显增加(P<0.05),而闭锁卵泡数明显减少(P<0.05),阴道黏膜厚度、上皮层数、阴道黏膜皱襞数和固有层血管数增加(P<0.05);外周血中SDF-1、GM-CSF含量升高(P<0.05);卵巢、阴道组织中ER、CXCR4、CX-CR7及GM-CSFR蛋白水平上升(P<0.05).该实验发现左归丸可能通过上调EPCs促动员因素SDF-1、GM-CSF及其受体水平,进而促进卵巢、阴道血管生成,改善初老大鼠生殖功能.

目的:观察补肾中药复方左归丸对初老雌性大鼠外周血循环内皮祖细胞EPCs及其促动员因素雌二醇E2、内皮细胞生长因子VEGF水平的影响.方法:采用自然衰老动物模型, 予以左归丸灌胃治疗, 观察卵巢组织形态学变化, 计算卵巢、子宫的脏器指数, 采用流式细胞术检测外周血单个核细胞中CD34+/CD133+/VEGFR2+三阳性EPCs的比例, ELISA法检测促EPCs动员因素E2、VEGF水平.结果:左归丸33 g/kg组可明显增加初老大鼠各级生长卵泡数、黄体数、血管数、血清E2、VEGF及EPCs水平.结论:左归丸可能通过上调E2、VEGF水平, 动员EPCs, 从而促进卵巢血管生成, 改善初老大鼠卵巢功能.

目的:应用蛋白质组学分析探寻补益阳明津气方药延缓初老雌性大鼠生殖机能减退的作用机制.方法:根据月龄、阴道细胞学表现将SD雌性大鼠随机分为3组(n=10):正常对照组、初老实验组、去势实验组,对照组给予生理盐水灌胃,实验组给予益胃汤灌胃,灌胃8周后将大鼠处死,取下丘脑,行iTRAQ定量蛋白质组学分析,比较各组间差异.结果:27g/kg初老实验纽、27g/kg去势实验组与正常对照组大鼠比较均有差异蛋白表达,GO分析及Pathway分析见生殖相关蛋白.结论:补益阳明津气方药对初老雌性大鼠下丘脑蛋白的表达有影响,差异蛋白与生殖相关.

目的:探讨补益阳明津气方药益胃汤延缓初老雌性SD大鼠皮肤衰老的作用,并分析其机理.方法:根据月龄、阴道细胞学表现将SD雌性大鼠随机分为5组(n=10):正常对照组、初老对照组、初老实验组、去势对照组、去势实验组.对照组给予生理盐水灌胃,实验组给予益胃汤灌胃,灌胃8周后皮肤水分测试仪检测大鼠皮肤含水量和弹性.将大鼠处死,取大鼠背部皮肤组织匀浆,酶联免疫吸附实验检测Ⅰ型胶原蛋白(Collagen 1,COL1)含量、超氧化物歧化酶(superoxide radical,SOD)活性、丙二醛(malonaldehyde,MDA)和羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)水平.结果:治疗后,实验组(初老实验组、去势实验组)的皮肤含水量明显高于对照组(初老对照组、去势对照组),差异均有统计学意义(P＜0.05);实验组的皮肤弹性优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组COL1、SOD、HYP含量明显高于对照组,实验组的MDA含量明显低于初老对照组,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:补益阳明津气方药益胃汤可以增加大鼠皮肤含水量,改善皮肤弹性,增加皮肤SOD活性及降低MDA含量而提高皮肤组织抗氧化能力,增加HYP和COL1含量而提高皮肤弹性,具有延缓初老雌鼠皮肤衰老的作用.

目的:研究补肾中药复方右归丸对自然衰老致卵巢功能低下的大鼠血管生成的影响与CXC趋化因子8(CXCL8)/趋化因子受体1/2(CXCR1/2)信号通路及血管生成素-1(Ang-1),血管生成素-2(Ang-2)的关系,探讨其改善卵巢功能的作用机制.方法:将56只雌性SD大鼠随机分为青年组8只、自然衰老致卵巢功能低下的雌性大鼠模型组48只,青年组大鼠常规饲养,48只模型组大鼠常规饲养过程中做5～7d阴道脱落细胞学涂片,将连续4个动情周期阴道细胞学表现为动情周期长、之后持续动情、反复假妊娠的大鼠作为初老大鼠,连续10 d表现为角化细胞指数高于50％的青年大鼠作为青年组.模型建立后,将存活造模大鼠随机分为初老空白组,结合雌激素组(65μg·kg-1·d-1),左归丸组(33g·kg-1·d-1),右归丸低、中、高剂量组(1.2,2.4,4.8g·kg-1d-1),青年组和初老空白组以等体积生理盐水灌胃,持续30 d.实验结束后,苏木素-伊红(HE)染色法观察大鼠卵巢组织形态学变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠卵巢组织中趋化因子CXCL8,CXCR1,CXCR2,Ang-1,Ang-2的蛋白表达水平;免疫组化标记大鼠卵巢组织中趋化因子CXCL8,CXCR1,CXCR2,Ang-1,Ang-2蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠卵巢组织中趋化因子CXCL8,CXCR1,CXCR2,Ang-1,Ang-2 mRNA表达.结果:与青年组比较,初老空白组各级生长卵泡数、黄体数、血管数目数量少且闭锁卵泡多(P＜0.01),卵巢组织CXCL8,CXCR1及CXCR2水平蛋白和mRNA水平显著上升(P＜0.01),卵巢组织中Ang-1及Ang-2蛋白和mRNA水平明显下降(P＜0.05);与初老空白组相比,各用药组初老大鼠的各级生长卵泡数、黄体数、血管数目明显增加(P＜0.05),而闭锁卵泡数明显减少(P＜0.05),卵巢组织CXCL8,CXCR1及CXCR2水平蛋白和mRNA水平明显下降(P＜0.05),卵巢组织中Ang-1及Ang-2蛋白和mRNA水平明显上升(P＜0.05).结论:右归丸可以通过下调大鼠卵巢组织中CXCL8,CXCR1及CXCR2水平,上调Ang-1和Ang-2水平,促进卵巢血管生成,改善大鼠的卵巢功能.

目的 基于磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子1α(PGC-1α)信号通路探讨乌萸汤对初老小鼠卵母细胞的作用机制.方法 采用雄性6周龄SD大鼠制备乌萸汤含药血清;采用未成熟卵体外培养技术,原代细胞培养6周龄、24周龄小鼠卵母细胞后提取卵丘卵母细胞复合体(COC).实验分为8组:对照组(6周龄小鼠COC培养于基础培养基)、初老组(24周龄小鼠COC培养于基础培养基)、初老+AICAR组(AMPK激动剂AIC-AR预处理24周龄小鼠COC 2 h)、初老+Compound C组(AMPK抑制剂Compound C预处理24周龄小鼠COC 2 h)、初老+乌萸汤含药血清组(24周龄小鼠COC培养于乌萸汤含药血清培养基)、初老+乌萸汤含药血清组+AICAR组(AMPK激动剂AICAR预处理24周龄小鼠COC 2 h后培养于乌萸汤含药血清培养基)、初老+乌萸汤含药血清组+Compound C组(AMPK抑制剂Compound C预处理24周龄小鼠COC 2 h后培养于乌萸汤含药血清培养基)、初老+山茱萸环烯醚萜苷类提取物组(24周龄小鼠COC培养于山茱萸环烯醚萜苷类提取物培养基).采用PCR法及Western blot法检测各组卵母细胞中AMPK/PCG-1α通路相关因子基因及蛋白表达情况.结果 初老+AIC-AR组、初老+乌萸汤含药血清组卵母细胞中AMPKα、PGC-1α、Nrf1基因相对表达量及AMPKα、p-AMPKα(Thr172)、PGC-1α、Nrf1蛋白相对表达量和初老+乌萸汤含药血清+AICAR组卵母细胞中AMPKα、PGC-1α、Nrf1基因相对表达量及AMPKα、p-AMPKα(Thr172)、PGC-1α蛋白相对表达量均明显高于初老组(P均<0.05);初老+AICAR组、初老+乌萸汤含药血清组、初老+乌萸汤含药血清+AICAR组卵母细胞中Nrf2基因相对表达量及初老+Compound C组卵母细胞中AMPKα、PGC-1α、Nrf1、Nrf2基因相对表达量均明显低于初老组(P均<0.05);初老+乌萸汤含药血清+Compound C组卵母细胞中AMPKα、PGC-1α、Nrf1、Nrf2基因相对表达量及p-AMPKα(Thr172)、PGC-1α、Nrf1蛋白相对表达量均明显低于初老+乌萸汤含药血清组(P均<0.05).结论 初老小鼠未成熟卵体外培养过程中,AMPK/PGC-1α通路可通过线粒体能量代谢从而影响卵母细胞质量;乌萸汤可通过AMPK/PGC-1α通路增强线粒体能量代谢及氧化应激状态,促进卵母细胞成熟,从而改善卵母细胞功能.

目的:探讨早衰和初老大鼠下丘脑、垂体和卵巢组织FSHR、LHR和ER蛋白表达的差异以及左归丸的干预作用.方法:60只大鼠给予顺铂注射液6 mg/(kg·w),共2次,建立卵巢早衰大鼠模型.空白组给予等剂量的生理盐水腹腔注射.将造模成功的大鼠随机分为模型组、补佳乐组、左归丸(低、中、高)剂量组;另40只初老大鼠,随机分成空白组、左归丸(低、中、高)剂量组,每组10只.用免疫组化法定位和相对定量早衰和初老大鼠在下丘脑-垂体-性腺轴上的FSHR、LHR和ER的表达量差异;不同剂量左归丸干预POF(早衰和初老)大鼠,检测FSHR、LHR和ER的表达量.结果:早衰大鼠血清卵泡雌激素(FSH)水平明显增高(P<0.05),卵泡雌激素受体(FSHR)在早衰大鼠下丘脑组织和初老组大鼠下丘脑、垂体和卵巢组织表达下调(P<0.05),黄体生成素受体(LHR)在早衰大鼠下丘脑、垂体组织和初老组大鼠垂体组织表达下调(P<0.05),雌激素受体(ER)在早衰大鼠下丘脑、垂体、卵巢组织和初老大鼠垂体组织表达下调(P<0.05);左归丸可以上调早衰大鼠卵巢组织,初老大鼠垂体和卵巢组织FSHR表达,早衰和初老大鼠垂体组织LHR以及早衰和初老大鼠下丘脑、垂体和卵巢组织ER表达,尤以左归丸高剂量组作用显著(P<0.05).结论:下丘脑、垂体和卵巢组织FSHR和ER低表达是造成卵巢功能衰退的主要原因,左归丸通过促进卵巢合成分泌雌激素(E2),降低血清FSH和LH水平,进而上调下丘脑、垂体和卵巢组织的FSHR和ER表达,延缓卵巢衰退.