类风湿关节炎(RA)属于一种慢性、进行性的自身免疫性疾病,呈对称性,疾病后期可致功能障碍、关节畸形,甚至累及神经、心、肺等.RA所致的关节损害无法逆转,西医治疗通常以消炎镇痛、抗风湿等药物来缓解症状,改善患者生存质量.甲氨蝶呤(MTX)是一种抗风湿免疫抑制剂,属于RA的一线药物,临床上常将其与非甾体类抗炎药物联用,可起到消炎、止痛、消肿和抑制骨质破坏等作用[1].

目的 研究芍甘附子汤加味对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)寒证大鼠γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和白介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)表达的影响,并探讨其可能的机制.方法 110只雌性Wistar大鼠被随机分为7组:正常组、模型组、甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)对照组、雷公藤多甙对照组和芍甘附子汤加味组(大、中、小剂量).正常组常规饲养,其余各组在复制CIA寒证大鼠模型后分别MTX、雷公藤多甙片及芍甘附子汤加味(大、中、小剂量)灌胃,干预4周,每周评价各组大鼠体重、足肿胀排水体积等情况.4周后,用 ELISA 法检测大鼠外周血IFN-γ和IL-17A表达水平;RT-qPCR检测大鼠膝关节滑膜IFN-γ mRNA和IL-17A mRNA表达情况.结果 给药基线期各给药组大鼠较正常组体重均有减轻(P<0.05),双足排水体积均显著升高(P<0.05),给药后各组大鼠肿胀持续减轻;同时期各给药组大鼠组间双足排水体积比较差异无统计学意义(P>0.05).各组大鼠外周血IFN-γ水平较正常组及模型组均有显著升高(P<0.05),对照组大鼠及治疗组组间比较无统计学意义(P>0.05);各组大鼠外周血 IL-17A 较正常组显著升高(P<0.05),各给药组大鼠与模型组比较,大剂量组与中剂量组较模型组相比有显著差异(P<0.05),小剂量组与模型组比较无统计学意义(P>0.05).治疗组大鼠滑膜IFN-γ/IL-17A mRNA较模型组降低,但无统计学差异(P>0.05).结论 RA为多种免疫细胞及细胞因子共同参与发病,芍甘附子汤加味在一定程度上可下调IFN-γ、IL-17A表达.

目的 观察加味芍甘附子汤治疗类风湿关节炎(RA)寒湿痹阻证临床疗效性及安全性.方法 将60例RA患者随机分为治疗组与对照组各30例.对照组予甲氨蝶呤和/或来氟米特,治疗组在对照组基础上联合加味芍甘附子汤,每日1剂,两组疗程均为12周.记录患者中医证候积分,28个关节疾病活动度评分(DAS28),ACR (20/50/70)达标率,晨僵时间、关节肿胀数、关节疼痛数及VAS评分,肌肉骨骼超声评价双手2～5掌指关节(MCPJ)、2～5近端指间关节(PIPJ)受累个数及MCPJ滑膜增生分级情况,安全性评价. 结果 治疗后治疗组中医证候即晨僵、关节肿胀、关节疼痛、关节压痛、关节作冷、畏恶风寒、腰膝酸软、肢冷不温评分低于对照组(P＜0.05).治疗组中医证候疗效总有效率为96.67％,高于对照组的66.67％ (P ＜0.01).与治疗前比较,两组治疗后晨僵时间、关节疼痛及肿胀个数、VAS评分均降低(P＜0.05);治疗后治疗组晨僵时间、关节肿胀个数及VAS评分较对照组降低(P＜0.05).治疗组疗后DAS28评分疗效总有效率90.00％,高于对照组的66.67％ (P ＜0.05).两组患者治疗后ACR20/50/70达标率比较差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后两组MCPJ受累个数较本组治疗前减少(P＜0.05),MCPJ滑膜增生分级情况均较治疗前降低(P＜0.05).但治疗后两组MCPJ、PIPJ受累个数差异均无统计学意义(P＞0.05).治疗组仅有2例肝功能异常并于试验结束时消失. 结论 加味芍甘附子汤联合西药在改善RA寒湿痹阻证患者全身症状及体征方面优于单用传统西药,安全性较好.

目的:研究芍甘附子汤加味对胶原诱导性关节炎(CIA)寒证大鼠Egr2/Egr3及其信号通路表达的影响,并探讨Egr2/Egr3在类风湿关节炎(RA)发病中的作用.方法:110只雌性Wistar大鼠被随机分为7组:正常组、模型组、对照组[甲氨蝶呤(MTX)组、雷公藤组]和芍甘附子汤加味组(大、中、小剂量组).正常组常规饲养,其余各组在复制CIA寒证大鼠模型后分别MTX、雷公藤多苷片及芍甘附子汤加味(大、中、小剂量)灌胃,干预4周,每周评价各组大鼠炎症指数.4周后测定ELISA法检测大鼠外周血IL-6、TGF-β表达;RT-qPCR检测大鼠膝关节滑膜Egr2/Egr3 mRNA、SOCS1/SOCS3 mRNA、STAT1/STAT3 mRNA表达.实验结束后测定大鼠脏器指数.结果:各组大鼠AI评分均呈下降趋势,但各组间差异无统计学意义.HE染色提示各给药组及模型组存在不同程度的滑膜增生、炎性细胞浸润以及骨侵蚀等,各给药组较模型组均有所减轻,模型组和各给药组脾脏指数显著高于正常组(P＜0.05),大、中剂量组胸腺指数较模型组显著下降(P＜0.05).大鼠滑膜组织模型组和各治疗组Egr2/Egr3 mRNA、SOCS1/SOCS3 mRNA相对表达量较正常组升高,其中芍甘附子汤中剂量组Egr2/Egr3 mRNA表现尤为突出(P＜0.05).CIA造模后大鼠外周血TGF-β、IL-6水平均显著高于正常组水平,各药物干预组治疗4周后较模型组均有下降尤以TGF-β更为明显.结论:Egr2/Egr3参与了RA发病过程的调控环节,对于疾病的早期诊断及早期干预有提示作用.

目的:探讨芍甘附子汤加味对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA) HIF-VEGF-ANG轴的影响,为芍甘附子汤加味治疗类风湿关节炎的临床应用提供实验基础.方法:将HFLS-RA细胞进行传代培养,选用第4～8代HFLS-RA进行研究.实验分为空白组、诱导组、对照组和芍甘附子汤加味大、中、小剂量组.各组予相应药物干预.MTT法检测HFLS-RA细胞的增殖,qPCR法测定HFLS-RA细胞培养上清液中HIF-VEGF-ANG的表达.结果:芍甘附子汤加味可抑制HFLS-RA增殖,降低细胞培养上清液中HIF-1 α、VEGF、VEGF2、Ang-1、Ang-2的表达.结论:芍甘附子汤加味通过抑制HFLS-RA增殖及调控HIF-VEGF-ANG的表达发挥作用.

[目的]研究芍甘附子汤加味对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型关节滑膜病理及血清白细胞介素(IL)-2、IL-17A及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的干预作用,并探讨其作用机制.[方法]随机将24只大鼠分为正常组、模型组、雷公藤组及芍甘附子汤组.除正常组外,其余各组均用胶原乳液多点皮内注射建立关节炎动物模型.模型建立后分别进行灌胃:模型组予蒸馏水2 mL/(kg·d)灌胃,雷公藤组给予雷公藤多苷片6.25 mg/(kg·d)灌胃,芍甘附子汤组予芍甘附子汤加味12.5g/(kg·d)灌胃,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠踝关节及滑膜病理改变,酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血清IL-2、IL-17A及TNF-α水平.[结果]HE染色结果发现芍甘附子汤加味可改善CIA大鼠模型关节滑膜炎症,抑制关节软骨破坏.与正常组比较,模型组IL-2水平增高(P<0.01),与模型组比较,雷公藤组及芍甘附子汤组IL-2水平均下降(P<0.01).模型组IL-17A水平较正常组增加(P<0.01),与模型组比较,雷公藤组及芍甘附子汤组IL-17A水平均下降(P<0.01).与正常组比较,模型组TNF-α水平增高(P<0.05),与模型组比较,雷公藤组TNF-α有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05),芍甘附子汤组TNF-α水平下降(P<0.01),芍甘附子汤组与雷公藤组比较差异有统计学意义(P<0.01).[结论]芍甘附子汤加味可改善CIA大鼠关节滑膜炎症,抑制关节软骨破坏,同时可降低血清中IL-2、IL-17A及TNF-α的表达水平.

目的 探讨不同鼠龄胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型的差异,并研究加味芍甘附子汤对炎性细胞因子表达的影响及其安全性.方法 将青年和老年鼠各40只,随机分为正常组、模型组、对照组及中药组各4组.除正常组外,其余各组均建立CIA模型,建模后灌胃干预4周.观察大鼠一般情况,测量足踝排水体积,评价炎症指数(arthritis index,AI),末次给药取材后计算脏器指数,并检测细胞因子和安全性指标.结果 造模第3周,老年模型组右足排水体积高于青年模型组(P<0.05),造模第2～4周,老年模型组AI评分均高于青年组(P<0.05);老年正常组、模型组及对照组胸腺指数均低于青年各组(P<0.01);老年中药组γ-干扰素(INF-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素17A(IL-17A)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均低于模型组(P<0.05);老年中药组IL-17A低于对照组(P<0.05);青年中药组TNF-α、IL-6、IL-17A及肌酐(CREA)水平均低于模型组和对照组(P<0.05);老年和青年中药组谷丙转氨酶(ALT)均低于对照组(P<0.05);老年和青年中药组肌酸激酶同工酶(CK-MB)和肌钙蛋白I(cTnI)均低于模型组和对照组(P<0.05).结论 不同鼠龄CIA大鼠关节炎症程度存在差异,加味芍甘附子汤安全有效,衰老引起的胸腺退化可能是引起老年期发病类风湿关节炎(EORA)与青壮年发病类风湿关节炎(YORA)差异的原因之一.

目的 观察加味芍甘附子汤通过早期生长反应蛋白2(early growth responseprotein 2,Egr2)调控胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)老年大鼠炎症反应的作用.方法 选用清洁Wistar大鼠96只,其中青年鼠与老年鼠各48只.随机将老年鼠与青年鼠分为正常组、模型组、对照组、中药组,每组各12只.正常组常规饲养,其余3组复制CIA大鼠模型后分别给予生理盐水、雷公藤多苷片及加味芍甘附子汤灌胃4周,每周评价各组大鼠关节炎症指数(arthritis index,AI);4周后苏木精—伊红染色(hematoxylin-eosin,HE)检测踝关节组织的病理变化;RT-qPCR检测大鼠膝关节滑膜Egr2 mRNA表达;Elisa法测定外周血白细胞介素-17 A(interleukin 17A,IL-17A)、γ干扰素(interferon γ,IFN-γ)、白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)表达.结果 (1)各组大鼠AI评价:给药期间,青年鼠和老年鼠的AI评分均降低,且在四周后中药组的评分最低(P＜0.05),而老年鼠和青年鼠的组间比较差异无统计学意义.(2)HE检测大鼠踝关节组织的病理变化:四周后取材,踝关节病理学提示除正常组外,各组均有滑膜组织增生及炎性细胞浸润,老年鼠模型组的炎性细胞浸润明显重于青年鼠模型组,且中药组均明显轻于模型组.(3)RT-qPCR检测大鼠膝关节滑膜Egr2 mRNA表达:对照组和中药组的大鼠膝关节滑膜Egr2 mRNA表达高于模型组(P＜0.05),老年鼠模型组的大鼠膝关节滑膜Egr2 mRNA表达明显低于青年鼠模型组(P＜0.05),而老年鼠中药组的表达明显高于青年中药组(P＜0.05).(4)Elisa法测定大鼠外周血IFN-γ、IL-17A、IL-6的表达:老年鼠中药组IL-17A的表达低于模型组与对照组(P＜0.05);青年鼠中药组IL-17A的表达低于模型组(P＜0.05),但高于对照组(P＜0.05).老年鼠模型组及对照组外周血IL-17A的表达均高于青年鼠相应组别(P＜0.05),而老年鼠中药组的表达低于青年鼠中药组(P＜0.05).结论 (1)老年CIA大鼠Egr2的低表达为参与炎症过程可能因素之一;(2)加味芍甘附子汤可能通过对Egr2的调控改善CIA老年鼠关节滑膜炎症,还需进一步开展机制研究.

目的 观察芍甘附子汤加味对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠肺间质病理及血清KL-6、IL-6与IL-17表达水平的影响.方法 60只SPF级雌性Wistar大鼠随机分为空白组10只,造模组50只.空白组予以正常饮食喂养,直至试验结束.造模组复制胶原诱导性关节炎模型.造模持续2周,将造模成功的40只大鼠随机分为5组,每组8只,分别为对照组、大、中、小剂量中药组及雷公藤组.空白组与对照组蒸馏水灌胃,其余4组分别给予相对应的药物进行灌胃.灌胃持续4周后即实验第6周末后将所有大鼠处死.选大鼠血清用ELISA法检测IL-6、IL-17、KL-6水平.取大鼠肺组织HE染色观察肺间质病理变化.结果 血清细胞因子IL-6、IL-17、KL-6在对照组中均显著升高(P<0.01).IL-6在中剂量组与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01);IL-17在中剂量组与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01);KL-6在各治疗组与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.01).中大剂量中药组与雷公藤组对比,差异无统计学意义(P>0.05).空白组大鼠肺组织结构及肺泡壁完整,未见明显炎性细胞浸润;对照组大鼠肺组织结构大面积破坏,肺泡结构塌陷,肺泡间隙充血水肿,肺泡壁增厚,出现大量纤维瘢痕;中药小剂量组肺泡炎仍然较为明显,肺泡结构紊乱,肺泡间隙仍较宽,较对照组有所改善;中药中、大剂量组及雷公藤组肺泡结构较为清晰,伴有轻微炎症反应及少量纤维增生,与对照组相比有较明显的改善.结论 芍甘附子汤加味可以显著抑制IL-6、IL-17、KL-6的高表达,这可能是其延缓RA-ILD进展的有效作用机制之一.

目的 探讨不同剂量加味芍甘附子汤对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠炎性细胞因子和安全性指标的影响,研究其疗效和安全性.方法 Wistar大鼠36只,根据体重随机分为6组:正常组,CIA模型组,对照组及中药低、中、高剂量组,每组6只.正常组常规饲养,其余各组复制CIA寒证模型后,模型组生理盐水灌胃,对照组雷公藤多苷(6.25 mg·kg-1)灌胃,中药组加味芍甘附子汤低、中、高剂量(0.625、1.25、2.5 g·mL-1)灌胃,干预4周,测定各组大鼠关节炎症指数评分、踝关节滑膜病理学改变、外周血IL-6水平,心(肌钙蛋白)、肝(CK18、HMGB1、GLDH)、肾(NGAL、胱抑素C)早期预警及常规安全性指标.结果 干预4周后,加味芍甘附子汤中、高剂量组AI评分较CIA模型组显著降低(P<0.05);病理结果显示加味芍甘附子汤各剂量组与模型组相比,关节腔狭窄、滑膜细胞增生、淋巴细胞浸润及关节面受损减轻;加味芍甘附子汤中、高剂量组血清IL-6水平较CIA模型组降低(P<0.05);各组大鼠外周血生化指标及CK18、HMGB1、胱抑素C水平组间差异无统计学意义;对照组及中药低、中、高剂量组GLDH水平较正常组降低(P<0.05);对照组NGAL水平较正常组升高(P<0.05);对照组及低剂量组肌钙蛋白水平较正常组降低(P<0.05).结论 不同剂量加味芍甘附子汤均未出现心、肝、肾脏毒性作用,并能减轻关节肿胀,降低IL-6水平,为后续相关研究和临床应用提供实验基础.