摘 要[目的]高加索三叶草是优良的蜜源植物,了解其花蜜腺形态特征、组织结构及其发育规律对认识其小花糖分变化规律和合理利用该植物资源具有重要意义.[方法]取5个发育时期的高加索三叶草小花,石蜡切片观察细胞组织结构,毛细管法和生理试剂盒测定花蜜量和糖分含量.[结果](1)单个小花的花蜜量为(0.394±0.095)μL,每1 m2草地花蜜量为(4536.93±1319.34)μL.(2)蜜腺位于9枚合生雄蕊的花丝内侧基部,为雄蕊蜜腺.蜜腺组织在整个泌蜜过程中淀粉粒分布有明显的动态变化,属于淀粉型蜜腺.(3)可溶性糖含量在盛花期最高,为7.978 mg/g;可溶性糖各组分中果糖占比最大,超过50％,在小花的整个发育过程中呈逐渐下降趋势;淀粉占全糖含量的81％～82％,其中盛花期最高,为35.173 mg/g.[结论]高加索三叶草花蜜腺属于雄蕊蜜腺,由分泌表皮和泌蜜组织构成.原蜜由花托维管束提供,经泌蜜组织加工成蜜汁,后由表皮的气孔泌出.小花的可溶性糖含量在盛花期最高,其中果糖占比最大.

自噬是真核细胞重要的物质降解系统之一，自噬小体将待降解物质包裹于其中并与溶酶体融合，以自噬-溶酶体的方式完成对物质的降解。自噬作为一个动态循环系统参与细胞内物质和能量的代谢并维持细胞稳态。自噬在内耳发育异常、衰老、耳毒性药物、噪声暴露等多种因素引起听力损伤过程中均可能发挥保护作用，有成为感音神经性听力损失治疗靶点的潜力。但也有研究指出耳蜗细胞中的自噬亦是导致细胞死亡的原因之一。我们回顾了自噬与感音神经性听力损失的相关文献，总结自噬在感音神经性听力损失发病机制中的作用，探讨自噬作为干预靶点在感音神经性听力损失防治中的潜在价值。

目的:依据血药浓度评估血液净化技术对急性虫螨腈中毒的治疗效果，为临床救治提供经验。方法:2022年本院收治2例进行血液净化治疗的急性虫螨腈中毒患者，动态监测血液中虫螨腈及其高毒性代谢产物溴代吡咯腈浓度，并收集患者的临床资料。结果:病例1摄入13 h后给予首次血液灌流，灌流l h时溴代吡咯腈浓度下降率为28.82%，灌流2 h时回升并超过灌流前水平。完成3次血液灌流后，血液中虫螨腈、溴代吡咯腈浓度仍超过首次灌流前浓度，分别达到248 ng/mL和1 307 ng/mL。摄入130 h后血虫螨腈浓度呈下降趋势，溴代吡咯腈浓度在130h达峰值3 164 ng/mL，178 h下降至2 707 ng/mL。病例2在摄入150 h后血液中虫螨腈、溴代吡咯腈浓度分别达到392 ng/mL和7 733 ng/mL，进行四次血液灌流，首次血液灌流后血液中虫螨腈浓度下降率37.75%，溴代吡咯腈浓度下降率为38.02%。给予持续性血液透析滤过（continuous veno-venous hemodiafiltration, CVVHDF）治疗85 h，溴代吡咯腈浓度维持在4 234~6 410 ng/mL。预后：病例1随访至12 d后失访，未查证到死亡信息；病例2死亡，生存期为247 h。结论:血液灌流仅可部分清除溴代吡咯腈，CVVHDF清除溴代吡咯腈能力差。虫螨腈和溴代吡咯腈表观分布容积（apparent volume of distribution, Vd）大，摄入后快速进入各组织，易在脂肪等组织蓄积，其后缓慢释放回血液，在血液中停留时间较长，虫螨腈的峰值浓度出现早于溴代吡咯腈。临床医生应重视早期消化道清除毒物。

目的:探索可见光量子点(QDs)作为载体靶向表皮生长因子受体(EGFR)用于三阴乳腺癌体外和在体靶向显像的可行性。方法:水溶性QDs与西妥昔单克隆抗体(Cetuximab)反应合成探针QD－Cetuximab，检测其形态、粒径、稳定性和发光特性。培养人乳腺癌细胞MDA－MB－468(EGFR＋)和MDA－MB－453(EGFR－)，与QD－Cetuximab和QDs温育进行细胞毒性实验、细胞显像和荧光定量分析。制备MDA－MB－468荷瘤裸鼠8只，经尾静脉注射100 μl QD－Cetuximab和QDs，观察不同时间点的显像结果和探针分布。采用两独立样本 t检验分析数据。 结果:电镜下QD－Cetuximab粒径为(40.34±2.44) nm，动态光散射(DLS)结果示其水合粒径为(57.85±4.69) nm，且结构稳定。QD－Cetuximab浓度≤50 nmol/L时，细胞相对存活率>90%；而当浓度增至100 nmol/L，细胞相对存活率降至(72.52±4.91)%。MDA－MB－468经QD－Cetuximab温育后发出的红色荧光比MDA－MB－468用QDs温育和MDA－MB－453用QD－Cetuximab、QDs温育的均强，标准化后的荧光强度定量分析显示QD－Cetuximab组荧光强度是QDs组的5.1倍(863.36/169.97)。流式细胞分析示MDA－MB－468摄取QD－Cetuximab和QDs均随其浓度增加而增加，但前者明显高于后者( t值：12.25～38.11，均 P<0.05)，25、50、100和200 nmol/L浓度下QD－Cetuximab组的平均荧光强度与QDs组的比值分别为5.4、6.9、7.4和6.2。QD－Cetuximab和QDs探针在体内都主要聚集在肝，在肝发出荧光的背景下肿瘤发出的荧光不明显，但离体瘤组织可见荧光，QD－Cetuximab组和QDs组的离体瘤组织荧光强度分别为(2.46±0.60)×10 4和(1.29±0.05)×10 4( t＝3.392， P＝0.015)。 结论:偶联Cetuximab的QDs增加了对表达EGFR的三阴乳腺癌细胞的靶向能力；QD－Cetuximab在三阴乳腺癌裸鼠离体成像效果尚可，但需进一步修饰，减少肝摄取。

猩红热是我国儿童和青少年重要的传染病之一，易在学校等集体单位发生聚集性疫情。2011年以来，部分国家和地区的猩红热发病率升高，A组乙型溶血性链球菌M蛋白 emm基因型和主要超抗原型别的病原学特征是否出现明显变化仍不明确。虽然猩红热的重症率和病死率极低，但猩红热易发生聚集性疫情，加重我国儿童和青少年传染病的疾病负担。为进一步做好猩红热的预防控制工作，一方面需加强病例监测，持续关注猩红热疫情的动态变化；另一方面需全面深入开展病原学、免疫学、传播动力学、多学科交叉的生态学研究。

近年来接受心血管手术的人数呈逐年增长趋势，2021年全国心血管外科手术量近28万例，比2020年增加了25% [1]。心血管手术术式复杂、术前抗凝和/或抗血小板等调节出凝血药物的使用及体外循环的影响(血液稀释、凝血因子消耗、血小板损伤、纤溶亢进、肝素的不完全逆转及肝素反弹等) [2]，可能是围术期大量失血和凝血功能障碍的主要因素。目前，围术期出凝血管理仍是一个挑战，麻醉医生对于围术期出凝血监测，需要迎难而上，即时准确地找出围术期出凝血功能障碍的原因，为患者平稳麻醉提供保障。而传统凝血功能检查耗费时间长，仅反映凝血过程的某个阶段，无法准确判断异常出血原因，以及影响凝血功能障碍的具体阶段和因子成分，且围术期出凝血是动态过程，未及时判断原因可能导致延迟或不适当的治疗。即时凝血检测(又称床旁凝血检测)可部分弥补传统凝血功能检查的局限性，快速识别凝血功能障碍，并实施有的放矢的靶向治疗。本文就即时凝血检测用于心血管手术的研究进展予以综述，以期为心血管手术患者围术期出凝血管理提供参考。

患儿1，女，先证者(见图1)，18天5小时，以"面色苍白18天"入院；胎龄36 +6周，经产道急产娩出。患儿生后1 h因面色苍白及早产儿于当地医院住院，生后13 h查血常规可见血红蛋白81 g/L，予抗感染、输注洗涤红细胞、输注人免疫球蛋白好转出院，患儿3 d前(15 d)复查血红蛋白63 g/L，皮肤苍白渐加重；查体：面色苍白，肝肿大；血常规：血红蛋白63 g/L，网织红细胞稍升高，红细胞平均体积、平均血红蛋白量按参考值属于正细胞正色素性贫血；直间接抗人球蛋白试验阴性；末梢红细胞形态：红细胞大小正常均一，中心淡染区扩大；维生素B12 232 pmol/L、叶酸44.53 nmol/L、铁蛋白1436 ng/mL，均正常；骨髓穿刺示红系轻微增生，部分细胞偏小，核固缩，浆量小，边缘不整齐，成熟细胞轻度大小不等；微小B19病毒抗体阴性，血培养阴性、宫内感染系列阴性；溶血系列均阴性；予输注红细胞悬液治疗，血红蛋白上升至104 g/L，嘱出院后动态随访血红蛋白。

目的:研究磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase，PI3K)抑制剂LY294002对AKT/GSK3β/CRMP2信号通路的影响，及通路改变对大鼠抑郁样行为及微管蛋白的影响。方法:16只成年雄性SD大鼠采用盲法随机分为LY294002组及溶剂DMSO组，每组8只。麻醉后进行海马CA1区脑立体置管，置管1周后给予LY294002或DMSO脑立体注射，并进行抑郁样行为检测。采用RT-qPCR技术检测海马AKT、GSK3β、CRMP2、tubulin的mRNA表达水平，采用Western blot检测海马AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSK3β、CRMP2、p-CRMP2以及微管动态性相关蛋白Acet-tubulin、Tyr-tubulin表达水平。比较两组大鼠抑郁样行为表现及分子表达差异。结果:旷场实验显示，LY294002组大鼠的中心移动距离较DMSO组显著下降[(3.64±2.17)cm；(31.51±12.68)cm； t＝2.69， P＝0.03]；LY294002组中心区持续时间较DMSO组亦显著下降[(0.73±0.46)s；(4.85±2.10)s； t＝2.33， P＝0.04]。强迫游泳测试结果显示LY294002组大鼠的不动时间有升高的趋势，但差异无统计学意义。糖水偏好实验显示两组大鼠糖水消耗量差异无统计学意义( P>0.05)。RT-qPCR结果显示，LY294002组大鼠海马组织CRMP2 mRNA表达水平显著下降( P<0.05)。Western blot结果显示，与DSMO组比较，LY294002组大鼠海马组织p-AKT及p-GSK3β表达水平下降( P<0.05)；CRMP2表达水平降低，p-CRMP2表达水平显著升高，同时，Tyr-tubulin表达水平下降，Acet-tubulin表达水平显著升高，两组均差异有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:LY294002通过影响AKT/GSK3β/CRMP2信号通路，导致微管动态性损害，并使大鼠出现抑郁样行为。

目的:探讨复合人表皮干细胞（ESC）的猪脱细胞真皮基质（ADM）对裸鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响。方法:采用实验研究方法。采用数码相机拍照观察猪ADM形态，采用苏木精-伊红（HE）染色观测猪ADM中细胞残留，采用扫描电子显微镜观察猪ADM表面结构，采用红外光谱仪分析猪ADM二级结构，采用动态光散射粒度分析仪分析猪ADM粒径，采用纳米粒度电位仪分析猪ADM电位。采用倒置荧光显微镜观察猪ADM在培养基中放置30 min、1 d、5 d的形态（样本数为2）；采用随机数字表法（分组方法下同）将猪ADM分为5 min组、10 min组、20 min组、30 min组、60 min组、120 min组，常温静置相应时间，称量法计算吸水量（样本数为3）；将Swiss小鼠胚胎成纤维细胞（Fb）分为仅有培养基的空白对照组和另加入相应终质量浓度的ADM浸提液的50.0 g/L ADM浸提液组、37.5 g/L ADM浸提液组、25.0 g/L ADM浸提液组、12.5 g/L ADM浸提液组、6.5 g/L ADM浸提液组，分别于培养24、48、72 h，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖率并进行细胞毒性分级（样本数为5）；将1只6周龄雄性SD大鼠红细胞分为生理盐水组、超纯水组及添加相应终质量浓度猪ADM浸提液的5 mg/mL ADM浸提液组、10 mg/mL ADM浸提液组、15 mg/mL ADM浸提液组，于反应3 h，采用酶标仪检测血红蛋白的吸光度值代表猪ADM血液相容性（样本数为3）。从陆军军医大学（第三军医大学）第一附属医院泌尿外科2020年7月收治的1名6岁健康男童包皮环切术后废弃包皮中分离培养ESC并采用流式细胞术鉴定。混合培养法构建复合ESC的猪ADM（以下简称ESC/ADM）颗粒，培养3 d后采用HE染色和激光扫描共聚焦显微镜观察ESC/ADM复合效果。将36只7~8周龄雄性无胸腺裸鼠分成单纯磷酸盐缓冲液（PBS）组、单纯ADM组、单纯ESC组、ESC/ADM组，每组9只，并建立全层皮肤缺损创面模型，伤后即刻，创面均一次性采用相应试剂处理。分别于伤后1、7、11、15 d，观察创面愈合情况并计算创面愈合率（样本数为3）；伤后7 d，行HE染色观察创面上皮化情况并测量未上皮化长度（此处及以下样本数均为4）；伤后11 d，行Masson染色观察创面胶原沉积和真皮化情况并计算创面切面真皮面积，行免疫荧光染色并计算创面表达ESC特异性标志物CD49f的细胞数，行实时荧光定量反转录PCR检测创面移植ESC的3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）的mRNA表达。对数据行独立样本 t检验、单因素方差分析、重复测量方差分析、LSD- t检验。 结果:猪ADM为白色微粒状，内部无细胞存在，由网状结构组成，结构排列无序，表面粗糙；猪ADM分别在1 659、1 549、1 239 cm -1波数处出现吸收峰；猪ADM在溶液中主要粒径分布在500~700 nm；猪ADM表面带负电荷。放置30 min、1 d、5 d，猪ADM均形态相对稳定；放置30~120 min猪ADM吸水量保持相对高水平。6.5 g/L ADM浸提液组、12.5 g/L ADM浸提液组、25.0 g/L ADM浸提液组小鼠胚胎Fb在培养24 h细胞毒性分级为1级，其余各组各时间点细胞毒性分级均为0级。反应3 h，超纯水组红细胞中血红蛋白的吸光度值明显高于生理盐水组和15 mg/mL ADM浸提液组（ t值分别为8.14、7.96， P<0.01）。第4代细胞常规培养3 d形态呈鹅卵石样且低表达CD71和高表达CD49f的被鉴定为ESC。猪ADM颗粒上有ESC附着、生长。伤后1 d，单纯PBS组、单纯ADM组、单纯ESC组、ESC/ADM组裸鼠创面大小基本一致。伤后7、11、15 d，各组裸鼠创面收缩，其中单纯ADM组、单纯ESC组、ESC/ADM组裸鼠创面收缩明显。伤后7 d，单纯ESC组、ESC/ADM组裸鼠创面愈合率明显高于单纯PBS组（ t值分别为2.83、4.72， P<0.05或 P<0.01）；伤后11 d，ESC/ADM组裸鼠创面愈合率明显高于单纯PBS组（ t=4.86， P<0.01）；伤后15 d，单纯ADM组、单纯ESC组、ESC/ADM组裸鼠创面愈合率均明显高于单纯PBS组（ t值分别为2.71、2.90、3.23， P<0.05）。伤后7 d，单纯ADM组、单纯ESC组、ESC/ADM组裸鼠创面未上皮化长度分别为（816±85）、（635±66）、（163±32）μm，明显短于单纯PBS组的（1 199±43）μm（ t值分别为5.69、10.19、27.54， P<0.01）。伤后11 d，单纯ADM组、单纯ESC组、ESC/ADM组裸鼠创面切面真皮面积明显大于单纯PBS组（ t值分别为27.14、5.29、15.90， P<0.01）；单纯ADM组和ESC/ADM组裸鼠创面的胶原生成比单纯PBS组明显，单纯ESC组和单纯PBS组相近。伤后11 d，单纯ESC组和ESC/ADM组裸鼠创面中CD49f表达阳性数量分别为（135±7）、（185±15）个，GAPDH的mRNA表达阳性；单纯PBS组、单纯ADM组裸鼠创面均无CD49f、GAPDH的mRNA表达。 结论:ESC/ADM颗粒能够促进裸鼠全层皮肤缺损创面愈合，这可能与其提高了ESC移植后的存活率和ADM促进了真皮结构重排、血管新生有关。

目的:探讨解偶联蛋白2(UCP2)在小鼠海马神经元HT22细胞构建的脑出血模型中的表达规律及其与细胞凋亡、氧化应激反应及线粒体分裂/融合动态平衡之间的关系。方法:将体外培养的HT22细胞分为对照组、造模后3 h组、造模后6 h组、造模后12 h组、造模后24 h组，后4组细胞加入终浓度为10 μmol/L的氯化血红素分别处理3 h、6 h、12 h、24 h，对照组加入等量溶剂处理24 h。采用磷脂结合蛋白(Annexin V)-FITC/碘化丙啶(PI)细胞凋亡检测试剂盒检测5组细胞凋亡率。采用荧光探针法检测5组细胞的活性氧(ROS)水平。采用Western blotting检测5组细胞UCP2，凋亡相关蛋白活化的半胱天冬酶3(cleaved caspase3)、抗凋亡蛋白β细胞淋巴瘤/白血病基因2(bcl2)，线粒体分裂/融合蛋白Fis1、Drp1、Opa1、Mfn2的表达。结果:与对照组比较，造模后3 h组、造模后6 h组、造模后12 h组、造模后24 h组细胞凋亡率、ROS水平、UCP2的表达、凋亡相关蛋白cleaved caspase3的表达及线粒体分裂蛋白Drp1、Fis1的表达均增高，抗凋亡相关蛋白bcl2的表达及线粒体融合蛋白Opa1、Mfn2的表达均减少，差异均有统计学意义( P<0.05)。并且造模后3 h组、造模后6 h组、造模后12 h组、造模后24 h组细胞凋亡率、ROS水平、UCP2、cleaved caspase3、Drp1和Fis1的表达均依次增高，bcl2、Opa1和Mfn2的表达均依次减少，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:UCP2在HT22细胞构建的脑出血模型中表达量的增加具有时间依赖性，且与细胞凋亡程度、氧化应激反应水平、线粒体分裂/融合动态平衡具有密切关系。