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衰老皮肤中ⅩⅦ型胶原蛋白α1对表皮干细胞的影响及微小RNA干预机制
编辑人员丨4天前
目的:探讨ⅩⅦ型胶原蛋白α1(COL17α1)在小鼠衰老皮肤中的表达与作用及其对人表皮干细胞(ESC)干性和增殖能力的影响,并且探讨相关微小RNA(miR)干预人ESC中COL17α1表达的机制。方法:采用实验研究方法。取2个月龄(青年)和24个月龄(老年)雄性C57BL/6J小鼠各12只,取其胸背部全层皮肤标本进行后续检测。对青年小鼠和老年小鼠全层皮肤标本,行苏木精-伊红染色后观察表皮层结构并测量表皮厚度,用透射电子显微镜观察表皮基底膜形态和半桥粒并行半桥粒计数,分别采用实时荧光定量反转录PCR(RT-PCR)法与蛋白质印迹法检测COL17α1的mRNA与蛋白表达,采用免疫荧光法观测COL17α1的蛋白表达与分布。取于解放军总医院第四医学中心行包皮切除手术的3名20~30岁健康男性术后弃用的新鲜包皮组织,提取ESC,取生长良好的细胞进行后续实验。按随机数字表法(分组方法下同)将ESC分为进行相应处理的空白对照组、转染试剂对照组、空载体质粒组、敲低COL17α1质粒组,培养48 h后,采用实时荧光定量RT-PCR法检测COL17α1的mRNA表达,采用蛋白质印迹法检测COL17α1和细胞角蛋白14(CK14)的蛋白表达,采用细胞计数试剂盒8法检测细胞增殖水平。通过DIANA、miRTarBase、miRNAMap、TargetScan、microRNA数据库筛选可能作用于 COL17α1 mRNA 3'非编码区的miR。将ESC分为转染miR模拟物阴性对照物的阴性对照组和转染前述筛选出的各miR的模拟物的各miR模拟物组,转染后48 h,通过蛋白质印迹法检测COL17α1的蛋白表达。基于基因表达综合数据库(GEO)的miR测序数据集GSE114006,使用GEO2R工具统计分析前述筛选出的可造成COL17α1蛋白表达下降的miR在30名青年(18~25岁)人和30名老年(>70岁)人皮肤中的表达。取青年小鼠和老年小鼠全层皮肤标本,采用实时荧光定量RT-PCR法检测前述老年人皮肤中表达增多的miR的表达。取2批ESC,第1批分为COL17α1野生型+miR-203b-3p阴性对照组与COL17α1野生型+miR-203b-3p模拟物组,第2批分为COL17α1突变型+miR-203b-3p阴性对照组与COL17α1突变型+miR-203b-3p模拟物组,分别转染对应序列,48 h后,采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测COL17α1的基因表达水平。组织实验中样本数均为6,细胞实验中样本数均为3。对数据行独立样本 t检验、单因素方差分析、LSD检验或Dunnett检验、Mann-Whitney U检验或Kruskal-Wallis H检验。 结果:与青年小鼠比较,老年小鼠皮肤表皮层与真皮层分界模糊且细胞层次较少,表皮层厚度明显变薄( Z=-2.88, P<0.01),基底膜形态不连续,表皮-真皮连接处半桥粒较少且分布不均,半桥粒数量明显减少( Z=-2.91, P<0.01),COL17α1的mRNA和蛋白表达水平均明显降低( t值分别为10.61、6.85, P<0.01)。与青年小鼠比较,老年小鼠皮肤表皮基底层和毛囊球部的COL17α1蛋白表达均明显减少( Z=-2.24, P<0.05)。培养48 h后,空白对照组、转染试剂对照组、空载体质粒组、敲低COL17α1质粒组ESC中COL17α1的蛋白表达水平分别为1.00±0.27、1.12±0.21、1.13±0.23、0.42±0.18。相较于空白对照组,转染试剂对照组和空载体质粒组ESC中COL17α1的mRNA和蛋白表达水平、CK14的蛋白表达水平及ESC增殖水平均未发生明显变化( P>0.05),敲低COL17α1质粒组ESC中这些指标均明显降低( P<0.05或 P<0.01)。miR-203a-3p、miR-203b-3p、miR-512-5p、miR-124-3p、miR-28-5p、miR-590-3p、miR-329-5p可能结合 COL17α1 mRNA的3'非编码区。转染48 h后,与阴性对照组的1.000±0.224比较,miR-329-5p模拟物组、miR-203b-3p模拟物组和miR-203a-3p模拟物组ESC中COL17α1的蛋白表达水平明显降低(0.516±0.188、0.170±0.025、0.235±0.025, t值分别为3.17、5.43、5.07, P<0.05或 P<0.01)。老年人皮肤中仅miR-203b-3p表达水平明显高于青年人( t=3.27, P<0.01)。老年小鼠皮肤中miR-203b-3p表达水平明显高于青年小鼠( Z=-2.88, P<0.01)。转染后48 h,COL17α1野生型+miR-203b-3p模拟物组ESC中COL17α1的基因表达水平明显低于COL17α1野生型+miR-203b-3p阴性对照组( t=7.66, P<0.01),COL17α1突变型+miR-203b-3p模拟物组ESC中COL17α1的基因表达水平与COL17α1突变型+miR-203b-3p阴性对照组相近( P>0.05)。 结论:COL17α1的mRNA和蛋白表达水平随小鼠年龄增长而减少,可能导致小鼠ESC脱离表皮基底膜。COL17α1的表达减少可抑制CK14的表达与ESC增殖,这可能是老年人皮肤中表皮层变薄和创面愈合减慢的原因。小鼠衰老皮肤中表达增多的miR-203b-3p可以靶向结合 COL17α1 mRNA的3'非编码区,阻碍转录后翻译过程,造成COL17α1蛋白表达减少。
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编辑人员丨4天前
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不同基台材料对人牙龈上皮细胞半桥粒黏附相关基因及蛋白表达的影响
编辑人员丨4天前
目的:探讨聚醚醚酮、氧化锆、纯钛基台材料对人牙龈上皮细胞半桥粒黏附相关基因及蛋白表达的影响,以期筛选出更适合上皮附着的基台材料。方法:制备聚醚醚酮、氧化锆、纯钛试件各48枚,用扫描电镜观察各组表面形貌,用白光干涉仪测量表面粗糙度,光学接触角测量仪测量接触角。采用扫描电镜观察人牙龈上皮细胞在各组试件表面的早期黏附状态,并使用细胞计数试剂盒评估各组人牙龈上皮细胞的增殖能力,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测各组人牙龈上皮细胞半桥粒黏附相关基因及蛋白的表达水平。结果:3组试件均呈平坦、光滑的表面形貌;聚醚醚酮组、氧化锆组和纯钛组平均粗糙度(Ra值)分别为(95.63±2.06)、(37.93±3.56)、(134.2±4.62)nm( F=368.16, P<0.001),平均最大高度(Rz值)分别为(2.42±0.22)、(0.87±0.10)、(3.77±0.28)nm( F=91.95, P<0.001),组间差异均有统计学意义( P<0.05);接触角总体差异无统计学意义( F=0.45, P=0.658)。人牙龈上皮细胞在3组试件表面均呈扁平伸展的多边形、多角形等不规则形状,表现出典型的铺路石样。培养1和3 d时3组细胞增殖能力( A值)差异均无统计学意义( P>0.05);培养5和7 d时聚醚醚酮组细胞增殖能力( A值)均显著大于氧化锆组和纯钛组( P<0.05)。培养3和7 d时聚醚醚酮组层粘连蛋白α3、整合素β4和胶原蛋白17的mRNA和蛋白表达水平均显著大于同时间点氧化锆组和纯钛组( P<0.05)。 结论:聚醚醚酮相较氧化锆、纯钛基台材料更有利于人牙龈上皮细胞半桥粒的黏附。
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编辑人员丨4天前
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大疱性类天疱疮与血管性痴呆的关系及抗体表达分析
编辑人员丨2024/4/27
目的 探讨大疱性类天疱疮(bullous pemphigoid,BP)与血管性痴呆(vascular dementia,VD)的关系及抗体表达.方法 选择2021年1月至2023年1月就诊的BP患者63例作为BP组(n=63),纳入同时间段就诊的VD患者83例作为VD组(n=83),纳入同时间段体检中心明确为健康人群90例作为对照组(n=90).所有患者均收集一般资料及实验室检查资料,并收集所有对象空腹静脉血采用ELISA法检测血清中跨膜半桥粒蛋白(BP180)抗体阳性及浓度情况,而后通过倾向性评分匹配三组样本后比较组间上述数据之间的差异,并分析BP与VD之间的关系.结果 BP组患者嗜酸性粒细胞计数(EOS)及BP180抗体阳性率及抗体浓度高于其他两组,白蛋白低于其他两组(P<0.05).VD组BP180抗体阳性率及浓度高于对照组(P<0.05),VD组和对照组EOS及白蛋白比较差异无统计学意义(P>0.05).VD组患者三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、D-D二聚体及同型半胱氨酸(Hcy)高于其他两组(P<0.05);BP组患者D-D二聚体及Hcy高于对照组(P<0.05),但BP组及对照组TG、TC比较差异无统计学意义(P>0.05).D-D二聚体、Hcy、BP180抗体浓度及BP180抗体阳性是影响VD的独立危险因素(P<0.05).BP180抗体浓度及BP180抗体阳性是影响治BP的独立危险因素(P<0.05).结论 BP180在BP及VD患者中表达变化类似,且可能是两种疾病相互影响的关键因素.
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编辑人员丨2024/4/27
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中性粒细胞参与大疱性类天疱疮发生的相关机制
编辑人员丨2023/8/6
大疱性类天疱疮(bullous pemphigoid,BP)是由自身抗体攻击基底膜带半桥粒蛋白BP230和BP180而导致的以真表皮分离、水疱形成为特点的一种获得性自身免疫性疱病.在IgG被动转移BP鼠模型中,自身抗体攻击基底膜带后可激活补体,肥大细胞脱颗粒,中性粒细胞、嗜酸性粒细胞等聚集,释放蛋白酶损伤基底膜带,导致水疱形成.其中,中性粒细胞的有无直接决定了水疱能否产生,本文对中性粒细胞参与BP发生的具体过程进行综述,以深入了解BP的发生机制,为疾病的干预提供新视角
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编辑人员丨2023/8/6
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整合素β4研究进展
编辑人员丨2023/8/6
整合素又名整联蛋白,是一种介导细胞与其外环境如细胞外基质之间连接的跨膜受体.整合素β4因其特殊的结构,发挥着诸多功能:与整合素α6亚单位组成α6β4,参与构成半桥粒;介导细胞与细胞外基质相互作用、细胞与细胞间相互作用;介导细胞的增殖与存活,迁移和侵袭;通过激活多条信号通路参与各种疾病进程.本文将对整合素β4的结构组成、生理功能及其在呼吸系统、肿瘤、神经系统等相关疾病中的作用进行综述.
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编辑人员丨2023/8/6
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Pautrier小脓肿超微结构的观察
编辑人员丨2023/8/6
虽然蕈样肉芽肿(MF)不足半数病例的表皮内缺少Pautrier小脓肿(PM),但通常PM是MF的特征.本文用电镜研究了一个56岁男性MF肿瘤期的几块皮肤活组织标本,且讨论了它的组织发生学.结果发现:在MF表皮内,容易找到异常的细胞,这些细胞在形态上不同于周围的角朊细胞,每个异常细胞有一大而锯齿分叶状的核,胞浆少,其中可观察到发育好的高尔基器和核糖体,未见张力微丝或桥粒.它们在表皮内单个存在或形成小团.
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编辑人员丨2023/8/6
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类天疱疮扰体表皮基底膜线状免疫荧光带――半桥粒着色的结果
编辑人员丨2023/8/6
以往对沉积在表皮基底膜带的类天疱疮抗体免疫荧光染色的形状各家报道常不同,诸如连续性线状、斑点状、均质状、膜状或管状等,但一般认为最常见的是线状.为了弄清各种免疫荧光形状之间以及这些形状与超微结构的确切关系,作者用成人皮肤、新生儿阴茎包皮、新生小鼠皮肤、兔角膜作为底物经类天疱疮血清处理后进行了细致的免疫电镜和间接免疫荧光的检测.
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编辑人员丨2023/8/6
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大疱性类天疱疮与寻常型天疱疮皮肤细胞因子特征
编辑人员丨2023/8/6
大疱性类天疱疮(BP)与寻常型天疱疮(PV)为自身免疫性大疱性皮肤病。针对半桥粒与桥粒蛋白的循环特异性抗体与皮肤组织结合致病。免疫介导的疾病常有其特征性的细胞因子产生模式。大多数自身免疫性疾病为Th1相关性,以产生白介素(IL)-2、干扰素(IFN)-γ与IL-12为特点。Th2相关性疾病包括变应性、遗传过敏性疾病,则产生IL-4、IL-5、IL-10及IL-13为主。
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编辑人员丨2023/8/6
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角朊细胞的粘附性与表皮分化
编辑人员丨2023/8/6
角朊细胞从基底层向表层分比的过程中伴随有细胞粘合性连接和细胞粘附分子的改变。基底细胞通过半桥粒、灶性接触及其粘附分子――整合素α 6β 4、α 3β 1、α 2β 1、α 5β 1与基底膜相连。基底细胞的侧面和顶面育幼稚的细胞间型粘合连接和桥粒结构。后者在棘层逐步成熟,进入粒层和角化层退化。中介细胞间型粘合连接和桥粒的细胞粘附分子主要为E-钙粘素,P-钙粘素和桥糖蛋白。角朊细胞分化过程中粘耐性改变育蛋白水解酶和糖酶的参与。
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编辑人员丨2023/8/6
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表皮基底膜带――结构,个体发生及其在疾病中的作用
编辑人员丨2023/8/6
超微结构形态学从表皮到真皮依次可分为四个部分,第一部分是沿基底膜排列的细胞的胞浆膜。这些细胞绝大多数是角朊细胞,但黑素细胞和Merkel细胞也与基底膜带(BMZ)毗连。半桥粒沿着基底层角朊细胞胞浆膜的真皮一侧表面分布。放射出张力微丝的半桥粒,至少在形态学上与桥粒十分相似。沿着基底层角朊细胞的胞浆膜,也常见到胞饮性小泡。
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编辑人员丨2023/8/6
