目的 应用网络药理学方法对雷公藤多苷引起睾丸损伤机制进行研究,探讨潜在靶点和作用机制,并进行动物实验验证,为后续该药物的合理使用提供新的研究策略.方法 依托文献查询和TCMSP、GeneCards、OMIM、Metascape数据库挖掘雷公藤多苷中有效成分信息,挑选主要药物活性成分及与睾丸损伤相关性靶点,构建蛋白相互作用(PPI)网络.使用Metascape数据库对核心靶点进行基因本体(GO)基因注释及京都基因与基因百科全书(KEGG)通路富集分析,并进行分子对接和动物实验验证.结果 共筛选出雷公藤多苷18 个活性成分,其中雷酚萜醇、苯代南蛇碱、雷公藤对醌A等为主要活性成分;雌激素受体 1(ESR1)、表皮生长因子受体(EGFR)等为核心靶点;KEGG富集分析雷公藤多苷活性成分作用于睾丸损伤的通路主要涉及癌症信号通路、cAMP信号通路、Ras信号通路等;网络药理学与分子对接结果分析显示呋喃南蛇碱与蛋白激酶B1(Akt1)结合良好,雷公藤对醌A与肿瘤坏死因子(TNF)结合良好,苯代南蛇碱与ESR1 结合良好;动物实验中雷公藤多苷组ESR1、EGFR mRNA表达水平显著升高(P＜0.05).结论 雷公藤多苷致睾丸损伤的机制可能与核心靶点ESR1、EGFR等密切相关.

南蛇藤属(Celastrus L.)植物具有抗肿瘤、抗炎、抗衰老及杀虫抑菌等生物活性,在我国民间以及中医药领域有着悠久的应用历史.南蛇藤属植物的抗炎作用备受关注,相关机制研究取得较大进展,但缺乏系统整理.笔者通过对南蛇藤属提取物及其所含活性成分的药理作用进行总结,发现其对类风湿性关节炎、非酒精性脂肪性肝炎、结肠炎、胃溃疡及神经炎症等炎性疾病模型均具有较好的改善作用,且主要通过降低炎性反应、调节氧化应激及抑制炎性细胞增殖等发挥作用.因此该文主要对南蛇藤属植物及其单体活性成分抗炎的药理作用与机制研究进展按疾病种类进行综述,以期为其抗炎活性的深入研究及相关功能新产品的开发提供参考.

细胞凋亡是一种程序性细胞死亡,与肿瘤的发生发展及治疗密切相关.中医药在胃癌的防治过程中发挥了重要的作用.中医药可以通过多个信号通路促胃癌细胞凋亡.如四藤方、山慈菇、蛇六谷等中药可通过线粒体通路促胃癌细胞凋亡.抗癌灵、南蛇藤、重楼总皂苷等中药可通过死亡受体通路诱导胃癌细胞凋亡.木犀草素、杠柳毒苷、榄香烯等中药可通过调控MAPK通路促胃癌细胞凋亡.南蛇藤、蟾蜍灵、木犀草素等中药可通过影响PI3K/Akt通路促胃癌细胞凋亡.熊果酸、紫杉醇和冬凌草甲素衍生物Geridonin可以通过Pten信号通路促进胃癌细胞凋亡.

目的:探讨南蛇藤活性组分南蛇藤多萜(TTC)与4种一线化疗药物的联用效果,为南蛇藤作为潜在化疗增敏剂的进一步开发利用提供科学依据.方法:采用MTT法测定TTC分别与氟尿嘧啶、吉西他滨、奥沙利铂、紫杉醇4种常用一线化疗药物联用对A549、H1299非小细胞肺癌细胞株增殖的抑制效果,采用Combenefit定量药理学软件的Loewe相加模型评价TTC与化疗药物间的潜在相互作用.结果:TTC普遍在亚半数抑制浓度sub-IC50(25～50μg/mL)下与4种化疗药物产生协同作用,在A549细胞中TTC与紫杉醇的协同抗肿瘤活性最强,而在H1299细胞中TTC与吉西他滨的协同抗肿瘤活性最强.结论:南蛇藤多萜与化疗药物联用体外能够增强化疗药物的抗肿瘤效应,从而有望被进一步开发利用成为肿瘤化疗增敏剂.

目的:验证南蛇藤通过调控内质网应激(E RS)途径减轻氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导巨噬细胞损伤的作用机制.方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予50、100、150 mg/L南蛇藤提取物预处理30 min后加入100mg/mL Ox-LDL损伤24 h,分别采用油红O染色和ELISA法检测细胞内脂质沉积情况和胆固醇含量,ELISA法和TBA法检测细胞内乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)含量,流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS)的释放,MTT法和Annexin V-FITC双染法检测细胞活力和凋亡情况,Western blot检测内质网应激相关蛋白CD36、GRP78、GRP94的表达.结果:南蛇藤浓度依赖性地减轻了Ox-LDL诱导的巨噬细胞内脂质蓄积和巨噬细胞的泡沫化,显著降低了Ox-LDL诱导的细胞LDH及ROS释放,下调了MDA水平,并抑制了Ox-LDL诱导的清道夫受体CD36与葡萄糖调节蛋白78/94(GRP78/94)的高表达.结论:南蛇藤可保护Ox-LDL导致的细胞损伤,其机制可能与调控内质网应激途径有关.

目的 探讨南蛇藤醇抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭的作用机制.方法 将正常培养HeLa细胞分为对照组、南蛇藤醇低、中、高剂量组(终浓度分别为4μmol/L、8 μmol/L和12μmol/L)、阳性对照组(顺铂,终浓度为10μmol/L)、LY294002组(LY294002,终浓度为20μmol/L)和(南蛇藤醇+LY294002)组(南蛇藤醇和LY294002,终浓度分别为12μmol/L和20 μmol/L).MTT法检测各组细胞存活情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Transwell检测细胞的侵袭;蛋白质印迹法检测PI3K/AKT/NF-κB信号通路的表达;采用皮下注射HeLa细胞建立裸鼠模型,观察南蛇藤醇(120mg/kg)对裸鼠移植瘤体积和重量的影响.结果 与对照组相比,南蛇藤醇组、阳性对照组和LY294002组HeLa细胞的相对增殖率、侵袭细胞数均明显下降(P＜0.001),细胞凋亡率明显升高(P＜0.001),p-PI3K、p-AKT、NF-κBp65蛋白表达明显下调(P＜0.001),且随着南蛇藤醇浓度升高,其作用增强;与LY294002组相比,(南蛇藤醇+LY294002)组HeLa细胞的相对增殖率和侵袭细胞数明显下降(q=10.182,q=10.217,P均＜0.001),细胞凋亡率明显升高(q=23.636,P＜0.001);与对照组相比,南蛇藤醇组裸鼠体重、移植瘤的体积和重量明显下降(q=4.100,P＜0.020;q=13.501,P＜0.001;q=5.078,P=0.005).结论 南蛇藤醇可能通过抑制HeLa细胞的PI3K/Akt/NF-κB信号通路,抑制其恶性生物学行为.

目的 探究南蛇藤醇介导的PTEN过表达对食管癌细胞化学敏感性的影响.方法 构建食管癌肿瘤模型小鼠,使用南蛇藤醇(1、5 mg/kg)和顺铂(5 mg/kg)单独或联合对其进行瘤内治疗,观察其肿瘤体积变化和检测30 d时肿瘤质量;免疫组化检测Ki67,VEGF和Caspase 3的表达情况.用不同剂量的南蛇藤醇(0.5、1、2.5、5、10、20、50、80、100μmol/L)处理人食管上皮细胞系(HET-1 A)24 h,CCK8分析检测细胞存活率.顺铂(4μg/mL)预处理EC109/DDP细胞后分别用不同剂量的南蛇藤醇(1、2.5、5μmol/L)处理EC109/DDP细胞,对照组用PBS代替顺铂,CCK8检测细胞存活率;Transwell检测细胞的侵袭情况,Western blot检测细胞中EMT相关蛋白以及凋亡相关蛋白表达情况,Hoechst染色检测细胞调亡情况.结果 南蛇藤醇1 mg/kg和5 mg/kg处理后的食管癌肿瘤模型小鼠体内肿瘤质量和体积均显著降低(P<0.05);PTEN蛋白表达水平显著升高(P<0.05);Ki67,VEGF和Caspase 3阳性细胞数均显著减少(P<0.05).用南蛇藤醇(1、2.5、5μmol/L)处理后,与对照组比较,EC109细胞存活率和侵袭力均显著降低(P<0.05);Ki67、PCNA、N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平显著降低(P<0.05);E-cadherin、cleaved PARP和cleaved caspase 3蛋白表达水平以及细胞凋亡率显著升高(P<0.05);干扰PTEN后细胞存活率以及侵袭力显著升高(P<0.05);凋亡率显著降低(P<0.05).结论 南蛇藤醇介导的PTEN过表达增强顺铂对食管癌细胞EC109生长、侵袭和EMT的抑制作用,促进顺铂诱导的食管癌细胞EC109凋亡,从而增强顺铂对食管癌细胞的化学敏感性.

目的:对灰叶南蛇藤进行化学成分研究.方法:对灰叶南蛇藤95％乙醇提取物的石油醚、乙酸乙酯部位分别采用硅胶、重结晶进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.结果:从灰叶南蛇藤中分离得到18个化合物,分别鉴定为:α?香树脂醇(1)、β?香树脂醇(2)、二十四酸(3)、β谷甾醇(4)、α?香树醇?3β?棕榈酸酯(5)、29?hydroxyfriedelan?3?one(6)、10?eicosenoic acid(7)、二十六烷(8)、鲨烯(9)、9?docosenamide(10)、rel?(3R,4S,5S)?3?[(2R)?2?hydroxynonadecanoyl]?4?hydroxy?5?[(4E)?heptadecane?4?ene]?2,3,4,5?tetrahydrofuran(11)、bis(2?ethylhexyl)benzene?1,2?dicarboxylate(12)、octadec?10Z?enoic acid(13)、celaphanol A(14)、regelindiol A(15)、雷公藤内酯甲(16)、直楔草酸(17)、槲皮素(18).结论:所有化合物均为首次从该植物中分离得到.

目的 观察南蛇藤醇对蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的改善作用.方法 将小鼠随机分为正常对照组、模型对照组及南蛇藤醇组,每组6只.正常对照组喂养蛋氨酸-胆碱充足(MCS)饮食;模型对照组喂养MCD饮食;南蛇藤醇组给予MCD饮食喂养+南蛇藤醇腹腔注射(1 mg·kg-1,隔天1次).均持续喂养5周.称量并记录小鼠体质量及肝质量;苏木精-伊红(HE)染色观察肝组织脂肪变性程度;非酒精性脂肪性肝病活动度(NAS)评分评估小鼠肝病活动度;油红染色法观察小鼠肝组织脂质沉积程度;生化试剂盒检测小鼠肝脏三酰甘油(TG)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测巨噬细胞特异性表面抗原F4/80、白细胞介素-1β(IL-1β)表达;Masson's染色法观察小鼠肝脏纤维化程度;免疫组化观察小鼠肝脏Ⅰ型胶原蛋白α1(COL1A1)阳性细胞.结果 与正常对照组比较,模型对照组小鼠体质量与肝质量均明显减轻(P<0.01);肝组织脂肪变性,NAS评分显著升高(P<0.01);肝组织出现明显脂质沉积,TG含量显著升高(P<0.01);血清ALT及AST明显升高(P<0.01);F4/80、IL-1β显著升高(P<0.01);肝组织出现较多纤维增生,COL1A1阳性细胞明显增加(P<0.01).与模型对照组比较,南蛇藤醇组小鼠肝组织脂肪变性明显减轻,NAS评分显著降低(P<0.01);肝组织脂质沉积明显减轻,TG含量显著降低(P<0.05);血清ALT、AST水平明显降低(P<0.05);F4/80、IL-1β水平显著降低(P<0.05);肝组织纤维增生减轻,COL1A1阳性细胞减少(P<0.01).结论 南蛇藤醇对MCD饮食诱导的小鼠NASH具有抑制作用.

目的 探讨南蛇藤提取物对多发性骨髓瘤细胞(U-1996)增殖、凋亡的影响和分子机制.方法 设置对照组、南蛇藤提取物组、si-NC组、si-LINC00472组、pcDNA-NC组、pcDNA-LINC00472组、南蛇藤提取物+si-NC组、南蛇藤提取物+si-LINC00472组.实时定量PCR检测LINC00472表达,CCK-8和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡,蛋白质印记检测磷酸化的磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3 K)和磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)水平.结果 南蛇藤提取物处理后U-1996细胞活力以及p-PI3 K和p-Akt蛋白表达降低,凋亡率、LINC0047表达升高(P<0.05).抑制LINC00472表达后,U-1996细胞活力以及p-PI3K和p-Akt蛋白表达升高,凋亡率降低(P<0.05).过表达LINC00472后,U-1996细胞活力以及p-PI3 K和p-Akt蛋白表达降低,凋亡率升高(P<0.05).抑制LINC0047能够逆转南蛇藤提取对U-1996细胞增殖、凋亡以及PI3 K/AKT信号通路的影响(P<0.05).结论 南蛇藤提取物通过上调LINC00472抑制PI3K/Akt信号通路来抑制多发性骨髓瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡.