目的:探讨骨髓间充质干细胞(BMMSCs)来源外泌体miR-200a对肾小管间质纤维化的影响及其机制。方法:2019年3月至2020年7月，收集从4周龄SD大鼠(福建医科大学动物实验中心)提取的BMMSCs来源外泌体，与从新西兰兔提取的肾小管上皮细胞共培养，提取BMMSCs来源外泌体，与肾小管上皮细胞共培养，蛋白免疫印迹(Western blot)检测上皮-间充质转化(EMT)标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白的相对表达水平，明确外泌体对EMT的影响。构建过表达和低表达miR-200a的BMMSCs，分别与肾小管上皮细胞共培养，Western blot检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路各标志蛋白的表达水平。双荧光素酶报告实验验证肾小管上皮细胞中miR-200a与β-catenin基因CTNNB1是否直接结合。使用方差分析和独立样本 t检验分析组间差异。 结果:高剂量外泌体组E-cadherin表达水平较低剂量组更低(0.51±0.09比0.78±0.12， t＝3.115， P<0.05)，而N-cadherin(2.05±0.22比1.40±0.13， t＝6.478， P<0.001)和Vimentin(1.01±0.13比0.75±0.12， t＝2.987， P<0.05)表达水平高于后者。高表达miR-200a外泌体处理组E-cadherin表达水平较低表达miR-200a外泌体处理组降低(0.71±0.09比1.48±0.14， t＝4.751， P<0.05)，而N-cadherin(1.55±0.12比0.75±0.10， t＝11.603， P<0.01)和Vimentin(0.88±0.07比0.37±0.04， t＝6.039， P<0.05)表达水平前者较后者更高。Wnt/β-catenin信号通路标志蛋白糖原合成酶激酶3β(GSK3β)表达量在组间差异无统计学意义(0.89±0.21比0.92±0.15， t＝0.130， P>0.05)，而低表达miR-200a外泌体处理组p-GSK3β、β-catenin和T细胞因子-1(TCF-1)表达水平均高于高表达miR-200a外泌体处理组(1.89±0.17比1.15±0.12， t＝4.125， P<0.05；1.32±0.09比0.74±0.15， t＝4.962， P<0.05；0.96±0.08比0.38±0.05， t＝6.740， P<0.05)。双荧光素酶报告实验显示，野生型β-CTNNB1肾小管上皮细胞中，miR-200a组细胞荧光活性显著低于miR-NC组(0.51±0.07比0.98±0.08， t＝13.251， P<0.01)，差异有统计学意义。而突变型β-CTNNB1的细胞中，miR-200a组细胞荧光活性与miR-NC组差异无统计学意义(0.94±0.05比0.96±0.07， t＝0.247， P>0.05)。 结论:BMMSCs来源外泌体miR-200a通过直接作用β-catenin基因CTNNB1，降低β-catenin表达，抑制Wnt/β-catenin通路激活，从而抑制肾小管上皮细胞EMT过程。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-30a通过诱导血管内皮细胞间质化(EndMT)，促进血管内膜增生，影响下肢动脉硬化闭塞症(ASO)进程。方法:苏木精-伊红染色法(HE)检测ASO病变动脉形态、内膜中膜厚度；免疫荧光检测EndMT标志物表达。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，构建EndMT细胞模型。将体外培养的HUVECs分为转染miR阴性对照(miR-NC组)和转染miR模拟物(miR-30a组)。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测EndMT标志物表达。细胞增殖实验检测HUVECs(EndMT)增殖能力、小室细胞迁移实验、划痕实验检测其迁移能力。采用GraphPad Prism 7进行统计学分析， t检验分析实验结果。 结果:ASO动脉内膜增生且呈间质化改变[内膜厚度，对照组(178.40±29.61) μm，ASO (422.10±39.47) μm， t＝4.940， P<0.01， n＝6；中膜厚度，对照组 (315.80±48.46) μm，ASO (656.80±43.91) μm， t＝5.200， P<0.01， n＝6]，差异有统计学意义，miR-30a在HUVECs(EndMT)和ASO内膜中高表达，miR-30a表达上调能够抑制HUVECs的内皮标志物表达，同时促进其间质标志物表达[CD31，对照：3.535±0.116，miR-30a：1.360±0.185， t＝9.966， P<0.01， n＝3；人血管内皮钙黏蛋白(VE-Cadherin)，对照：2.453±0.075，miR-30a：0.793±0.106， t＝12.830， P<0.01， n＝3；α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)，对照：0.792±0.121，miR-30a：6.296±0.380， t＝13.820， P<0.01， n＝3；Ⅰ型胶原(COL1)，对照：0.2413±0.063，miR-30a：2.859±0.142， t＝16.840， P<0.01， n＝3]，差异有统计学意义，并促进HUVECs(EndMT)的增殖迁移能力[细胞迁移率，对照：(50.160±1.210)%，miR-30a：(68.560±1.918)%， t＝8.115， P<0.01， n＝6]，差异有统计学意义。 结论:miR-30a在ASO增生内膜中表达上调，miR-30a能够诱导内皮细胞间质化，增强其增殖迁移能力，导致ASO内膜增生、促进ASO病情进展。

膜性肾病是一种免疫性肾小球疾病。自发现中性内肽酶是膜性肾病的足细胞抗原以来，M型磷脂酶A2受体和1型血小板反应蛋白7A域等足细胞抗原的研究，对原发性膜性肾病的临床诊治产生了重要影响。近期，Exostosin 1和Exostosin 2、神经细胞黏附分子1、神经源性表皮生长因子样分子1、信号素3B和原钙黏蛋白7等新抗原的发现，成为膜性肾病精准诊治的潜在靶点。现就膜性肾病足细胞抗原特点、致病机制及临床意义进行综述。

目的:研究驻景丸加减方含药血清对过氧化氢(H 2O 2)诱导的人视网膜色素上皮(ARPE)-19细胞上皮－间质转化(EMT)的作用及其机制。 方法:选取2月龄SPF级雌性SD大鼠30只，采用随机数字表法将其随机分为空白对照组和驻景丸加减方组，每组15只，分别给予生理盐水和驻景丸加减方连续灌胃7 d，以制备空白血清和含药血清。采用SD大鼠制备驻景丸加减方含药血清。将ARPE-19细胞分为正常对照组，模型对照组，空白血清组，2.5%、5.0%、10.0%含药血清组，SB216763组和SB216763+含药血清组；其中前2个组均于正常培养基中培养，后6个组分别于含空白大鼠血清培养基、相应浓度含药血清培养基、10 μmol/L GSK-3抑制剂SB216763培养基以及10 μmol/L SB216763+10.0%的含药血清培养基中培养；正常对照组常规培养，其他各组先常规培养24 h，后加入终浓度200 μmol/L的H 2O 2继续培养24 h。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活性；Transwell法检测细胞迁移能力；DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)含量；硫化巴比妥酸法检测细胞内丙二醛(MDA)含量；Western blot法检测细胞中Nrf2通路相关蛋白核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)和EMT相关蛋白转化生长因子β2(TGF-β2)、蛋白激酶B(AKT)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、snail家族锌指转录因子1(SNAIL1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。 结果:空白血清组、2.5%、5.0%、10.0%组细胞存活率总体比较差异无统计学意义( F＝0.163， P>0.05)。正常对照组、模型对照组、2.5%含药血清组、5.0%含药血清组、10.0%含药血清组细胞存活率分别为(100.50±5.91)%、(60.87±4.30)%、(73.27±4.46)%、(80.73±5.67)%和(89.90±4.97)%，正常对照组、模型对照组、空白血清组、2.5%含药血清组、5.0%含药血清组和10.0%含药血清组细胞迁移数分别为(84.67±8.33)、(222.33±13.58)、(215.67±10.02)、(174.67±10.60)、(143.67±8.02)和(107.67±6.66)个/视野，总体比较差异均有统计学意义( F＝26.628、99.289，均 P<0.01)。模型对照组细胞内ROS和MDA含量较正常对照组显著增加，差异均有统计学意义(均 P<0.01)；各含药血清组细胞内ROS和MDA含量均较模型对照组显著减少，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。模型对照组细胞内SNAIL1、α-SMA、TGF-β2、p-AKT及p-GSK-3β蛋白相对表达量明显多于正常对照组和各浓度含药血清组，E-cadherin蛋白相对表达量明显少于正常对照组和各浓度含药血清组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与正常对照组比，模型对照组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低，细胞核Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与模型对照组比，各含药血清组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低，细胞核Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。与模型对照组相比，SB216763组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低，细胞核Nrf2蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与SB216763组相比，SB216763+含药血清组细胞质Nrf2、SNAIL1和α-SMA蛋白相对表达量降低，细胞核Nrf2和E-cadherin蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:驻景丸加减方含药血清抑制H 2O 2诱导的ARPE-19细胞EMT，可能与AKT/GSK-3β通路的抑制及Nrf2信号通路的激活有关。

患者女，48岁，体检发现右乳外下象限肿块半年余，增大半个月余。体格检查：右乳7～8点方向距乳头25 mm处可触及一肿块，大小约35 mm×20 mm，质硬，边界欠清，活动度小，无压痛，无皮肤红肿破溃，无"橘皮样改变""酒窝征"；双侧腋下及双侧锁骨上未及肿大淋巴结。实验室检查：肿瘤指标在正常范围内。患者行乳腺B超及乳腺MRI检查(图1)，后穿刺活组织检查提示鳞状细胞癌(简称鳞癌)，为明确右乳病灶是否为原发及排除其他部位有无转移，患者行 18F－FDG PET/CT显像(图2)。术后病理诊断(图3)：鳞癌。免疫组织化学检查：雌激素受体(－)、孕激素受体(－)、人表皮生长因子受体2(1＋)、细胞增殖核抗原Ki－67(30%)、GATA结合蛋白3(＋)、E－钙黏蛋白(＋)、细胞角蛋白广谱抗体(AE1/AE3；＋)、细胞角蛋白5/6抗体(＋)、表皮生长因子受体(＋)、肿瘤蛋白p63(＋)、SRY－box转录因子10(－)。乳腺原发性鳞癌(primary squamous cell carcinoma of breast, PSCCB)属一种特殊类型且少见的乳腺癌，目前对于PSCCB的报道多以临床病理、B超及MR影像表现研究为主 [1]。本例PET/CT显像除右侧乳腺肿块外，全身其他部位未见异常摄取增高灶，可排除其他部位原发鳞癌的可能，为临床诊断PSCCB提供依据。

目的 探讨尿酸盐在慢性肾病并发肾间质纤维化过程中的作用及机制.方法 利用0.2％腺嘌呤的饲料喂养小鼠9周,构建慢性肾病小鼠模型.造模结束后,小鼠眼眶后静脉丛采血,检测肾功能和血尿酸含量;HE染色和PAS染色分析肾脏组织病理变化;Masson染色观察肾脏纤维化程度;尿酸盐染色观察肾组织中尿酸盐沉积;Western blot和免疫组化检测目标分子的表达变化.利用不同浓度尿酸刺激原代培养小鼠肾小管上皮细胞(mRTECs)及人肾小管上皮细胞系(HKC);划痕实验观察尿酸对细胞迁移的影响.结果 动物水平上,生化分析检测结果显示,模型组小鼠血清尿素氮(P=0.006 4)、肌酐(P=0.008 0)、血尿酸(P=0.000 7)水平较对照组明显增加;HE和PAS染色结果显示,模型组小鼠出现严重肾小管损伤及炎症细胞浸润;Masson染色结果显示,模型组胶原沉积明显增加;尿酸盐染色结果显示,与对照组比较,模型组小鼠肾组织出现大量尿酸盐结晶;Western blot和免疫组化结果显示,模型组小鼠波形蛋白、平滑肌肌动蛋白和转化生长因子β1(TGF-β1)水平较对照组升高,E钙黏蛋白水平较对照组降低.细胞水平上,划痕结果显示,尿酸刺激促进肾小管上皮细胞迁移;Western blot检测结果与免疫组化一致.结论 尿酸可通过促进肾小管上皮细胞分泌TGF-β1,进而促进上皮-间质细胞转分化,加速肾间质纤维化的发生.

研究加味防己黄芪汤在小鼠单侧输尿管结扎(UUO)模型中,以及转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠肾小管导管上皮细胞(NRK-52E)纤维化模型中对上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达的影响,探讨加味防己黄芪汤减轻肾间质纤维化的分子机制.对C57/BL小鼠予UUO手术,0.5、2 倍加味防己黄芪汤以及蒙诺阳性对照药给药 7 d后取材,Masson染色观察小鼠肾间质组织胶原沉积情况,Western blot、RT-qPCR检测肾组织中TGF-β1、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、Smad2/3、Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)表达水平.利用SD大鼠制备不同浓度加味防己黄芪汤含药血清,CCK-8检测不同浓度含药血清对NRK-52E增殖活力的影响.TGF-β1 诱导NRK-52E纤维化模型,显微镜观察不同浓度含药血清处理后细胞形态.TGF-β1 诱导 NRK-52E纤维化模型,1 倍加味防己黄芪汤含药血清处理,Western blot、RT-qPCR检测p-Smad2/3、Smad2/3、Snail、E-cadherin、α-SMA、vimentin表达水平,以及同等模型下shRNA沉默Snail基因后,1 倍加味防己黄芪汤含药血清处理,测量指标同上.结果显示,加味防己黄芪汤能改善UUO模型小鼠纤维化损伤,减轻TGF-β1 诱导NRK-52E纤维化模型中的纤维化,使EMT相关指标p-Smad2/3、α-SMA、Snail、vimentin蛋白及mRNA表达降低,E-cadherin蛋白及mRNA表达升高;当shRNA沉默Snail基因后,加味防己黄芪汤含药血清处理前后EMT相关指标E-cadherin、α-SMA及vimentin蛋白表达及mRNA水平差异没有统计学意义.结果表明,加味防己黄芪汤可能通过抑制TGF-β1/Smad/Snail信号通路减轻肾间质纤维化,参与EMT进程.

钙黏附蛋白是一类钙依赖性的黏附分子,是一种细胞跨膜糖蛋白,介导正常组织、肿瘤组织中细胞-细胞间的黏附作用,原钙黏蛋白(protocadherin,PCDH)是其最大的亚家族.PCDH 广泛分布于中枢神经系统,根据基因结构分为非成簇原钙黏蛋白和成簇原钙黏蛋白.PCDH7 属于非成簇PCDHs家族,在人类基因组中定位于 4p15,主要在人类的脑和心脏中表达,具有与经典钙黏附蛋白相似的作用,介导细胞之间的识别和黏附.在多种肿瘤中均检测到不同程度PCDH7的异常表达,PCDH7 可能与肿瘤的增殖、侵袭、转移和预后相关.本文对PCDH7 的基因结构和功能与肿瘤的关系作一综述.

目的 探讨加味补阳还五汤对术后腹腔粘连转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)/Smad3通路和腹膜间皮细胞的上皮-间充质转化的影响.方法 将108只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、透明质酸钠组、加味补阳还五汤组.模型组、透明质酸钠组及加味补阳还五汤组进行术后腹腔粘连模型造模,透明质酸钠为阳性对照组,在手术造模后,一次性腹腔喷洒1％的透明质酸钠凝胶,0.5 mL/kg.加味补阳还五汤组术后第2天开始灌胃,灌胃剂量为19.5 g/(kg·d).分别于术后7、14、28 d分批将动物处死,每次每组处死9只大鼠.在损伤部位取材:应用免疫组织化学法观察粘连部位的纤维化通路相关蛋白TGF-β1、Smad3、Smad7的表达情况;以及其下游胶原沉积相关蛋白Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ,Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ,Col-Ⅲ)的表达情况和上皮-间充质转化(Epithelial mesenchy-mal transition,EMT)相关的蛋白 E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)的表达情况.结果 ①不同组别间,术后7、14、28 d3个时间节点,TGF-β1/Smad3纤维化通路相关蛋白表达情况:与正常组比较,模型组TGF-β1蛋白表达增多(均为P＜0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组TGF-β1蛋白表达减少(均为P＜0.05).与正常组比较,模型组Smad3蛋白表达增多(均为P＜0.05);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Smad3蛋白表达减少(P＜0.05).与正常组比较,模型组Smad7蛋白表达减少(均为P＜0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Smad7蛋白表达增多(均为P＜0.05).②胶原沉积情况:术后7、14、28 d 3个时间节点,Col-Ⅰ蛋白表达存在差异:与正常组比较,模型组Col-Ⅰ蛋白表达增多(均P＜0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Col-Ⅰ蛋白表达减少(均P＜0.01).与正常组比较,模型组Col-Ⅲ蛋白表达增多(均P＜0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组Col-Ⅲ蛋白表达减少(均P＜0.01).③EMT相关指标表达情况:不同组别间,术后7、14、28 d 3个时间节点,E-Cadherin蛋白表达存在差异:与正常组比较,模型组E-Cadherin蛋白表达减少(均P＜0.05);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组E-Cadherin蛋白表达增多(均P＜0.05).与正常组比较,模型组α-SMA蛋白表达增多(均P＜0.01);与模型组比较,透明质酸钠组和加味补阳还五汤组α-SMA蛋白表达减少(均P＜0.05).结论 加味补阳还五汤防治术后腹腔的机制可能是通过抑制TGF-β1/Smad3通路相关蛋白TGF-β1、Smad3蛋白、促进Smad7蛋白的表达抑制纤维化;促进E-Cadherin蛋白、减少α-SMA蛋白表达,减轻腹膜间皮细胞的EMT,抑制Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的表达减少细胞外基质的沉积,从而减轻腹膜粘连.

目的 探究调强放射治疗(IMRT)未分化型鼻咽癌(NPC)的临床疗效及患者治疗前后血清上皮型钙黏蛋白(sE-cad)、血小板源性生长因子(PDGF)水平变化.方法 选取2019年6月-2021年6月收治的84例未分化型NPC患者作为研究对象,按照随机数字表法按1:1比例分为观察组和对照组,每组各42例,对照组采用三维适形放射治疗(3DCRT),观察组采用IMRT治疗.治疗7周后比较两组患者临床疗效,治疗前与治疗7周后肿瘤标志物水平[癌胚抗原(CEA)、鳞状细胞癌相关抗原(SCC-Ag)、角蛋白19片段21-1(CYFRA21-1)],生活质量核心量表(QLQ-C30)评分,纤维化指标[透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC Ⅲ)],血清sE-cad、PDGF水平及治疗期间并发症发生率.结果 治疗7周后,观察组疾病控制率95.24％,显著高于对照组的80.95％(P＜0.05);观察组血清CEA、SCC-Ag、CYFRA21-1水平较对照组低(P＜0.05);观察组QLQ-C30评分较对照组低(P＜0.05);观察组血清HA、LN、PCⅢ水平较对照组低(P＜0.05);观察组血清sE-cad、PDGF水平较对照组低(P＜0.05);观察组并发症发生率较对照组低(P＜0.05).结论 与3DCRT相比,采用IMRT治疗未分化型NPC可有效降低肿瘤标志物及血清sE-cad、PDGF水平,提高生活质量,疗效显著,且对正常组织影响更小,安全性高.