目的:观察脂联素分子受体3(PAQR3)在食管-胃交界腺癌组织中的表达并探讨其临床意义，特别是PAQR3表达水平与转化生长因子-β(TGF-β)通路介导肿瘤转移的相关性。方法:采用免疫组织化学检测180例食管-胃交界腺癌(Siewert Ⅱ型)手术组织标本中肿瘤组织及配对的癌旁正常组织中PAQR3、TGF-β、p-Smad2、p-Smad3、p53、细胞核增殖抗原(Ki-67)及上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达水平；分析PAQR3表达与患者临床病理特征和预后的关系，探讨PAQR3表达与TGF-β通路、EMT过程之间的相关性。组间比较采用单因素方差分析。结果:78.3%(141/180)食管-胃交界腺癌组织的PAQR3蛋白呈低水平表达，显著低于癌旁正常胃组织(1.1%，2/180)。癌组织中PAQR3表达水平与幽门螺杆菌感染( χ2＝73.383， P<0.01)、肿瘤大小( χ2＝51.207， P<0.01)、肿瘤分化( χ2＝82.303， P<0.01)、静脉浸润( χ2＝7.639， P<0.01)、神经侵犯( χ2＝19.047， P<0.01)、浸润深度( χ2＝14.572， P<0.01)、淋巴结转移( χ2＝20.531， P<0.01)、远处转移( χ2＝49.787， P<0.01)及TNM分期( χ2＝147.120， P<0.01)均呈明显负相关；而与性别( χ2＝1.326， P>0.05)、肿瘤诊断时年龄( χ2＝0.815， P>0.05)均无相关。癌组织中PAQR3低表达患者的平均总生存时间显著短于PAQR3正常或高表达患者，两者差异有统计学意义( χ2＝34.587， P<0.01)。癌组织中PAQR3蛋白低表达与TGF-β蛋白上调( r＝-0.768， P<0.01)、p-Smad2蛋白上调( r＝-0.771， P<0.01)、p-Smad3蛋白上调( r＝-0.774， P<0.01)、波形蛋白(Vimentin)蛋白上调( r＝-0.946， P<0.01)、Twist蛋白上调( r＝-0.966， P<0.01)、Snail蛋白上调( r＝-0.931， P<0.01)及SIP1蛋白上调( r＝-0.932， P<0.01)呈明显负相关，与E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白下调呈明显正相关( r＝0.875， P<0.01)。 结论:食管-胃交界腺癌组织中PAQR3蛋白低表达与TGF-β信号通路及EMT激活密切相关，提示PAQR3下调可能是食管-胃交界腺癌转移发生的起始因素，机制上是通过TGF-β/Smad信号通路来实现。

目的:探讨孕激素和脂联素分子受体3(PAQR3)在食管-胃交界腺癌中的作用及相关分子机制。方法:采用免疫组织化学(IHC)和蛋白质印迹法(Western blot)分别检测食管-胃交界腺癌组织和细胞系中PAQR3、转化生长因子(TGF)-β等蛋白表达水平。食管-胃交界腺癌细胞株及人正常胃黏膜和食管黏膜细胞株购自中国科学院上海细胞库；60例食管-胃交界腺癌(Siewert Ⅱ型)组织及配对癌旁正常组织标本取自于2010年1月至2015年12月在浙江省肿瘤医院手术患者；以食管-胃交界腺癌细胞系(OE19)和近端胃癌细胞系(NCI-N87)为模型细胞株建立带绿色荧光蛋白(GFP)标签过量表达野生型PAQR3的稳定细胞株及相对应的过表达GFP的对照细胞株，通过一系列体外实验，检查过表达PAQR3对食管-胃交界腺癌细胞生长、转移和细胞功能的影响及其潜在的分子机制。组间比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA)，行配对 t检验。 结果:与无转移组比较，转移组肿瘤组织中PAQR3、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达显著下调(正常组织比肿瘤组织PAQR3 IHC平均分数为2.9比7.0， χ2＝32.000， P<0.01)，差异有统计学意义，TGF-β、卷曲蛋白(Twist)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达显著上调[无转移组比转移组PAQR3 IHC平均分数为5.2比0.7， χ2＝28.000， P<0.05；无转移组比转移组E-cadherin IHC平均分数为4.1比0.9， χ2＝11.600， P<0.05；无转移组比转移组TGF-β IHC平均分数为1.4比7.0， χ2＝42.400， P<0.05；无转移组比转移组Twist IHC平均分数为6.4比11.2， χ2＝9.700， P<0.05；无转移组比转移组Vimentin IHC平均分数为6.0比11.3， χ2＝8.700， P<0.05]，差异均有统计学意义，此过程伴随上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达量变化，以OE19细胞为例，与OE19-Vector比较，OE19-PAQR3 OV组中N-钙黏蛋白(N-cadherin)下调0.42倍( χ2＝10.200， P<0.05)、蜗牛蛋白(Snail)下调0.38倍( χ2＝9.700， P<0.05)、Twist蛋白下调0.32倍( χ2＝8.400， P<0.05)、Vimentin蛋白下调0.29倍( χ2＝14.300， P<0.05)、E-cadherin蛋白表达上调1.9倍( χ2＝13.200， P<0.05)，差异均有统计学意义；侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2下调0.36倍( χ2＝7.900， P<0.05)、MMP-9下调0.31倍( χ2＝8.700， P<0.05)，差异有统计学意义；TGF-β/Smad通路关键蛋白分子Smad2/3表达水平无明显变化，与对照组比较，Smad2/3蛋白下调0.94倍( χ2＝15.500， P<0.05)，而p-Smad2下调0.24倍( χ2＝14.300， P<0.05)、p-Smad3下调0.19倍( χ2＝12.600， P<0.05)和TGF-β1下调0.21倍( χ2＝9.700， P<0.05)，差异均有统计学意义。 结论:PAQR3在食管-胃交界腺癌组织和细胞中表达下调；PAQR3可抑制食管-胃交界腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力等生物学作用，起着抑癌基因功能；PAQR3通过抑制TGF-β/Smad信号通路抑制食管-胃交界腺癌细胞的上皮间质转换过程，并参与抑制食管-胃交界腺癌的进展。

目的:探讨低氧条件下肺动脉内皮细胞(PAECs)中脯氨酰顺反异构酶(Pin1)的表达及其调控内皮间充质转化(EndMT)的作用及机制。方法:利用低氧(1%O 2)24 h建立低氧诱导的EndMT细胞模型。将PAECs分为4组，常氧组(Nor)、常氧＋Pin1慢病毒敲低组(Nor＋Pin1-shRNA)、低氧组(Hyp)、低氧＋Pin1慢病毒敲低组(Hyp＋Pin1-shRNA)，分别培养24 h。应用5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)方法检测各组细胞增殖，细胞迁移实验(Transwell)检测细胞迁移。蛋白印迹法(Western blot)检测Pin1、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达，并检测EndMT相关标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、锌指转录因子(Snail)以及转化生长因子-β1(TGF-β1)相关信号通路的表达。多组间均数比较采用单因素方差分析。 结果:Nor＋Pin1-shRNA组Pin1的蛋白相对表达量(0.292±0.061)明显低于Nor组(0.798±0.054)，Hyp＋Pin1-shRNA组Pin1的蛋白相对表达量(0.475±0.039)明显低于Hyp组(1.403±0.076)，差异有统计学意义( F＝271.983， P<0.01)；Hyp组(1.135±0.086)和Hyp＋Pin1-shRNA组(1.043±0.054)HIF-1α的蛋白相对表达量明显高于Nor组(0.735±0.042)，差异有统计学意义( F＝60.954， P<0.01)；Hyp组(20.500±1.871)EdU阳性细胞数明显高于Nor组(7.167±1.169)，Hyp＋Pin1-shRNA组(9.327±1.633)EdU阳性细胞数明显低于Hyp组，差异有统计学意义( F＝128.416， P均<0.01)；Hyp组(464.500±10.599)细胞数明显高于Nor组(179.250±11.955)，Hyp＋Pin1-shRNA组(320.000±17.607)细胞数明显低于Hyp组，差异有统计学意义( F＝501.244， P<0.01)；Hyp组(1.205±0.061)α-SMA的蛋白相对表达量明显高于Nor组(0.725±0.089)，Hyp＋Pin1-shRNA组α-SMA的蛋白相对表达量(0.870±0.058)明显低于Hyp组，差异有统计学意义( F＝50.820， P<0.01)；Hyp组(0.547±0.066)VE-cadherin的蛋白相对表达量明显低于Nor组(0.975±0.079)，Hyp＋Pin1-shRNA组(0.797±0.051)VE-cadherin的蛋白相对表达量明显高于Hyp组，差异有统计学意义( F＝27.934， P<0.01)；Hyp组Snail(0.955±0.063)、TGF-β1(1.042±0.087)、p-Smad2(1.180±0.062)的蛋白相对表达量明显高于Nor组(0.510±0.036、0.647±0.053、0.807±0.053)，Hyp＋Pin1-shRNA组Snail(0.492±0.061)、TGF-β1(0.792±0.051)、p-Smad2(0.910±0.036)的蛋白相对表达量明显低于Hyp组，差异有统计学意义( F＝82.842、38.131、48.617， P<0.01)。 结论:低氧条件下，PAECs中Pin1表达升高，并发生EndMT，抑制Pin1可减弱EndMT，其机制是Pin1通过影响TGF-β1-Smad信号通路，促进Snail等转录因子的表达。

目的:研究苦参碱对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导腹膜间皮细胞上皮间充质转分化（EMT）后转录因子Snail2的影响。方法:采用TGF-β1刺激人腹膜间皮细胞并同时予不同浓度苦参碱干预处理，实验分为空白对照组、TGF-β1（5 ng/ml）诱导组、TGF-β1+0.4 mg/ml苦参碱干预组、TGF-β1+0.6 mg/ml苦参碱干预组、TGF-β1+0.8 mg/ml苦参碱干预组和TGF-β1+1.0 mg/ml苦参碱干预组。实时荧光定量PCR和Western印迹检测Snail2、上皮标志分子E钙黏蛋白（E-cadherin）和间质标志分子α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）、胶原Ⅲ（ColⅢ）的表达，Western印迹检测Smad2、Smad3和细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）的蛋白磷酸化水平。结果:TGF-β1（5 ng/ml）刺激能上调人腹膜间皮细胞Snail2、α-SMA、FN和ColⅢ mRNA和蛋白的表达水平，上调Smad2、Smad3和ERK1/2的蛋白磷酸化水平，下调E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平；苦参碱（0.4、0.6、0.8、1.0 mg/ml）干预处理后能下调Snail2和α-SMA、FN和ColⅢ mRNA和蛋白的表达水平以及ERK1/2的蛋白磷酸化水平，上调E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平。结论:TGF-β1能诱导人腹膜间皮细胞EMT，苦参碱可能通过ERK1/2信号通路下调Snail2的表达水平来抑制TGF-β1诱导的人腹膜间皮细胞EMT。

目的 探讨锌指蛋白ZNF407在黑色素瘤(melanoma)中的表达和功能,及对黑色素瘤迁移与侵袭的影响和作用机制.方法 自2015年 1 月至 2021 年 1 月,收集重庆市中医院皮肤科的黑色素瘤临床样本 42 例和 20 例正常色素痣组织,以黑色素瘤组织和细胞系为研究对象,通过免疫蛋白印迹实验和实时荧光PCR检测ZNF407 在黑色素瘤组织中相对表达,实时荧光PCR检测ZNF407 在黑色素瘤细胞系中相对表达;Pearson相关性检测分析ZNF407 与TGF-β1 在黑色素瘤中的表达相关性;以黑色素瘤细胞系A375细胞为研究对象进行ZNF407基因过表达,分别转染pcDNA3.1(+)-Flag-ZNF407(实验组)和pcDNA3.1(+)-Flag-Vector(对照组),未转染为空白对照组.Transwell实验验证实验组和对照组中A375 细胞迁移和侵袭的影响;半定量PCR和实时荧光PCR检测ZNF407 对细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关mRNA表达水平的影响,免疫蛋白印迹实验检测ZNF407 对EMT相关蛋白表达水平的影响;免疫蛋白印迹实验检测ZNF407 对TGF-β信号通路的影响.结果 免疫蛋白印迹实验和实时荧光PCR显示:与色素痣细胞组织相比,ZNF407蛋白和mRNA在黑色素瘤组织中表达下调(P<0.001);实时荧光PCR显示:与正常色素痣细胞相比,ZNF407 mRNA在黑色素瘤细胞中表达下调(P<0.001).Transwell迁移实验显示:与对照组相比,实验组穿出小室细胞数(116±17)低于对照组(265±27,P<0.01)和空白对照组细胞(259±28,P<0.01);侵袭实验显示:实验组穿出小室细胞数(82±14)低于对照组(215±31,P<0.01)和空白对照组细胞(209±32,P<0.01).免疫蛋白印迹实验显示:过表达ZNF407 后,实验组Vimentin、N-cadherin、Twist和MMP7的蛋白表达下调;E-cadherin的蛋白表达上调(P＜0.001);半定量PCR和实时荧光PCR显示:过表达ZNF407后,实验组中干细胞标记物ABCG2、Snail2和OCT4 mRNA表达下调(P＜0.001).Pearson相关性分析显示:黑色素瘤组织中ZNF407 mRNA与TGF-β1的表达呈负相关(P=0.033,r=-0.714).免疫蛋白印迹实验显示:与对照组和空白对照组蛋白水平相比,实验组中TGF-β1、p-Smad1、p-Smad2、p-Smad3、p-Smad4和c-Myc蛋白表达水平降低.结论 ZNF407蛋白和mRNA在黑色素瘤中表达下调,对ZNF407基因过表达能抑制黑色素瘤细胞系的细胞迁移和侵袭;ZNF407基因过表达后可抑制TGF-β/Smad信号及通路下游靶分子的表达,能作为重要的抑癌基因参与其发生发展.

研究加味防己黄芪汤在小鼠单侧输尿管结扎(UUO)模型中,以及转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠肾小管导管上皮细胞(NRK-52E)纤维化模型中对上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达的影响,探讨加味防己黄芪汤减轻肾间质纤维化的分子机制.对C57/BL小鼠予UUO手术,0.5、2 倍加味防己黄芪汤以及蒙诺阳性对照药给药 7 d后取材,Masson染色观察小鼠肾间质组织胶原沉积情况,Western blot、RT-qPCR检测肾组织中TGF-β1、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、Smad2/3、Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)表达水平.利用SD大鼠制备不同浓度加味防己黄芪汤含药血清,CCK-8检测不同浓度含药血清对NRK-52E增殖活力的影响.TGF-β1 诱导NRK-52E纤维化模型,显微镜观察不同浓度含药血清处理后细胞形态.TGF-β1 诱导 NRK-52E纤维化模型,1 倍加味防己黄芪汤含药血清处理,Western blot、RT-qPCR检测p-Smad2/3、Smad2/3、Snail、E-cadherin、α-SMA、vimentin表达水平,以及同等模型下shRNA沉默Snail基因后,1 倍加味防己黄芪汤含药血清处理,测量指标同上.结果显示,加味防己黄芪汤能改善UUO模型小鼠纤维化损伤,减轻TGF-β1 诱导NRK-52E纤维化模型中的纤维化,使EMT相关指标p-Smad2/3、α-SMA、Snail、vimentin蛋白及mRNA表达降低,E-cadherin蛋白及mRNA表达升高;当shRNA沉默Snail基因后,加味防己黄芪汤含药血清处理前后EMT相关指标E-cadherin、α-SMA及vimentin蛋白表达及mRNA水平差异没有统计学意义.结果表明,加味防己黄芪汤可能通过抑制TGF-β1/Smad/Snail信号通路减轻肾间质纤维化,参与EMT进程.

目的 研究血府逐瘀汤对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular en-dothelial cells,PMVECs)内皮间质转化(endothelial-to-mes-enchymal transition,EndMT)的影响,并从 TGF-β1/Smad 信号通路进一步分析其作用机制.方法 采用TGF-β1(5 μg· L-1)建立EndMT细胞模型.实验分组为正常组,模型组(TGF-β1,5 μg·L-1),血府逐瘀汤低、中、高浓度组(3、10、30 mg·L-1 XFZYD+5 μg·L-1 TGF-β1),SB 431542 阳性药组(5 μmol·L-1 SB 431542+5 μg·L-1 TGF-β1).观察细胞形态,鬼笔环肽染色观察细胞骨架,免疫荧光法观察内皮细胞标志物-血小板内皮细胞黏附分子1(CD31)和间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达.蛋白免疫印迹法检测血府逐瘀汤对CD31、α-SMA、Snail、p-Smad2、p-Smad1/5蛋白表达的影响.结果 TGF-β1刺激后,细胞形态由鹅卵石形向梭形转变.CD31、p-Smad1/5表达明显减少,α-SMA、p-Smad2、Snail表达则显著升高.血府逐瘀汤干预后,与模型组相比,细胞形态不同程度的接近于正常组,CD31 和 p-Smad1/5 表达呈上升趋势,α-SMA、p-Smad2、Snail表达呈下降趋势.结论 血府逐瘀汤可以减轻大鼠肺微血管内皮细胞发生内皮间质转化,其作用可能是通过影响TGF-β1/Smad信号通路实现的.

目的 基于转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad信号通路探究黄芪葛根汤与远志汤合方抑制糖尿病动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞间质化的作用机制.方法 将70只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(糖脉康颗粒)、黄芪葛根汤与远志汤合方1组(简称"合方1组")、黄芪葛根汤与远志汤合方2组(简称"合方2组").空白对照组喂食普通饲料,第29天给予大鼠一次性腹腔注射柠檬酸缓冲液;其他组喂食高脂饲料,第29天给予大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素诱导2型糖尿病动脉粥样硬化模型,连续灌胃49 d.苏木精—伊红染色法观察主动脉的组织形态.检测各组大鼠血糖和血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin A1c,HbA1c)、高密度脂蛋白胆固醇(high-den-sity lipoprotein-cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)水平;采用酶联免疫吸附试验检测血清波形蛋白(Vimentin)、Twist1、TGF-β、锌指转录因子1(Snail1)水平;采用Western blot法检测肝脏固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-binding protein-1 c,SREBP-1c)和主动脉 Smad-2、Smad-3蛋白表达水平;采用qRT-PCR法检测葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter-4,Glut-4)、Vimentin、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)、SREBP-1c mRNA表达水平.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠血糖、HbA1c、TG、LDL-C、Vimentin、Twist 1、TGF-β、Snail1、SREBP-1c、Smad-2、Smad-3 表达水平显著升高(P＜0.05),HDL-C、Glut-4、AMPK表达水平显著降低(P＜0.05).与模型组比较,合方1组、合方2组大鼠血糖、HbA1c、TG、TC、LDL-C、Vimentin、SREBP-1c、Twist1、TGF-β、Snail1、Smad-2、Smad-3 水 平显著 降低(P＜0.05),HDL-C、Glut-4、AMPK水平显著升高(P＜0.05).结论 黄芪葛根汤与远志汤合方抑制主动脉内皮细胞间质化的作用与其参与主动脉TGF-β/Smad信号通路有关.

目的 探讨湿生扁蕾总(山)酮介导TGF-β/Smad和自噬相关通路对NCM460细胞上皮间质转化(EMT)的影响.方法 采用2.5μg/mL脂多糖(LPS)持续干预细胞14 d建立EMT模型,CCK-8法筛选最佳湿生扁蕾总(山)酮给药剂量.设计空白组、模型组、吡菲尼酮组(200 μg/mL)和湿生扁蕾总(山)酮低、中、高剂量组(50、100、200 μg/mL),采用 Western blot 法检测细胞 ZO-1、α-SMA、Beclin-1、P62、Bcl-2、LC3B 蛋白表达,RT-qPCR 法检测细胞ZO-1、α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、Snail1 mRNA表达,免疫荧光观察细胞中α-SMA表达,TUNEL染色观察细胞凋亡情况,MDC染色和透射电镜分别观察细胞中自噬囊泡和自噬小体数目.结果 湿生扁蕾总(山)酮质量浓度小于200 μg/mL时对细胞活率无明显影响(P＞0.05),故选择50、100、200 μg/mL为低、中、高剂量组.与空白组比较,模型组细胞 ZO-1、Beclin-1、Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ 蛋白和 ZO-1 mRNA 表达降低(P＜0.01),α-SMA、TGF-β1、Smad2、Smad3、Snail1mRNA和α-SMA、P62蛋白表达升高(P＜0.01);与模型组比较,湿生扁蕾总(山)酮组均能改善以上指标(P＜0.05,P＜0.01).结论 湿生扁蕾总(山)酮能抑制NCM460细胞EMT发生进程,其机制可能与抑制TGF-β/Smad 通路和增强细胞自噬有关.

目的 探讨IL-6/JAK/STAT3和Smad3/TGF-β1信号通路在肝癌细胞上皮-间质转化(EMT)发生过程中的作用.方法 分别予 TGF-β1、IL-6、AG490刺激人肝癌细胞株(HepG2、Bel7402、M HCC97H、HCCLM3)后,qPCR检测Snail、STAT3的mRNA表达水平,蛋白质免疫检测p-STAT3/STAT3、p-Smad3/Smad3、TGF-β1以及EMT相关分子标志物Snail、E-Cadherin、Vimentin的蛋白表达水平.结果 TGF-β1可以诱导 HepG2细胞 EM T 的发生,下调 E-Cadherin的表达,上调Vimentin、Snai的表达.IL-6在肝癌细胞中通过刺激STAT3,激活Smad3/TGF-β1通路,进而上调EMT 相关分子标志物Snail、Vimentin的表达.AG490(一种JAK2的特异性抑制剂)抑制p-STAT3/STAT3、p-Smad3及EMT相关分子标志物Snail的表达.结论 STAT3在 TGF-β1诱导的肝癌细胞 EMT 发生过程中作为一个正向调控因子,IL6/JAK/STAT3和Snail/Smad3/TGF-β1信号通路协同促进肝癌细胞EMT的发生.