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番连化浊方对急性高脂血症小鼠胆固醇代谢紊乱的调节作用
编辑人员丨2天前
目的:探讨番连化浊方对急性高脂血症小鼠胆固醇代谢紊乱的调节作用.方法:采用Triton-WR1339构建C57BL/6小鼠急性高脂血症模型,给药5 d后,测定血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏病理变化;油红O染色检测肝脏内脂质累积情况;蛋白质印迹法检测肝脏去唾液酸糖蛋白受体1(ASGR1)、肝X受体α(LXRα)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ABCA5、细胞色素P450 7A1(CYP7A1)蛋白表达变化.结果:与模型组比较,番连化浊方能显著降低血清中TC、TG、LDL-C、GOT、GPT含量,同时升高HDL-C含量(均P<0.05);显著上调ABCA1、ABCG5、LXRα、CYP7A1蛋白表达水平,显著下调ASGR1蛋白表达水平(均P<0.05);显著减少肝细胞内脂质累积,改善肝脏病理形态.结论:番连化浊方可能通过调控ASGR1/LXRα/CYP7A1信号通路促进急性高脂血症小鼠的胆固醇外排,降低血脂.
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编辑人员丨2天前
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去唾液酸糖蛋白受体(A SGPR)在N-二硝基亚乙胺诱导原位肝癌模型、原位移植肝癌模型大鼠体内的表达与分布
编辑人员丨2024/4/13
目的 测定去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)在N-二硝基亚乙胺(DEN)诱导大鼠原位肝癌模型(DEN-HCC-Rat)和原位移植大鼠肝癌模型(OTT-HCC-Rat)中的表达.方法 DEN-HCC-Rat造模:模型组SD大鼠按照20 mg·kg-1 ig 0.25%DEN水溶液,每周1次,0.025%DEN水溶液供动物饮用;对照组每周ig 1次0.9%氯化钠溶液,灭菌水供动物饮用,于造模第4、10、18、22周取材.OTT-HCC-Rat造模:模型组SD大鼠肝叶注射N1-S1细胞,假手术组大鼠麻醉后给予微创缝合处理,于注射后14 d取材.HE染色观察肝组织病变;通过免疫组化、免疫荧光、Western blotting和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验检测各组ASGPR表达及分布.结果 通过HE染色确定DEN-HCC-Rat和OTT-HCC-Rat造模成功.在DEN-HCC-Rat 中,免疫组化、免疫荧光、Western blotting、qRT-PCR结果均显示,与对照组比较,模型组大鼠肝组织ASGPR表达显著上调(P<0.05、0.01),且呈时间相关性;在O TT-HCC-Rat中,免疫组化结果显示模型组ASGPR表达显著高于假手术组(P<0.05),免疫荧光、Western blotting、qRT-PCR结果显示ASGPR在模型组与假手术组之间无显著性差异.结论 DEN-HCC-Rat模型更好地模拟肿瘤微环境改变,且ASGPR在肝癌区域表达高于对照组大鼠肝脏,故可利用ASGPR介导肝靶向制剂的转运,提高肝靶向药物治疗效果.
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编辑人员丨2024/4/13
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ASGR1在肝细胞癌中的意义及机制研究
编辑人员丨2023/12/9
目的·探究去唾液酸糖蛋白受体 1(asialoglycoprotein receptor 1,ASGR1)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的意义及潜在机制.方法·通过R语言分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中ASGR1在肝癌患者中的表达情况并绘制相关生存曲线.利用人类蛋白质图谱(The Human Protein Atlas,HPA)数据库获得人体正常肝组织和肝癌组织的免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)数据来分析ASGR1的蛋白表达情况.利用流体动力学尾静脉注射(hydrodynamic tail vein injection,HTVI)递送方法,在免疫完全的小鼠肝脏中敲除Asgr1探究其在体内的致瘤功能,并通过蛋白免疫印迹法(Western blotting,WB)验证基因敲除效率.利用R语言进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析及相关性分析,利用基因探针富集(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)软件进行 GSEA hallmark相关通路分析,利用实时荧光定量 PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)在小鼠肝癌组织中验证糖酵解关键基因表达水平.结果·ASGR1 在肝癌组织中显著低表达,在肝癌患者中ASGR1的低表达与患者较差的总体生存期(overall survival,OS)、无疾病间隔(disease free interval,DFI)、无进展间隔期(progression free interval,PFI)和疾病特异性生存期(disease specific survival,DSS)相关;肿瘤分级程度越高的肝癌患者ASGR1 基因表达水平越低.人体正常肝组织ASGR1蛋白的表达显著高于肝癌组织.在免疫完全的肝细胞癌小鼠模型中,小鼠内源性Asgr1敲除可增加肝组织中肿瘤结节的大小和数量.TCGA数据库中ASGR1低表达组肝癌患者富集到多条癌症及代谢相关通路,ASGR1 表达与部分糖酵解关键基因表达呈负相关,Asgr1 敲除组的小鼠肝癌组织中糖酵解水平高于对照组,提示ASGR1低表达很可能促进肝癌的生长发展,加强代谢重编程促进肿瘤的合成代谢发展.结论·ASGR1在肝癌患者中表达显著降低,与患者的预后呈正相关;小鼠体内敲除Asgr1可促进肝细胞癌的发生发展;ASGR1 可以作为肝癌预后不良的潜在生物标志物和潜在治疗新靶点.
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编辑人员丨2023/12/9
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酶促合成3种半乳糖-胆固醇配体及其与肝靶向性的构效关系研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 酶促法构建3种不同类型的半乳糖-胆固醇配体修饰的阿霉素(doxorubicin,DOX)脂质体,研究其在小鼠体内的药动学及组织分布特征.方法 利用脂肪酶在非水相中合成了3种不同结构的半乳糖-胆固醇配体:CHS-C8-GalNAc、CHS-C8-GAL、CHS-C8-LA;利用MS、NMR鉴定产物结构;采用薄膜分散-梯度载药法制备DOX脂质体并对其理化性质进行表征;以小鼠为实验对象,采用尾iv给药,通过比较3种配体修饰的DOX脂质体在小鼠体内的药动学与组织分布特征来阐明配体中半乳糖基的结构与去唾液酸糖蛋白受体之间的构效关系.结果 产物经MS、NMR鉴定均为目标产物,产率均>90%;采用薄膜分散-梯度载药法制备的DOX脂质体粒径<90 nm,PDI<0.1,包封率>99%,24 h渗漏率<5%,Zeta 电位接近于0;3种配体分子对肝脏亲和力大小依次为CHS-C8-GalNAc> CHS-C8-LA >CHS-C8-Ga1;肝脏对CHS-C8-GalNAc修饰的脂质体的摄取几乎完全被预注射的asialofetuin所抑制(P<0.01),而对CHS-C8-Gal及CHS-C8-LA修饰的脂质体无显著的抑制效果(P>0.05).结论 含有N-乙酰半乳糖胺基(N-acetylgalactosamine,GalNAc)为末端的配体分子能被去唾液酸糖蛋白受体高效识别,而含有D-半乳糖基(D-galactose,Gal)或乳糖醇基(lactitol,LA)为末端的配体分子易被肝枯否细胞上的半乳糖粒子受体所竞争性结合.
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编辑人员丨2023/8/6
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肝细胞癌循环肿瘤细胞的监测及其临床意义
编辑人员丨2023/8/6
目的 评价肝细胞癌(HCC)患者循环肿瘤细胞(CTCs)监测对手术切除HCC的意义.方法 选取行手术治疗的HCC患者60例,应用基于生物素化去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)的循环HCC细胞分离/鉴定系统及免疫组织化学技术( IHC)于术前、术后第1天及第7天检测外周静脉血中CTCs阳性率,分析不同时期CTCs阳性率的差异及术前CTCs阳性率与患者临床资料的关系,Kaplan-Meier生存曲线分析CTCs阳性率与患者预后的关系.结果 术后第7天CTCs阳性率显著低于术前及术后第1天(P<0. 05).术前CTCs阳性患者肿瘤直径、数量及血管浸润率均显著高于阴性患者(P<0. 05),而年龄、性别、甲胎蛋白(AFP)浓度、乙肝表面抗原(HbsAg)水平、肿瘤分化程度、Child分级差异无统计学意义(P>0. 05),术前CTCs阳性患者预后总生存时间显著短于阴性患者(P<0. 05).结论 CTCs可在一定程度上反映HCC患者病情进展,并可作为预测患者预后的指标之一.
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编辑人员丨2023/8/6
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去唾液酸糖蛋白受体介导的新型肝细胞靶向磁共振对比剂的体外实验研究
编辑人员丨2023/8/6
目的:探讨去唾液酸糖蛋白受体(Asialoglycoprotein receptor,ASGPR)介导的新型肝细胞靶向磁共振对比剂(Fe-HSA-LA)对大鼠正常肝细胞(BRL 3A)的靶向性及利用MR检测的可行性.方法:制备Fe-HSA-LA,透射电镜(TEM)观测其表征,MR检测其T2弛豫率.采用CCK-8法检测Fe-HSA-LA的细胞毒性.以10μg Fe/mL和50μg Fe/mL浓度的Fe-HSA-LA和PEG-USPIO分别孵育BRL 3A细胞及Colon26细胞后普鲁士蓝染色,对细胞悬液进行MR T2加权成像及T2 map成像,利用原子吸收光谱法(AAS)测定各组标记细胞的结合铁量.结果:Fe-HSA-LA和PEG-USPIO的Z-平均水合粒径分别为(53.38±17.07)nm和(16.57±4.18)nm,Zeta电位分别为(-23.3±9.10)mV和(2.57±0.83)mV,T2弛豫率分别为168.4 mM-1s-1和416.3 mM-1s-1.细胞毒性实验表明,Fe-HSA-LA浓度≤50μg Fe/mL时,BRL 3A细胞存活率达到95%以上.普鲁士蓝染色显示BRL 3A细胞结合的Fe-HSA-LA含量最高(P<0.05).磁共振检测显示,当Fe-HSA-LA浓度≥3.125μg Fe/mL时,Fe-HSA-LA标记的BRL 3A细胞的信号降低最明显,细胞内的铁含量最高(P<0.05).标记细胞R2值和细胞内铁含量之间具有良好的相关性.结论:Fe-HSA-LA对BRL 3A细胞具有靶向效应,可采用3.0T MR对其进行监测.
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编辑人员丨2023/8/6
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去唾液酸糖蛋白受体1在动脉粥样硬化中的研究进展
编辑人员丨2023/8/5
心血管疾病严重威胁全球人类的生命健康,动脉粥样硬化是其主要的病理学基础.动脉粥样硬化是一种脂质代谢紊乱引发的慢性血管壁炎症过程.去唾液酸糖蛋白受体1作为凝集素家族成员,参与血清糖蛋白的内吞和降解,在多种生理过程中发挥重要作用.有研究表明去唾液酸糖蛋白受体1突变与低密度脂蛋白胆固醇水平等心血管疾病风险相关,提示去唾液酸糖蛋白受体1可能与动脉粥样硬化的发生发展有着紧密的联系.本文就去唾液酸糖蛋白受体1在动脉粥样硬化中的作用进行综述.并对其可能的机制进行总结.
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编辑人员丨2023/8/5
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Gal/GalNAc配体中连接臂的亲水/疏水性对其修饰脂质体肝靶向性的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的 本实验研究Gal/GalNAc-胆固醇(cholesterol,CHS)配体中连接臂的亲水/疏水性及其修饰的脂质体表面荷电性对去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)亲和力的影响,为构建高效的Gal//GalNAc配体修饰的靶向肝癌细胞递药载体提供理论指导和实验依据.方法 采用酶促法合成具有疏水性连接臂的Gal/GalNAc-CHS配体:CHS-C8-GalNAc、CHS-C8-Gal、CHS-C8-Lac 和具有亲水性连接臂的 Gal/GalNAc-CHS 配体:CHS-DIO-GalNAc,其中 CHS-DIO-GalNAc 为首次报道.将hydrogenated soya phosphatide(HSPC)、CHS和各种配体按(6∶3∶1)摩尔比例混合(如制备阴离子脂质体则加入脂质总质量1%的DSPG-Na),然后采用薄膜分散-高压挤出-硫酸铵梯度法制备配体修饰载多柔比星脂质体.以小鼠为实验对象,采用尾iv给药,对比4种Gal/GalNAc配体修饰的多柔比星脂质体在小鼠体内血液和肝组织分布特征.结果 CHS-DIO-GalNAc经MS、NMR和HMBC鉴定为目标产物,产率>90%;制得脂质体外观圆整,边缘清晰,粒径介于60-75 nm,Zeta电位介于-6-+5 mV(阴离子脂质体Zeta电位介于-4--17 mV),poly dispersity index<0.1,包封率>98%,泄露率<3%.小鼠体内实验结果显示CHS-DIO-GalNAc修饰的脂质体在血液中的消除速率、肝脏组织的蓄积率均显著高于由CHS-C8-GalNAc、CHS-C8-Gal和CHS-C8-Lac修饰的脂质体.通过体内ASGPR竞争性抑制实验,证明小鼠体内肝脏对CHS-DIO-GalNAc和CHS-C8-Gal-NAc配体修饰脂质体的高摄取率是由肝实质细胞膜表面ASGPR介导的主动内吞作用.结论 Gal/GalNAc配体结构中连接臂的亲水性越强,ASGPR对脂质体表面修饰的Gal/GalNAc的识别效率越高.脂质体中加入负电荷磷脂可协同增强ASGPR对脂质体表面修饰的Gal/GalNAc配体亲和力.本研究成果将为设计ASGPR高亲和力的Gal/GalNAc配体提供有益的指导.
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编辑人员丨2023/8/5
