目的:通过检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)和叉头蛋白转录因子O亚型(FOXO)3a在结肠癌患者血清中的水平，分析两者在结肠癌中的关系以及联合检测预测结肠癌发生的诊断效能。方法:选取2019年9月至2020年9月西安国际医学中心医院确诊并收治的结肠癌患者105例作为结肠癌组，65例同期经活检确诊的结肠息肉患者作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测患者血清中DNMT1、FOXO3a水平；Pearson相关分析结肠癌患者血清中DNMT1、FOXO3a的相关性；采用受试者工作特征曲线对DNMT1、FOXO3a水平在结肠癌中的诊断价值进行评估。结果:对照组与结肠癌组患者血清中DNMT1水平分别为0.93±0.28和1.34±0.35，与对照组相比，结肠癌组患者中DNMT1水平显著升高，差异具有统计学意义( t＝7.990， P<0.001)；两组患者血清中FOXO3a水平分别为1.04±0.39和0.69±0.18，与对照组相比，结肠癌组患者中FOXO3a水平降低，差异具有统计学意义( t＝7.940， P<0.001)。DNMT1和FOXO3a的水平在结肠癌患者血清中呈负相关( r＝-0.687， P<0.001)。DNMT1预测结肠癌发生的曲线下面积(AUC)为0.843，敏感性为71.40%，特异性为90.80%；FOXO3a预测结肠癌发生的AUC为0.812，敏感性为88.60%，特异性为67.70%；二者联合预测结肠癌发生的AUC为0.859，敏感性为89.50%，特异性为92.30%；与FOXO3a单独检测相比，二者联合检测对结肠癌的预测价值更高( Z＝1.982， P＝0.047)。 结论:结肠癌患者血清中DNMT1水平升高，FOXO3a水平则降低，二者在结肠癌患者血清中呈负相关，二者联合检测能够有效提高结肠癌的诊断价值。

为了比较高盐和低盐胁迫对大黄鱼(Larimichthys crocea)肝脏能量代谢和线粒体自噬的影响差异及其作用机制,将体质量为(53.46±1.47)g大黄鱼放入盐度为12、25或40的水体暴露1d、3d和7d,取其肝脏样本检测氧化损伤、能量代谢和线粒体自噬相关指标.结果显示,胁迫1d时,高盐组的大黄鱼肝脏三羧酸循环酶活力和线粒体自噬基因表达水平显著高于低盐组,表明鱼类在盐度胁迫初期需要消耗更多的能量,并提高线粒体自噬来应对高盐胁迫.胁迫7d时,高盐组的大黄鱼肝脏ATP合成酶活力和微管相关蛋白轻链3基因表达水平低于低盐组,活性氧簇和乳酸含量,乙酰辅酶A羧化酶活力高于低盐组,表明高盐组的大黄鱼在胁迫末期降低了有氧代谢和线粒体自噬,提高了无氧代谢,导致机体能量供应不足,线粒体自噬受到抑制,从而加重了鱼类氧化损伤.在盐度胁迫过程中,腺苷酸活化蛋白激酶和叉头框转录因子O亚型3分别在调控能量代谢酶活力和线粒体自噬基因表达方面发挥重要作用.研究结果揭示了高盐和低盐胁迫对大黄鱼能量代谢与线粒体自噬的影响差异及其初步机制,可为大黄鱼养殖水体的盐度调节方案制定及养殖水域选择提供基础资料.

目的 探究前列腺癌中叉形头转录因子的O亚型-3(FOXO3a)、胰岛素样生长因子-ⅡmRNA结合蛋白3(IMP3)的表达及临床意义.方法 收集62例前列腺癌标本、53例良性前列腺增生患者标本,使用HE染色观察两组前列腺腺体形态变化,RT-PCR法测定前列腺组织中FOXO3a、IMP3 mRNA的表达,免疫组化法检测前列腺组织中FOXO3a、IMP3蛋白表达,分析FOXO3a、IMP3蛋白表达与临床病理参数的关系,采用Kaplan-Meier对5年生存情况进行分析,Log-Rank法检测组间生存差异.结果 HE染色显示前列腺癌组织腺体结构混乱,大小形态不规则,腺体消失.前列腺癌中FOXO3a mRNA表达量低于前列腺增生组织,IMP3 mRNA表达量高于前列腺增生组织,差异有统计学意义(P<0.05).前列腺癌中FOXO3a蛋白阳性表达率低于前列腺增生组织,IMP3蛋白阳性表达率高于前列腺增生组织,差异有统计学意义(P<0.05).FOXO3a表达与病理分期、浸润程度、淋巴结转移存在一定关系(P<0.05),IMP3表达与病理分期、病理分级存在一定关系(P<0.05).FOXO3a阳性表达者、IMP3阴性表达者5年内生存率高于FOXO3a阴性、IMP3阳性表达,生存曲线对比,差异均有统计学意义(χ2=9.190,P=0.002;χ2=7.269,P=0.007).结论 FOXO3a在前列腺癌中低表达,IMP3高表达,提示在前列腺的发展中发挥重要作用,可作为治疗效果、病情程度以及预后的参考指标.

目的:探讨FOXO3a在缺氧诱导骨肉瘤细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药中的作用.方法:利用RT-PCR和Western blot-ting方法检测人骨肉瘤细胞U-2OS在常氧及缺氧条件下FOXO3a的表达水平,Western blotting检测转染FOXO3a-siRNA和HIF-1α-siRNA对细胞内FOXO3a和HIF-1α表达的影响,CCK-8和Annexin V/PI染色法检测FOXO3a在缺氧诱导骨肉瘤细胞DDP耐药中的作用.结果:缺氧可使人骨肉瘤细胞U-2OS中FOXO3a mRNA和蛋白表达升高(均P＜0.05).FOXO3a的表达受HIF-1α调控,与正常细胞组和转染阴性序列HIF-1α-NC组相比,HIF-1α-siRNA组FOXO3a蛋白表达量均显著降低[(0.38±0.03) vs (0.89±0.08),(0.91 ±0.07),均P＜0.01].在缺氧条件下,FOXO3a-siRNA可降低U-2OS细胞对DDP的耐受性[(38.50±2.83)％ vs (61.75±5.73)％,P＜0.01],增加DDP诱导的U-2OS细胞凋亡[(73.41±6.13)％ vs (32.38±2.23)％,(55.89±4.46)％,均P＜0.05].结论:缺氧通过HIF-1α依赖的方式诱导骨肉瘤细胞内FOXO3a表达,从而增强瘤细胞对DPP的耐药性.

目的 探讨微小RNA-182-5p(miR-182-5p)靶向调控叉形头转录因子O亚型3a(FoxO3a)调节焦亡对肝缺血再灌注损伤的影响.方法 建立小鼠肝脏缺血再灌注模型.按随机数字表法将40只小鼠分为5组,每组8只,分别为假手术(sham)组,缺血再灌注(IR)各组(缺血1.5 h,按再灌注时间分为IR 2 h组、IR 6 h组、IR 12 h组和IR 24 h组).细胞实验分组分为两部分,(1)缺氧模型建立,分为control组和IR组.(2)缺氧/复氧模型建立,分为对照组、mimic组,inhibitor组和inhibitor+siRNA组.HE染色观察肝组织病理变化;免疫细胞化学染色检测FoxO3a表达分布情况;荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测miR-182-5p、FoxO3a、半胱天冬酶-1(Caspase1)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18表达情况;分析miR-182-5p与FoxO3a基因相关性;免疫荧光检测Caspase1表达情况;ELISA检测IL-1β和IL-18表达情况;CCK-8试剂盒检测细胞活性变化情况.结果 IR处理后小鼠肝组织损伤增加,再灌注12 h时损伤最重,同时FoxO3a、Caspase1、IL-1β、IL-18表达增加(P<0.05),诱导焦亡产生;IR处理后小鼠肝组织内miR-182-5p表达水平较sham组升高(P<0.05).体外培养小鼠肝细胞AML12,IR处理后miR-182-5p表达上调,FoxO3a表达下调,同时Caspase1表达升高(P<0.05).过表达miR-182-5p能降低FoxO3a表达水平;反之能增加FoxO3a表达量,进而降低Caspase1、IL-1β、IL-18的表达,增加肝细胞活性(P<0.05).结论激活miR-182-5p能加重肝缺血再灌注损伤,而抑制miR-182-5p能减轻肝缺血再灌注损伤,其机制可能与miR-182-5p通过靶向调控FoxO3a激活肝细胞焦亡、影响Caspase1、IL-1β、IL-18表达有关.

目的 研究舟山海岛地区胃癌组织中人表皮生长因子受体2 (HER2)表达水平与聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1),真核起始因子4E(eIF4E),细胞周期蛋白E(cyclinE),叉头转录因子O亚型(FOXO) 3a的基因表达情况关系,并研究PARP1、eIF4E、cyclinE,FOXO3a与胃癌临床病理特征的相互关联.方法 收集18例原发性胃癌患者手术切除的肿瘤组织及相应的癌旁组织,利用反转录与实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测PARP1、eIF4E、cyclinE和FOXO3a的mRNA表达情况,分析其与HER2免疫组化结果及临床病理特征的关系.结果 FOXO3a与cyclinE基因在胃癌组织中的表达量明显高于癌旁组织,差异均具有统计学意义(P＜0.05).EIF4E、FOXO3a与cyclinE基因在HER2阳性胃癌患者组织中的表达量明显高于HER2阴性患者,差异均具有统计学意义(P＜0.05).PARP1 mRNA表达与胃癌肿瘤大小呈负相关,eIF4E mRNA表达与临床病理分级呈相关(P＜0.05).结论 胃癌组织中PARP1、eIF4E、cyclinE,FOXO3a与HER2具有明显相关性,参与胃癌的发生发展过程.

[目的]观察槲皮素对骨骼肌氧化应激及线粒体自噬的影响,并探讨相关信号通路.[方法]大鼠分为对照组(controlgroup,Con)、离心运动+生理盐水组(eccentric exercise+saline group,Ex+S)和离心运动+槲皮素组(eccentric exercise+quercetingroup,Ex+Qu).离心运动大鼠进行下坡跑,跑台速度为18～20 m/s,坡度-15.,90 min/d,连续5d.槲皮素干预为运动后槲皮素生理盐水溶液灌胃(100 mg/kg).分离骨骼肌,ELASA法检测白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量,比色法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western blotting检测一磷酸腺苷依赖性蛋白激酶(adenosine monophosphate dependent proteinkinas,AMPK)、叉形头转录因子O亚型3a (forkhead box transcription factorO subtype 3a,FOXO3a)和Bcl2/腺病毒E1B19kD相互作用蛋白3 (Bcl2/adenovirusE 1B 19kD interacting protein 3,Bnip3)蛋白表达.[结果]与Con组比较,Ex+S组IL-1β和MDA含量均显著升高(P＜0.01),AMPK、FOXO3a和Bnip3蛋白表达量显著降低(P＜0.01);Ex+Qu组IL-1β含量、AMPK和Bnip3蛋白表达量显著升高(P＜0.05～0.01).与Ex+S组比较,Ex+Qu组IL-1β和MDA含量均显著降低(P＜0.05～0.01),AMPK、FOXO3a和Bnip3蛋白表达量显著升高(P＜0.01).[结论]槲皮素可通过抑制离心运动后氧化应激,通过激活AMPK上调FOXO3a-Bnip3介导的线粒体自噬,从而抑制炎症反应,发挥保护效应.

目的 探讨叉头转录因子O亚型(FoxO)3a对PC12细胞朊蛋白管家基因(PRNP)表达调控的影响.方法以PC12细胞为研究对象,采用siRNAs沉默基因实验、实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹检测PRNP转录及蛋白表达水平.通过双荧光素酶(Luc)报告基因检测试验检测Luc活性,进而评估启动子的活性.结果FoxO3a基因沉默后,S1探针(S1)组PRNP基因表达明显上升(P<0.05);S1组FoxO3a基因被沉默后,朊蛋白(PrP)蛋白表达显著升高,与基因水平一致;双荧光素酶报告基因检测结果显示,与基础对照组(pGL3-Basic+pRL-Tk)相比,阳性对照组(pGL3-Control+pRL-TK)FLuc/Rluc值明显提高(P<0.01),实验组Ⅰ(pGL3-PNRP+pRL-TK)FLuc/Rluc也显著高于基础对照组(P<0.01);当pGL3-PNRP质粒、pcDNA3.1-FoxO3a高表达质粒与海肾荧光素酶pRL系列(pRL-TK)质粒共转入细胞内,48 h后,与实验组Ⅰ相比,实验组Ⅱ(pGL3-PNRP+pcDNA3.1-FoxO3a+pRL-TK)的FLuc/RLuc值明显下降(P<0.01).结论FoxO3a可以负调控PRNP基因的表达,这种调控是通过结合PRNP基因启动子区域而抑制其转录来实现的.

目的:探讨补肺健脾方对香烟烟雾提取物(CSE)诱导大鼠成肌细胞(L6细胞)蛋白激酶B(AKT)/叉头转录因子O亚型3a(FOXO3a)/Bcl-2相互作用的死亡介质(Bim)信号通路的影响.方法:正常培养的L6细胞随机分为正常对照组、CSE组、补肺健脾方(FP)组,分别给予10％空白血清、10％空白血清+10％CSE、10％补肺健脾方血清+10％CSE培养基培养24h后,采用荧光定量PCR技术检测AKT、FOXO3a、Bim mRNA表达的变化;采用Western Blot技术检测AKT、p-AKT、FOXO3a、p-FOXO3a和Bim蛋白表达的变化.结果:与正常对照组比较,CSE组L6细胞FOXO3a和Bim mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.01,P＜0.05),p-AKT、p-FOXO3a蛋白表达显著下降(P＜0.05);与CSE组比较,FP组FOXO3a mRNA表达显著下降(P＜0.05),p-AKT、p-FOXO3a蛋白表达显著增加(P＜0.05),Bim mRNA和蛋白表达均显著降低(P＜0.05).结论:补肺健脾方能够调控L6细胞AKT/FOXO3a/Bim信号通路,从而减少骨骼肌细胞凋亡,改善骨骼肌功能障碍.

目的 建立精神分裂症的腹侧海马损伤大鼠模型,并探讨模型大脑中蛋白激酶B(PKB/Akt)和叉头型转录因子O亚型(FoxOs)蛋白磷酸化活性水平.方法 健康雄性SD乳鼠随机分为2组,腹侧海马损伤组(NVHL)和对照组,每组各8只大鼠,利用脑立体定位技术注射鹅膏蕈氨酸制备腹侧海马损伤模型.第56～60天时,大鼠接受自发活动、前脉冲抑制(PPI)等行为学测试.测试完成3 d后取大鼠脑组织进行形态学观察.采用Western blot测定大鼠皮层和纹状体Akt/FoxOs磷酸化水平.结果 与对照组大鼠相比,NVHL大鼠腹侧海马明显损伤.安非他命诱导的自发探索活动增加[(1014±72)次比(753±87)次,P<0.01],PPI受损[PP6:(5.04±3.24)％比(22.08±14.26)％,PP9:(11.26±5.24)％比(25.16±13.45)％,PP12:(8.17±10.45)％比(29.16±10.25)％,均P<0.01].大脑皮层Akt/FoxO1和纹状体Akt/FoxO1/FoxO3a磷酸化水平降低(P<0.05).结论 腹侧海马损伤是一个广泛应用的精神分裂症动物模型,海马损伤后大鼠皮层和纹状体Akt/FoxOs蛋白磷酸化水平下降,提示该通路参与了精神分裂症的过程.