为了比较高盐和低盐胁迫对大黄鱼(Larimichthys crocea)肝脏能量代谢和线粒体自噬的影响差异及其作用机制,将体质量为(53.46±1.47)g大黄鱼放入盐度为12、25或40的水体暴露1d、3d和7d,取其肝脏样本检测氧化损伤、能量代谢和线粒体自噬相关指标.结果显示,胁迫1d时,高盐组的大黄鱼肝脏三羧酸循环酶活力和线粒体自噬基因表达水平显著高于低盐组,表明鱼类在盐度胁迫初期需要消耗更多的能量,并提高线粒体自噬来应对高盐胁迫.胁迫7d时,高盐组的大黄鱼肝脏ATP合成酶活力和微管相关蛋白轻链3基因表达水平低于低盐组,活性氧簇和乳酸含量,乙酰辅酶A羧化酶活力高于低盐组,表明高盐组的大黄鱼在胁迫末期降低了有氧代谢和线粒体自噬,提高了无氧代谢,导致机体能量供应不足,线粒体自噬受到抑制,从而加重了鱼类氧化损伤.在盐度胁迫过程中,腺苷酸活化蛋白激酶和叉头框转录因子O亚型3分别在调控能量代谢酶活力和线粒体自噬基因表达方面发挥重要作用.研究结果揭示了高盐和低盐胁迫对大黄鱼能量代谢与线粒体自噬的影响差异及其初步机制,可为大黄鱼养殖水体的盐度调节方案制定及养殖水域选择提供基础资料.

基于2020年9月、2020年11月、2021年1月、2021年4月连续4个季度的大陈岛礁海域21个底拖网站位的鱼类样本,对局地尺度下大陈岛礁海域鱼类群落的时空格局进行了分析.结果表明:4个季度共采集鱼类99种,隶属15目48科81属,其中鲈形目占比最大(50.51％);优势鱼类中,龙头鱼(Harpadon ne-hereus)为全年优势种,六丝钝尾虾虎鱼(Amblychaeturichthys hexanema)是除夏季外其他季节的优势种,镰鲳(Pampus echinogaster)是夏秋季的优势种,而大头银姑鱼(Pennahia macrocephalus)、小黄鱼(Larimichthys poly-actis)、灰海鳗(Muraenesox cinereus)和大黄鱼(Larimichthys crocea)等仅在单一季节成为优势种;聚类和排序分析显示,大陈岛礁海域的夏、秋和冬3季鱼类群落可明显分为岛礁近河口群落和开阔海域群落2种类型,而春季鱼类群落则可分为岛礁群落和非岛礁群落2类,且群落种类组成在各季节不同区域间均存在显著差异(P＜0.05);冗余分析表明,深度、表层温度、底层盐度和底层温度为影响该海域鱼类群落结构的首要环境因子(P＜0.05).研究发现,大陈岛礁海域的鱼类群落存在局地尺度上的区域差异和季节动态,资源结构以小型低值鱼类为主.

为了响应"健康中国"行动,减少人均食盐摄入量,对大黄鱼腌制过程中NaCl的扩散过程进行准确地描述具有重大意义.文章使用COMSOL Multiphysics有限元分析软件对大黄鱼的湿腌过程建立瞬态仿真模型,通过与实验结果进行对比分析发现,在腌制的前 6 h,NaCl的扩散速率较快,扩散区域主要集中在外表层,在 6 h～48 h内扩散速度逐渐放缓.该模型考虑了盐水和鱼肉发生扩散时的物质交换,所以模型的边界条件应该设置为随着扩散通量的增加盐水浓度逐渐减小的动态变化.文章还讨论了鱼肉块的尺寸以及在恒定浓度下不同物质的量的NaCl对腌制过程的影响,所建模型可以为大黄鱼腌制的工艺优化提供参考.

泛素缀合酶E2是蛋白质泛素化系统中的关键酶,对降解的靶蛋白的特异性选择起决定性作用,参与了细胞内80％以上的蛋白降解,对于细胞周期调控、细胞凋亡、基因转录及表达等生理活动具有重要的调控作用.本研究从已构建的大黄鱼(Larimichthyscrocea)性腺线性化cDNA文库中筛选出泛素缀合酶(Ubiquitin-conjugating enzymes E2 D4,Lc-UBE2D4)同源基因片段,利用SMART-RACE方法克隆出其全长cDNA序列,并利用荧光定量PCR技术检测其在大黄鱼不同组织和性腺不同发育阶段的差异表达情况.结果显示,Lc-UBE2D4基因全长798 bp,其中ORF为441bp,可编码147个氨基酸,含有一段典型的泛素缀合酶UBC结构域及其半胱氨酸激活位点.定量PCR结果分析发现,Lc-UBE2D4在脾脏和性腺中表达量较高,在脾脏和精巢的表达水平极显著高于其他各组织(P＜0.01),同时在卵巢中的表达亦显著高于除脾脏和精巢外的其他各组织(P＜0.05);通过对Lc-UBE2D4基因在性腺不同发育阶段表达模式的研究发现,该基因在精巢3个时期中的表达水平显著高于各发育阶段的卵巢(P＜0.05),推测Lc-UBE2D4基因在大黄鱼性腺发育过程中起着重要的调节作用,脾脏中的高表达也暗示其可能参与免疫机能.

目的:克隆鳜鱼MDA5基因cDNA序列,研究聚肌苷酸胞苷酸[Poly(I:C)]感染过程中MDA5的表达规律.方法:利用RT-PCR和RACE技术克隆鳜鱼MDA5全长序列,构建Poly(I:C)感染模型,分析MDA5在鳜鱼脾脏和鳃组织中的表达规律.结果:鳜鱼MDA5 cDNA全长3556 bp,包括142 bp 5'UTR、438 bp 3'UTR和2976 bp开放读框,共编码991个氨基酸残基.MDA5蛋白具有RLR家族的典型特征,即N端含有2个CARD结构域,C端含有DEXDc、解旋酶和RD结构域,序列分析发现鳜鱼的MDA5与横斑石鲷、大黄鱼的同源性较高,分别达85.4％、79.8％.组织表达谱分析显示,鳜鱼MDA5基因在不同组织中普遍表达,用Poly(I:C)抗原刺激后,MDA5 mRNA表达显著上调,其中脾脏组织在诱导8h后达到峰值,而在鳃组织中表达持续显著上调.结论:MDA5在鳜鱼免疫应答中起重要作用.

[背景]菌蜕是诱导PhiX 174噬菌体裂解基因E(LysisE)在革兰氏阴性菌中表达后所获得无细胞内容物的细菌空壳.菌蜕生物安全性高,能以类似活菌方式诱导机体产生良好的系统和黏膜免疫应答.[目的]对分离自患溃疡病大黄鱼肝脏中的病原菌株16-3进行种属鉴定,利用温控调节表达系统控制PhiX 174噬菌体裂解基因E在该菌株中的表达来制备菌蜕,为防控鱼类溶藻弧菌感染提供有效手段.[方法]采用形态特征观察、生理生化特性测定及16S rRNA基因序列分析等方法对菌株16-3进行鉴定;构建温控裂解质粒pBV220-LysisE,并将其电转至溶藻弧菌菌株16-3,形成重组溶藻弧菌菌株16-3(pBV220-LysisE);将不同起始浓度的重组溶藻弧菌培养物同时进行42℃升温诱导,比较其溶菌动力曲线和裂解效率的差异;在最佳条件下制备溶藻弧菌菌株16-3菌蜕,电镜观察其形态与结构,采用倾注平板法测定冻干菌蜕中的活菌数.[结果]综合菌株16-3在形态、生理生化及16S rRNA基因系统发育等方面的特性,确定其为溶藻弧菌;构建了温控裂解质粒pBV220-LysisE和重组溶藻弧菌菌株16-3(pBV220-LysisE);溶藻弧菌菌株16-3菌蜕制备的最佳条件是选择起始浓度OD600为0.3的菌液进行诱导,诱导3h后即可收获菌蜕,其裂解效率为96.9‰,但经冻干处理后的菌蜕无活菌残留;电镜观察发现菌株16-3菌蜕保持原细胞的基本形态,但细胞表面有明显的溶菌孔道,且由于细胞内容流失而使细胞表面发生皱缩.[结论]制备出溶藻弧菌菌株16-3菌蜕,为其作为疫苗或疫苗递送载体奠定了基础.

[背景]鳗弧菌是海产动物弧菌病的主要病原,在海水水域中广泛存在.鳗弧菌为了适应环境变化会生成生物膜,形成自我保护,对其防治是水产养殖行业的一大难题. [目的]探讨致病性鳗弧菌(Vibrio anguillarum) BYK0638生物膜的形成特性,为进一步研究鳗弧菌生物膜形成机制和致病机理提供参考.[方法]采用改良的微孔板法研究静置培养条件下鳗弧菌(V.anguillarum) BYK0638在96孔酶标板上的成膜情况,CCK-8法(Cell counting kit-8)定量检测生物膜中鳗弧菌的活力.[结果]鳗弧菌BYK0638能够在聚苯乙烯酶标板上形成稳定而明显的生物膜,其生物膜的OD450值在24 h达到峰值,60 h后趋于稳定;在107-108 CFU/mL范围内,鳗弧菌生物膜的OD450值显著高于其他试验组(P＜0.05);25℃时的生物膜OD450值显著高于其他温度生物膜的形成量;在pH 4.0-11.0范围内,当pH值为7.0时鳗弧菌形成的生物膜量最高,在pH值为3.0和12.0时鳗弧菌几乎不形成生物膜;在TSB培养基中加入0.03-2.00 mmol/L CaCl2,鳗弧菌生物膜形成量与未添加CaCl2对照组无显著性差异;在TSB培养基中加入0.03 mmol/LMgC12,可促进鳗弧菌生物膜形成;NaCl浓度为5％时,形成的生物膜OD450值最高;鳗弧菌在大黄鱼表皮黏液、肝脏、前肠、后肠组织提取液包被的96孔酶标板上形成的生物膜显著高于其他黏液和组织提取液包被组(P＜0.05).[结论]致病性鳗弧菌BYK0638能形成稳定而明显的生物膜,其生物膜形成与外界环境因子变化有密切的关系,培养时间、初始菌浓度、温度、pH、Mg2+、盐度及不同组织和黏液等各种环境因子均能显著影响鳗弧菌生物膜的形成.

为了研究亚麻籽油(LO)和豆油(SO)完全替代鱼油(FO)对大黄鱼(Larimichthys crocea)肝脏和肌肉脂肪酸组成及Δ6Fad (Δ6 Fatty acid desaturase)基因表达的影响.实验用豆油和亚麻籽油替代鱼油制备了3种等氮等脂的精制饲料, 在海水浮动网箱中进行了为期10周的养殖实验.实验结果表明: (1)鱼油组的增重率、饲料效率和特定生长率均显著高于亚麻籽油组和豆油组(P<0.05), 但对成活率, 肝体指数和脏体指数没有显著影响(P>0.05); (2)亚麻籽油和豆油完全替代鱼油显著改变了鱼体肝脏和肌肉的脂肪酸组成, 降低了肝脏和肌肉LC-PUFA (Long chain-polyunsaturated fatty acid)的相对含量(P<0.05), 在亚麻籽油组(LO)和豆油组(SO)中没有显著差异(P>0.05), 在各处理组中, 肌肉的n-3LC-PUFA的相对含量显著高于肝脏(P<0.05); (3)亚麻籽油和豆油显著上调了肌肉和肝脏中Δ6Fad基因的表达量(P<0.05), 其表达量在肝脏中分别升高了7.6和6.5倍, 在肌肉中分别上升了2.2和2.8倍.结果表明, 在实验条件下亚麻籽油和豆油完全替代鱼油对大黄鱼生长具有不利影响, 亚麻籽油和豆油替代鱼油降低了肝脏和肌肉中LC-PUFA的含量, 提高了Δ6Fad基因的表达量.

以鱼粉和小麦蛋白粉为蛋白源,配制成6种等氮等脂(粗蛋白45％;粗脂肪10％)的饲料,研究其对大黄鱼(Larimichthys Crocea)幼鱼生长、肠道组织结构及肠道微生物菌群的影响.这6种饲料是以发酵豆粕分别替代基础饲料(含40％鱼粉)中0(FSM0,对照组)、15％(FSM15)、30％(FSM30)、45％(FSM45)、60％(FSM60)和75％(FSM75)的鱼粉制作而成.经过56d的生长实验,结果表明,饲料中随着发酵豆粕替代比例的升高,各处理组大黄鱼幼鱼(10.49±0.03)g的存活率无显著性差异(P>0.05),但FSM60和FSM75组有下降趋势;相比FSM0组,FSM60和FSM75组的特定生长率(SGR)和增重率(WGR)显著降低(P<0.05),饲料系数(FCR)显著升高(P<0.05);摄食率(FI)FSM 60和FSM 75组显著高于FSM0、FSM15、FSM30和FSM45组(P<0.05).肠道组织结构研究发现,各处理组肠道组织结构后肠黏膜、皱襞高度、固有膜宽度和杯状细胞个数均无显著性差异(P>0.05).Illumina-Mi Seq高通量测序技术分析发现,FSM0(TC对照组)、FSM45(TB最佳生长组)和FSM75(TW最差生长组)组Chao1、香农指数(Shannon)、辛普森指数(Simpson)和覆盖率(Good coverage)均无显著性差异(P>0.05);基于门水平,TC、TB和TW组大黄鱼幼鱼肠道优势菌群为厚壁菌门(Firmicutes);而在属水平,类芽孢杆菌(Paenibacillus)占绝对优势.从属水平差异菌属研究发现,发酵豆粕对大黄鱼幼鱼肠道菌群有一定的影响:与最差生长组(TW)相比,最佳生长组(TB)和对照组(TC)均显著增加了类芽孢杆菌(Paenibacillus)和嗜碱菌属(Alkaliphilus)的物种丰度(P<0.05);与TW组相比,TB组水栖菌属(Enhydrobacter)和TC组副球菌属(Paracoccus)的物种丰度均显著降低(P<0.05).结果表明,发酵豆粕替代鱼粉达45％时对大黄鱼幼鱼的生长、肠道组织结构及肠道优势菌群没有负面影响,即发酵豆粕替代饲料(含40％鱼粉)中45％的鱼粉较为适宜.

大黄鱼、小黄鱼、舟山带鱼和曼氏无针乌贼为舟山传统“四大经济海产”,营养丰富,本研究对舟山常见7种海产品分部位进行营养分析,为高值化精深加工和综合利用提供理论和实验依据.1材料与方法1.1材料样品来自舟山海域,各取10尾.取上述样品的肌肉100g、鱼皮和鱼鳔绞碎分装并置-20℃冰箱保存备用.1.2方法1.2.1一般营养成分:水分:GB 5009.3-2016常压干燥;灰分:GB5009.4-2016高温灼烧;粗蛋白:GB 5009.5-2016凯氏定氮;粗脂肪:GB5009.6-2016索氏抽提.