目的:探讨微小核糖核酸876-5p(micro ribonucleic acid-876-5p, miR-876-5p）通过靶向叉头盒蛋白M1(forkhead box M1，FOXM1）对儿童髓母细胞瘤（medulloblastoma ，MB）细胞增殖的影响。方法:收集2018年1月至2020年10月在湖南省儿童医院进行手术治疗的30例MB患儿临床资料，其中男21例，女9例，年龄为（10.42±2.17）岁，范围为5~14岁。通过qPCR检测肿瘤组织和癌旁组织标本中miR-876-5p和FOXM1、TAp73、Beclin1、Livin、Cyclin D1在mRNA水平的表达情况；通过CCK8和Transwell实验观察过表达miR-876-5p后对MB细胞的增殖和侵袭能力的影响；通过qPCR和WB实验检测过表达miR-876-5p前后，FOXM1、TAp73、Beclin1、Livin、Cyclin D1在蛋白或mRNA水平表达的变化。结果:miR-876-5p在MB中表达显著降低（ P<0.001），过表达miR-876-5p能够显著抑制MB细胞的增殖和侵袭能力（ P<0.01）。FOXM1在MB中表达上调，其表达与miR-876-5p呈负相关（ r=-0.527， P=0.013 ）。在MB细胞中过表达miR-876-5p能够抑制FOXM1的表达。此外，在MB中，miR-876-5p的表达与TAp73和Beclin1呈正相关（ r=0.506， P=0.008； r=0.535， P=0.003），与Livin和Cyclin D1 mRNA呈负相关（ r=-0.496， P= 0.011； r=-0.574 ， P=0.005 ）。与之相反，FOXM1的表达与TAp73和Beclin1呈负相关（ r=-0.554 ， P=0.007 ； r=-0.497， P=0.016 ），与Livin和Cyclin D1呈正相关（ r=0.502， P=0.009 ； r=0.476， P=0. =0.015 ）。此外，miR-876-5p在MB细胞中可以下调Livin和Cyclin D1的表达，上调TAp73在Beclin1的表达。 结论:miR-876-5p具有抑制MB增殖和侵袭的作用，而FOXM1可能促进MB增殖和侵袭。miR-876-5p可能通过靶向调控FOXM1促进机体内抑癌基因的表达并抑制致癌基因表达，最终抑制MB细胞增殖和侵袭。

调节性T细胞（Treg细胞）对于免疫反应非常重要。它们通过抑制过度的免疫应答来维持免疫稳态，其功能失调可影响多种人类疾病的发生发展，包括自身免疫性疾病、变应性疾病和恶性肿瘤等。既往认为Treg细胞属于稳定细胞，但近期多项研究表明，在某些疾病中，Treg细胞可重新分化为Treg细胞亚群，我们称之为辅助性T细胞（Th细胞）样Treg细胞。这些细胞与Th细胞共存，在表达叉头状螺旋转录因子3（Foxp3）并保有常规Treg细胞强大免疫抑制功能的同时，也表达CD4 +Th细胞的关键转录因子并分泌相应的炎性因子。各种Th样Treg细胞亚群的存在增加了病理条件下免疫环境的复杂性。本文对几种常见Treg细胞亚群的表型特征、分化机制和功能研究进行综述，同时对Treg细胞亚群与变应性鼻炎、慢性鼻窦炎伴鼻息肉、头颈部肿瘤等耳鼻咽喉科常见疾病的发病关系进行总结，以期能够深入认识Treg细胞亚群的功能并为相关疾病的靶向治疗提供依据。

目的:探讨叉头状转录因子O3（FOXO3）在小鼠肝脏糖代谢中的作用。方法:将雄性肝脏激活蛋白（LAP）启动子控制下且表达四环素调节的反式激活因子（tTA）的转基因小鼠（LAP-tTA小鼠）与雌性荧光素酶-tet操作元件（tetO）7-FOXO3的组成型活性等位基因小鼠［（tetO）7.FOXO3CA小鼠］杂交，获得FOXO3CA hep小鼠（tTA +/FOXO3CA +，肝脏FOXO3条件性高表达，7只）。以tTA -和（或）FOXO3CA -小鼠作为对照组（9只）。通过IVIS活体成像、实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、Western blotting以及免疫组化检测各组小鼠肝脏FOXO3表达情况，RT-qPCR检测相关糖异生基因［葡萄糖6-磷酸酶（ G6pc）、磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶（ Pepck）、丙酮酸脱氢酶激酶4（ Pdk4）］的mRNA水平。监测小鼠血糖、血清胰岛素，并进行葡萄糖耐量实验以及胰岛素耐量实验。利用免疫组织化学染色评估胰腺胰岛增生、胰岛素以及胰高血糖素表达。组间比较采用 t检验。 结果:IVIS活体成像、RT-qPCR、Western blotting以及免疫组化证实FOXO3CA hep小鼠肝脏FOXO3高表达，且主要表达于肝细胞核内，FOXO3高表达导致肝细胞体积明显小于对照组肝细胞。与对照组相比，7周龄FOXO3CA hep小鼠的空腹血糖水平显著升高［分别为（165.7±24.1）和（87.4±12.1）mg/dl， P<0.001］，糖异生基因 G6pc、 Pepck、 Pdk4的mRNA水平显著增加（均 P<0.001）。与对照组相比，9周龄FOXO3CA hep小鼠空腹血糖下降［分别为（55.6±6.1）和（82.8±17.2）mg/dl， P=0.001］，胰岛素水平显著升高［分别为（10.01±1.56）和（1.50±0.82）ng/ml， P<0.001］。免疫组织化学染色结果提示，FOXO3CA hep小鼠较对照组胰岛细胞显著增生，胰岛细胞呈现胰岛素强阳性，胰岛素耐量实验提示存在胰岛素抵抗。 结论:FOXO3持续高表达可促进肝脏糖异生相关基因的上调、血糖紊乱和胰岛素水平升高、胰岛增生及胰岛素抵抗。

转录调节因子FoxN1是叉头基因家族的一员，被认为是诱导胸腺退化或者异常增生的关键下游调控因子 [1]。本研究旨在观察不同类型胸腺瘤组织中FoxN1基因表达水平，探讨其对胸腺瘤Thy0517细胞增殖、凋亡、侵袭的影响作用。

目的:初步探讨白细胞介素（IL）-23受体（IL-23R）过表达对实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）模型小鼠辅助性T细胞17 （Th17细胞）/调节性T细胞（Treg细胞）平衡的影响。方法:8周龄雌性C57BL/6J小鼠12只，随机分为LV-Ctrl组、LV-IL-23R组，每组各6只。两组小鼠经尾静脉分别注射LV-Ctrl、LV-IL-23R慢病毒；注射后7 d采用光感受器间维生素A类结合蛋白 1-20主动免疫构建EAU小鼠模型。免疫后13 d开始，每2天使用间接检眼镜观察小鼠眼底并进行临床评分。免疫后30 d，苏木精-伊红染色观察小鼠视网膜组织病理学改变。酶联免疫吸附测定检测两组小鼠血清中IL-17水平；流式细胞仪检测Th17细胞和Treg细胞比例；实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-23R、IL-17、维甲酸相关孤儿受体γt （RORγt）、IL-10和叉头状转录因子p3 (Foxp3） mRNA相对表达量。组间比较采用重复测量方差分析、独立样本Mann-Whitney U检验和独立样本 t检验。 结果:与LV-Ctrl组比较，LV-IL-23R组小鼠视网膜炎症反应更重。免疫后13 d，LV-IL-23R组、LV-Ctrl组小鼠眼底炎症评分差异无统计学意义（ t=-2.001， P=0.058 ）；免疫后15~ 29 d，LV-IL-23R组小鼠眼底炎症评分均高于LV-Ctrl组，差异有统计学意义（ t=-4.429、-6.578、-7.768、-10.183、-6.325、-7.304、-4.841、-6.872， P<0.001）。组织病理学检查显示，与LV-Ctrl组比较，LV-IL-23R组眼底炎性细胞浸润增多，视网膜结构破坏更为严重，组织病理学评分显著升高，差异有统计学意义（ t=-4.339， P=0.001）。与LV-Ctrl组比较、LV-IL-23R组小鼠脾脏中IL-23R mRNA相对表达量显著升高，差异有统计学意义（ Z=2.087， P=0.037）；T细胞中IL-17、RORγt mRNA相对表达量增加，IL-10、Foxp3 mRNA相对表达量降低，差异均有统计学意义（ t=-6.313、-5.922、4.844、7.572， P=0.003、0.004、0.008、0.002 ）。与LV-Ctrl组比较、LV-IL-23R组小鼠血清中IL-17水平明显升高，差异有统计学意义（ t=-5.423 ， P=0.002）；脾脏和淋巴结中Th17细胞比例明显升高，Treg细胞比例显著降低，差异有统计学意义（ t=-4.290、3.700， P=0.002、0.006）。 结论:IL-23R过表达可促使EAU小鼠的Th17/Treg失衡，加重EAU临床及病理表现。

目的:探讨人线粒体转录终止因子3（hMTERF3）与叉头框蛋白3（Foxp3）对预测非小细胞肺癌（NSCLC）预后的价值。方法:回顾性分析解放军总医院第三医学中心2017年3月至2018年3月收治的88例NSCLC患者的临床资料，所有患者均经病理穿刺确诊。电话随访12个月，根据患者预后情况，分成预后良好组、预后不良组。所有患者均取病理组织，采用免疫组织化学法检测hMTERF3、Foxp3蛋白表达情况，比较预后良好组、预后不良组的hMTERF3、Foxp3表达情况，采用logistic回归模型分析NSCLC患者预后不良的危险因素。结果:88例患者中，61例（69.3%）预后良好，27例（30.7%）预后不良。预后良好组hMTERF3阳性率为57.4%（35/61），低于预后不良组的81.5%（22/27）（χ 2=4.766， P=0.029）；预后良好组Foxp3阳性率为55.7%（34/61），低于预后不良组的85.2%（23/27）（χ 2=7.113， P=0.008）。预后良好组的中、高分化及Ⅰ~Ⅱ期患者比例分别为82.0%（50/61）、68.8%（42/61），均高于预后不良组[48.2%（13/27）、25.9%（7/27）]（均 P<0.05）。logistic回归分析结果显示，低分化、Ⅲ~Ⅳ期、hMTERF3阳性、Foxp3阳性是NSCLC患者预后不良的危险因素（均 P<0.05）。 结论:NSCLC预后良好者的hMTERF3、Foxp3阳性率较低，hMTERF3阳性、Foxp3阳性是NSCLC患者预后不良的危险因素。

目的:探讨Notch1信号对川崎病患儿调节性T细胞（Treg）的影响及在血管损伤机制中的作用。方法:以2019年3月至2021年6月收治的42例川崎病患儿为研究对象，分别于急性期及输注丙种球蛋白（IVIG）治疗后取样送检，对照组为32名同年龄健康儿童。采用流式细胞术检测外周静脉血CD4 +CD25 hiFoxp3 + Treg数量及叉头螺旋翼状转录因子（Foxp3）、细胞毒性T细胞相关抗原4（CTLA4）、糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体（GITR）、Notch1蛋白表达水平；免疫共沉淀-定量PCR技术鉴定CD4 + T细胞Foxp3基因启动子组蛋白H4乙酰化（H4Ac）及Notch1受体胞内结合域1（NICD1）、重组信号结合蛋白J（RBP-J）、p300结合水平；荧光定量PCR分析早老素1（PSEN1）、主导控制样蛋白1（MAML1）、RBP-J和Foxp3 mRNA表达；ELISA检测血浆中IL-10、TGF-β蛋白浓度。采用 t检验、Pearson相关分析法进行统计分析。 结果:①与健康对照组相比，急性期川崎病患儿CD4 +CD25 hiFoxp3 + Treg比例显著降低[（4.3±1.5）%和（7.9±2.9）%； t=6.41， P<0.001]，分化及功能相关分子（Foxp3、CTLA4、GITR）表达水平和血浆IL-10、TGF-β蛋白浓度明显下降（ t=6.87， P<0.001； t=4.26， P<0.001； t=7.88， P<0.001； t=8.42， P<0.001； t=13.01， P<0.001），其中合并冠状动脉损伤组（CAL）前述6项指标低于无冠状动脉损伤组（NCAL）[ t=5.83， P<0.001； t=3.83， P<0.001； t=3.28， P=0.002； t=5.05， P<0.001； t=5.96， P<0.001； t=5.17， P<0.001]，治疗后显著上调[ t=7.13， P<0.001； t=6.10， P<0.001； t=4.31， P<0.001； t=6.55， P<0.001； t=7.40， P<0.001； t=7.84， P<0.001]。②急性期川崎病患儿Foxp3基因启动子H4Ac修饰及NICD1、p300结合水平明显低于同年龄对照组（ t=10.25， P<0.001； t=6.93， P<0.001； t=6.75， P<0.001），其中CAL组Foxp3基因启动子H4Ac及NICD1、p300结合水平低于NCAL组（ t=6.08， P<0.001； t=2.66， P=0.011； t=6.02， P<0.001），治疗后明显上调（ t=7.72， P<0.001； t=4.16， P<0.001； t=5.76， P<0.001）。Pearson相关分析显示Foxp3基因启动子H4Ac与其mRNA水平呈正相关（ r=0.47， P<0.001）。各组间Foxp3/RBP-J结合水平略有改变，但差异无统计学意义（ t=0.57， P>0.005； t=0.61， P>0.05； t=1.20， P>0.05）。③急性期川崎病患儿CD4 + T细胞表面Notch1受体蛋白及下游信号分子PSEN1、MAML1及RBP-J表达水平显著下调[ t=5.28， P<0.001； t=6.31， P<0.001； t=11.78， P<0.001； t=8.06， P<0.001]，且CAL组前4项指标均低于NCAL组[ t=3.16， P=0.003； t=4.13， P<0.001； t=5.42， P<0.001； t=4.05， P<0.001]，治疗后呈不同程度回调（ t=4.77， P<0.001； t=6.43， P<0.001； t=11.95， P<0.001； t=7.79， P<0.001）。经体外重组人Jagged1蛋白刺激48 h后，川崎病患儿及对照组CD4 + T细胞Foxp3基因H4Ac及NICD1、p300结合水平明显高于未处理组[（川崎病： t=15.36， P<0.001； t=7.25， P<0.001； t=14.29， P<0.001），（对照组： t=7.87， P<0.001； t=5.71， P<0.001； t=8.74， P<0.001）]，RBP-J结合水平差异无统计学意义（川崎病： t=1.11， P>0.05；对照组： t=1.37， P>0.05），但川崎病患儿Foxp3基因H4Ac及NICD1、p300结合水平仍低于对照组（ t=3.86， P<0.001； t=3.42， P=0.001； t=2.85， P=0.006）。④经川崎病血清刺激健康儿童外周血PBMCs建立炎症细胞模型，IVIG干预组Treg比例、Foxp3表达水平及CD4 + T细胞Notch1、RBP-J表达水平明显高于未处理组（ t=7.10， P<0.001； t=10.16， P<0.001； t=8.06， P<0.001； t=9.77， P<0.001），Foxp3基因启动子H4Ac及NICD1结合水平亦高于后者（ t=7.24， P<0.001； t=8.24， P<0.001）。 结论:Notch1信号低下所致Treg数量不足及功能障碍可能是导致川崎病患儿免疫功能异常活化及血管损伤的重要因素之一。

目的:探讨白藜芦醇（RES）对IL-1β诱导的软骨细胞的影响及其作用通路。方法:提取Wistar乳鼠软骨细胞，实验分为5组：对照组，IL-1β组，RES+IL-1β组，RES+IL-1β+EX-527[沉默信息调节因子1（SIRT1）抑制剂]组，RES+IL-1β+AS[叉头框转录因子O1（FOXO1）抑制剂]组。采用实时荧光定量（qRT）-PCR检测SIRT1、FOXO1和MMP-3 mRNA表达量。免疫荧光技术检测软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白（Col-Ⅱ）的蛋白表达，蛋白质免疫印迹技术检测软骨细胞SIRT1，p-FOXO1/FOXO1的蛋白表达。ELISA检测软骨细胞炎性因子IL-6和TNF-α分泌量。计量资料多组间比较行单因素方差分析，组间两两比较采用LSD- t法。以 P<0.05差异具有统计学意义。 结果:与正常软骨细胞相比，IL-1β诱导的软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达明显降低，细胞TNF-α[（24.70±2.84）， t=19.24， P<0.001]和IL-6的分泌量[（3.35±0.28）， t=12.97， P<0.001]明显升高、MMP-3的mRNA表达[（2.46±0.23）， t=12.61， P<0.001]明显升高。RES作用于IL-1β诱导软骨细胞后，Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达明显升高（ P<0.001），细胞TNF-α[（12.60±1.05）， t= 10.14， P<0.001]和IL-6[（2.00±0.15）， t=9.89， P<0.001]的分泌量明显降低，MMP-3的mRNA表达[（1.30±0.14）， t=10.46， P<0.001]明显降低。加入SIRT1抑制剂EX-527或FOXO1抑制剂AS后，RES对IL-1β诱导软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白、SIRT1、FOXO1和p-FOXO1/FOXO1的mRNA和蛋白表达的促进作用明显降低（ P<0.05），对TNF-α和IL-6的分泌量抑制作用明显下降（ P<0.001），对MMP-3的mRNA表达抑制作用明显下降（ P<0.05）。 结论:RES通过SIRT1/FOXO1通路可明显改善IL-1β诱导的软骨细胞外基质降解和炎症反应。

目的:观察实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）模型大鼠CD4 +T细胞中miR-142- 5p及叉头转录蛋白O亚族3（FOXO3）的表达，初步探讨两者靶向关系以及对EAU的影响。 方法:健康雄性Lewis大鼠10只随机分为模型组、对照组。模型组大鼠以过继免疫方式诱导EAU动物模型。免疫后20 d，取对照组、模型组大鼠眼球和引流淋巴结提取CD4 +T细胞，并分为对照组、模型组、mimic-阴性对照（NC）组、miR-142-5p-mimic组、小干扰（si）-NC组、si-FOXO3组进行体外实验。miR-142-5p-mimic组、si-FOXO3组分别转染miR- 142-5p-mimic、si-FOXO3。健康雄性Lewis大鼠25只随机分为模型组、转染mimic-NC组、转染miR-142-5p-mimic组、转染si-NC组、转染si-FOXO3组，分别注射上述体外实验组细胞。免疫后4、8、12、16、20 d行裂隙灯显微镜检查并进行EAU评分；免疫后20 d，苏木精-伊红染色行组织病理学分级。实时荧光定量聚合酶链反应检测各组大鼠CD4 +T细胞和眼组织中miR-142-5p、FOXO3 mRNA相对表达量及细胞培养上清液中辅助性T细胞17（Th17）标志物白细胞介素（IL）-17、IL-22、维甲酸相关孤儿受体γ（RORγ）mRNA相对表达量。生物信息学网站及双荧光素酶预测miR-142-5p与FOXO3的靶向关系。组间比较采用单因素方差分析或 t检验。 结果:模型组大鼠均出现不同程度EAU症状，随时间延长，其症状加重。与对照组比较，模型组大鼠CD4 +T细胞中miR-142-5p mRNA相对表达量升高，FOXO3 mRNA相对表达量下降，差异均有统计学意义（ t=7.374、10.423， P=0.002、0.001）。与mimic-NC组比较，miR-142-5p-mimic组大鼠CD4 +T细胞中miR-142-5p mRNA相对表达量上升，差异有统计学意义（ t=6.540， P=0.003 ）。与模型组、mimic-NC组、si-NC组比较，miR-142- 5p-mimic组、si-FOXO3组大鼠CD4 +T细胞培养上清液中IL-17、IL-22、RORγ mRNA相对表达量均显著增加，差异有统计学意义（ F=26.110、6.292、5.269、55.660、10.490、11.430， P<0.05）。与转染mimic-NC组比较，转染miR-142-5p-mimic组大鼠眼组织中miR-142-5p mRNA相对表达量显著上升，差异有统计学意义（ t=6.690， P<0.05 ）；与转染si-NC组比较，转染si-FOXO3组大鼠眼组织中FOXO3 mRNA相对表达量显著下降，差异有统计学意义（ t=17.751， P<0.05）。转染mimic-NC组、转染miR-142-5p-mimic组、转染si-NC组、转染si-FOXO3组大鼠免疫后随时间延长，EAU评分均呈上升趋势。转染miR-142-5p-mimic组大鼠EAU评分与组织病理学分级均较转染mimic-NC组升高，差异有统计学意义（ t=5.633、6.286， P<0.05）。转染si- FOXO3组大鼠EAU评分与组织病理学分级均较转染si-NC组升高，差异有统计学意义（ t=6.852、6.635， P<0.05）。FOXO3与miR-142-5p具有靶向关系。 结论:EAU大鼠CD4 +T细胞中，miR-142- 5p表达上调，FOXO3表达下调；miR-142-5p靶向调控FOXO3表达促进Th17细胞相关炎性因子发展。

目的:构建人干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes, STING)沉默子的荧光素酶报告质粒，在人胚肾细胞(HEK293T)和人类宫颈癌细胞(HeLa)中检测荧光素酶活性，生物信息学预测其可能结合的转录因子并通过实验验证。方法:通过PCR扩增人STING-5-1a(-124～+267，相对于转录起始位点，TSS: 0)和STING-5-2a(-124～+168)区域，亚克隆至pGL3-Basic质粒；将人STING沉默子区域STING-5-1b(+169～+267)正向反向亚克隆至pGL3-Control质粒(pGL3-C-5-1b-positive/negative)，并把STING-5-1b分为两段互补片段，亚克隆至pGL3-Control载体上，命名为pGL3-C-STING-5-1b-α(+169～+209)/pGL3-C-STING-5-1b-β(+210～+267)，双荧光素酶报告活性分析检测上述重组质粒在HEK293T和HeLa中的活性。应用生物信息学方法预测人STING沉默子的转录因子结合位点，将预测结合位点进行多点突变，检测荧光素酶活性。敲低转录因子，免疫印迹试验检测STING的表达水平。染色体免疫共沉淀反应进一步验证转录因子与人STING沉默子的结合。结果:核酸测序证实，上述重组质粒构建成功。截短STING-5-1b(+169～+267)片段后相对荧光素酶活性上升。同时，与pGL3-Control质粒相比，pGL3-C-5-1b-positive重组质粒的相对荧光素酶活性下降( P<0.05)，其中，STING-5-1b-β(+210～+267)序列起主要抑制作用。应用生物信息学软件预测发现转录因子PR结构域锌指蛋白4(PRDM4)、Thanatos相关蛋白1(THAP1)、TEA域转录因子1(TEAD1)、核受体亚家族4 A组成员1(NR4A1)、类Krueppel因子4(KLF4)和叉头转录蛋白O3(FOXO3)可能与人STING沉默子区域(+210～+267)结合。对上述转录因子的结合位点进行多点突变构建突变体并转染至HEK293T和HeLa，发现THAP1-Mut和TEAD1-Mut的相对荧光素酶活性显著上升，提示STING沉默子可能含有THAP1和TEAD1的结合位点。将转录因子THAP1和TEAD1敲低后，STING的表达水平有显著上升。染色体免疫共沉淀试验表明，转录因子TEAD1和THAP1在细胞内与人STING沉默子区域结合。 结论:本实验成功构建了人STING沉默子荧光素酶报告质粒，通过活性比较，推测人STING的核心沉默子区位于+210～+267区域，通过生物信息学分析及点突变实验初步确定人STING沉默子可能含有的潜在转录因子结合位点。并使用免疫印迹试验和染色体免疫共沉淀进一步证实转录因子TEAD1和THAP1与人STING沉默子的结合，为后续研究提供实验资料。