目的:观察双链RNA依赖的蛋白激酶（PKR）抑制剂2-氨基嘌呤（2-AP）对盲肠结扎穿刺（CLP）的脓毒症模型小鼠器官损伤血浆炎症因子表达及死亡率的影响。方法:无特异病原体（SPF）级C57BL/6小鼠40只，随机分为假手术（Sham）组、CLP组、2-AP组和CLP+2-AP组（ n=10）。术后24 h收集外周血血清，进行丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、血肌酐（Cr）、血尿素氮（BUN）及炎症因子（IL-1β、IL-10和TNF-α）的检测；取肺组织进行病理检测；取外周血和腹腔灌洗液进行细菌清除率检测。另外取60只C57BL/6小鼠，按照上述分组（ n=15）进行7 d生存率观察。组间计量资料比较采用独立样本 t检验。 结果:CLP组和CLP+2-AP组小鼠肝损伤指标（ALT和AST水平）和肾损伤指标（Cr和BUN）均较Sham组显著升高（均 P<0.001）。CLP+2-AP组ALT和AST水平均显著低于CLP组（ t=27.88、11.33，均 P<0.001）；肾功能损伤指标方面，CLP+2-AP组Cr和BUN水平均较CLP组显著下降（ t=11.02、7.15，均 P<0.001）。与Sham组相比，CLP组血浆中促炎（IL-1β和TNF-α）及抑炎（IL-10）细胞因子水平均显著升高（均 P<0.001）；CLP+2-AP组小鼠血浆IL-1β和IL-10水平均显著降低（均 P<0.001），而血浆TNF-α水平下降不明显（ P=0.33）。Sham组小鼠7 d生存率为100%，CLP+2-AP组为13.3%，2-AP组为86.7%，CLP+2-AP组为20.0%。抑制PKR活化可轻微改善CLP模型小鼠7 d生存率趋势（Mantel-Cox检验分析，χ 2=0.0012， P=0.97）。 结论:在脓毒症小鼠模型中，抑制PKR活性可对降低血浆中炎症因子表达，减少血液和腹腔中细菌负荷，对器官损伤具有保护作用，提示抑制PKR活性在脓毒症治疗中具有应用潜力。

阿尔茨海默病(AD)是一种严重威胁人类健康的疾病,也是引起人类死亡的三大因素之一.双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)又称为前炎症细胞因子,是人类先天免疫干扰素刺激因子之一.在AD发生和发展中,PKR表达上调并持续激活,一方面引发脑组织细胞发生整合应激反应,另一方面间接上调β位淀粉样前体蛋白裂解酶1的表达,促进β淀粉样蛋白(Aβ)的积累,而Aβ的积累又可以激活PKR,进一步促进Aβ的积累,形成一个Aβ持续积累的循环.PKR还可以促进Tau蛋白磷酸化,降低神经细胞微管稳定性.脑组织炎症反应、Aβ的积累所引起神经毒性和微管稳定性的破坏会导致AD发生发展,引起患者记忆和认知的下降,因此PKR是AD发生发展中的关键分子.有效进行PKR检测可以预测AD进展,为临床治疗AD提供先机.目前PKR已成为研发治疗AD药物的靶点,因此靶向PKR的抑制剂有望控制PKR的活性,从而有效控制AD发生发展.

目的 探讨七味白术散对轮状病毒(human rotarirus,HRV)感染乳鼠小肠黏膜上皮内淋巴细胞(iEL)CD3+T细胞核内抗病毒蛋白表达的影响,进一步阐明该方抗HRV机制.方法 选取5日龄NIH乳鼠168只,随机分为7组,正常对照组(N组)常规喂养,其余各组建立HRV腹泻模型,并分别灌服生理盐水(M组)、七味白术散(B组)、病毒唑(Z组)、抑制剂(Y组)、七味白术散加抑制剂(BY组),病毒唑加抑制剂(ZY组);分别于用药后32、40、48 h取各组乳鼠小肠黏膜,采用Western blotting方法测定小肠iEL CD3+T细胞核中双链RVA依赖的蛋白质激酶(PKR)、真核翻译起始子2的α亚基(eIF-2α)、2',5'-寡腺苷酸合成酶(OAS),RNA酶L(RNaseL)蛋白的表达.结果 B组乳鼠小肠粘膜iEL胞核中PKR、eIF-2α、OAS、RNaseL蛋白表达48 h时明显高于N组、M组、Y组、BY组、ZY组以及Z组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 七味白术散能促进感染乳鼠小肠黏膜iEL CD3+T细胞核中抗病毒蛋白PKR、eIF-2α、OAS、RNaseL的表达,从而实现对HRV的清除作用.

目的 初步探讨溶瘤病毒呼肠孤病毒3型(Reovirus 3,Reo3)致白血病HL60细胞凋亡的分子机制.方法 用不同感染复数(MOI)的Reo3感染HL60细胞,设未感染的HL60细胞为对照组,病毒感染48 h后,通过CCK8法检测不同MOI的病毒对HL60细胞活性的影响;利用流式细胞术检测HL60细胞凋亡率;Western blot检测HL60细胞中双链RNA依赖性蛋白激酶(PKR)活化水平和凋亡相关蛋白表达情况.用PKR特异性抑制剂2-氨基嘌呤(2-AP)作用HL60细胞24 h后,Reo3感染HL60细胞48 h,检测细胞凋亡水平和凋亡相关蛋白表达水平.结果 MOI为1的Reo3作用于HL60细胞48 h后对细胞的抑制作用明显,细胞存活率为(24.333±3.396)％,细胞凋亡率为(29.96±2.06)％,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot结果显示:与对照组比较,感染Reo3的HL60细胞PKR、p-PKR、Bax、Caspase3、cleaved Caspase3蛋白表达均升高(P＜0.05),而Bcl-2蛋白表达水平下降(P＜0.05).与未加抑制剂组比较,采用2-AP预处理的HL60细胞感染Reo3后细胞凋亡率下降(P＜0.05),PKR磷酸化水平和凋亡相关蛋白表达水平亦下降(P＜0.05).结论 溶瘤病毒Reo3作用HL60细胞可以引起PKR的活化,导致HL60细胞的凋亡.

本研究主要探讨了IFN-γ在黏蛋白产生中的作用,特别是在儿童支气管上皮细胞中的MUC5AC转录.通过采用人肺黏液表皮样癌细胞系(NCI-H292)和正常人支气管上皮细胞(NHBE),本研究评估了IFN-γ对MUC5AC转录的影响,发现转化生长因子(TGF)-α和双链RNA (polyI:C)诱导的MUC5AC mRNA和蛋白表达被IFN-γ以浓度依赖性方式抑制.IFN-γ对TGF-α和polyI:C诱导的表皮生长因子受体(EGFR)和细胞外信号调节激酶(ERK)的激活作用有限.染色质免疫沉淀实验表明Sp1与位于MUC5AC启动子上的同源序列结合.Sp1抑制剂光神霉素A抑制MUC5AC mRNA,表明Sp1在MUC5AC诱导中起关键作用,同时IFN-γ阻碍Sp1与MUC5AC启动子的结合.本研究初步表明,IFN-γ可以抑制MUC5AC的表达,干扰Sp1与其靶序列的结合.

目的 研究大蒜素对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管内皮细胞凋亡的抑制作用,并探讨其可能的分子机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),给予大蒜素(12.5、25和50 mg/L)、4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA,4 mmol/L)或抗凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1)单克隆抗体(4 mg/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)继续培养24 h.分别采用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞活力和细胞凋亡;试剂盒检测培养基乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)和细胞内caspase-3活性.Western blot法测定LOX-1及内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)关键分子双链RNA依赖的蛋白激酶样ER激酶(double-stranded RNA-activated protein kinase-like ER kinase,PERK)磷酸化水平和促凋亡蛋白caspase-12表达变化.结果 与ERS抑制剂PBA相似,大蒜素显著减轻ox-LDL所诱导的HUVECs损伤,表现为细胞活力增加(P<0.05或P<0.01),LDH漏出、凋亡率和caspase-3活性降低(P<0.05或P<0.01).大蒜素明显抑制ox-LDL所致的LOX-1上调(P<0.05或P<0.01).另外,与PBA相似,大蒜素明显抑制ox-LDL所诱导的PERK磷酸化和caspase-12活化(P<0.05或P<0.01).抗LOX-1单抗可抑制ox-LDL所致的caspase-12活化(P<0.05).结论 大蒜素可减轻ox-LDL所致的HUVECs凋亡,其机制可能与抑制LOX-1上调继而减轻ERS-caspase-12途径活化有关.