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假单胞菌Pseudomonas sp.AT39反式茴脑氧化酶基因(tao)对产茴香酸的影响
编辑人员丨2023/8/5
tao基因编码反式茴脑氧化酶,参与反式茴脑的降解过程.通过自杀质粒pK18mob及广宿主表达质粒pBBR1 MCS-5分别构建突变菌AT39/btao、重组菌AT39/tao-pBBR1 MCS5及互补菌HAT39/btao.对构建的菌株进行TAO酶比活力测定,结果发现重组菌AT39/tao-pBBR1 MCS5的酶比活力显著增加,比野生菌AT39提升了35.23％.茴香酸转化量检测结果显示,重组菌AT39/tao-pBBR1MCS5代谢生成的茴香酸产量为3.55 g/L,同比野生菌AT39增加了约4倍.结果为下一步利用和改造tao基因构建工程菌生产茴香酸奠定了基础.
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编辑人员丨2023/8/5
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茴香酸产生菌发酵条件的优化
编辑人员丨2023/8/5
为提高微生物降解反式茴脑获得茴香酸的产量,对假单胞菌Pseudomonas sp.NT2的发酵参数进行优化,以提高降解过程的转化率.利用单因素试验考察碳氮源种类及浓度、反式茴脑添加量、发酵温度、接种量、初始pH以及装液量对茴香酸生成量、反式茴脑降解率的影响,通过Plackett-Burman试验和最陡爬坡试验确定影响茴香酸生成量的显著因素并获取中心点,最后采用Box-Be-hnken模型进行响应面优化得到最佳发酵条件并验证.结果表明氯化铵浓度、初始pH和装液量是显著影响因素,最佳发酵条件为:柠檬酸钠10 g/L,氯化铵1.26 g/L,反式茴脑添加量1％,发酵温度30℃,接种量4％,初始pH 7.9,装液量42 mL/250 mL.优化后茴香酸生成量为7.24 g/L,为优化前的3.5倍,茴香酸摩尔生成率为80.72％,反式茴脑降解率为89.81％,分别比优化前提高了270.28％和97.78％.综上,假单胞菌NT2是生物转化生产茴香酸的潜力菌株.响应面优化可以显著提高反式茴脑的降解率和茴香酸产量,这为大规模生产茴香酸奠定了基础.
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编辑人员丨2023/8/5
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假单胞菌(Pseudomonas sp.)AT39突变体库的构建及反式茴脑利用相关基因(tao)的克隆
编辑人员丨2023/8/5
生物转化反式茴脑生成的苯丙素类芳香物质被视为天然原料,能广泛应用于食品加工、香料生产及医药等领域.以能代谢反式茴脑的假单胞菌(Pseudomonas sp.)AT39为出发菌株,采用转座子(pTnMod?RKm')插入突变构建了含有6137个突变体的突变体库,筛选出44株反式茴脑代谢受影响的突变株.检测突变菌及野生菌的反式茴脑利用能力,发现突变菌AT39?15的反式茴脑代谢能力是野生菌的14％.利用hiTAIL?PCR技术对突变菌AT39?15转座子侧翼序列扩增,获得插入突变的基因,测序结果显示基因大小为1047 bp,基因序列与恶臭假单胞菌(Pseudomonas sp.)JYR?1的反式茴脑氧化酶基因(tao)一致性达100％.研究结果为下一步构建基因工程菌提供了基因资源.
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编辑人员丨2023/8/5
