目的:探讨PI3K/Akt信号通路在氢吗啡酮后处理减轻大鼠心肌缺血-再灌注细胞凋亡中的作用。方法:健康雄性SD大鼠40只，按照随机数表法随机分为5组，每组8只，假手术组（Sham组）、缺血-再灌注组（I/R组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮组（I/R+H组）、缺血-再灌注+PI3K抑制剂组（I/R+W组）、缺血-再灌注+氢吗啡酮+ PI3K抑制剂组（I/R+ H+ W组）。采用左冠状动脉前降支结扎30 min、再灌注120 min的方法建立心肌缺血-再灌注损伤模型。实验结束后，用TTC染色法测心肌梗死面积；用比色法检测血清乳酸脱氢酶（LDH）漏出量；末端标记法（TUNEL）测心肌细胞凋亡；Western blot法检测p-Akt、Bcl-2、Bax蛋白表达。采用SPSS 13.0软件行统计分析。采用单因素方差分析进行组间比较。结果:与Sham组比较，I/R组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多，p-Akt表达和Bax表达上调，Bcl-2表达下调（ P<0.05）；与I/R组比较，I/R+H组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡减少，心肌p-Akt及Bcl-2表达上调，Bax表达下调（ P<0.05）；与I/R+H组比较，I/R+H+W组心肌梗死面积、血清LDH漏出量及心肌细胞凋亡增多，p-Akt表达和Bcl-2表达下调，Bax表达上调（ P<0.05）。 结论:氢吗啡酮后处理可减轻心肌缺血-再灌注引起的心肌细胞凋亡，其心肌保护机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。

目的:评价氢吗啡酮后处理对大鼠心肌保护效应的机制与磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路介导的自噬的关系。方法:健康雄性SD大鼠40只，体重220～250 g，采用随机数字表法分为5组( n＝8)：假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、氢吗啡酮后处理组(HP组)、PI3K抑制剂组(W组)、氢吗啡酮后处理+PI3K抑制剂组(HP+W组)。采用左冠状动脉前降支结扎30 min再灌注120 min的方法建立心肌缺血再灌注损伤模型。HP组于再灌注前5 min经股静脉注射氢吗啡酮0.1 mg/kg。HP+W组于再灌注前5 min经股静脉注射氢吗啡酮0.1 mg/kg及PI3K抑制剂渥曼青霉素15 μg/kg。W组于再灌注前5 min经股静脉注射渥曼青霉素15 μg/kg。再灌注结束时，采用TTC染色法确定心肌梗死面积(IS)，采用比色法检测血清乳酸脱氢酶(LDH)活性，电镜观察心肌超微结构变化，采用Western blot法检测磷酸化Akt(p-Akt)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达水平，计算LC3-Ⅱ/Ⅰ比值。 结果:与Sham组比较，IR组IS、血清LDH活性增加，心肌组织p-Akt表达上调，LC3-Ⅱ/Ⅰ比值升高( P <0.05)，心肌细胞自噬空泡增多，细胞超微结构损伤明显；与IR组比较，HP组IS、血清LDH活性降低，心肌组织p-Akt表达上调，LC3-Ⅱ/Ⅰ比值降低( P<0.05)，心肌细胞自噬空泡减少，超微结构损伤减轻；与HP组比较，HP+W组IS、血清LDH活性增加，心肌组织p-Akt表达下调，LC3-Ⅱ/Ⅰ比值增加( P<0.05)，心肌细胞自噬空泡增多，细胞超微结构损伤加重。 结论:氢吗啡酮后处理对大鼠心肌保护效应的机制与激活PI3K/Akt信号通路，抑制自噬有关。

目的 深入挖掘吗啡后处理(M postC)保护心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)心肌的分子作用机制.方法 选取42只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、假手术组、MI/RI组、MI/RI+M postC组.建立MI/RI小鼠模型并给予M postC.2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色检测小鼠心肌梗死体积.Ca2+Green-5N荧光探针法检测小鼠左心室心肌组织来源线粒体通透性转换孔(mPTP)的开放.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测左心室心肌组织中miR-9-5p和热休克蛋白90(HSP90)AA mRNA水平.Western blot试验检测左心室心肌组织中HSP90AA蛋白质及线粒体自噬相关蛋白因子PINK1和E3泛素连接酶的蛋白质水平.生物信息学分析、双荧光素酶报告基因分析验证miR-9-5p和HSP90AA的序列互作.结果 与假手术组比较,MI/RI组心肌梗死体积百分比增大,差异有统计学意义(P＜0.05);与MI/RI组比较,MI/RI+M postC组心肌梗死体积百分比降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与假手术组比较,MI/RI组的T组Ca2+水平信号升高(P＜0.05);与MI/RI组比较,MI/RI+M postC组的T组Ca2+水平信号降低至基线水平(P＜0.05).与假手术组比较,MI/RI组左心室心肌组织miR-9-5p RNA相对表达水平升高(P＜0.05),HSP90AA mRNA和蛋白质相对表达水平均降低(P＜0.05),PINK 1和E3泛素连接酶蛋白质相对表达水平均升高(P＜0.05).与MI/RI组比较,MI/RI+M postC组左心室心肌组织miR-9-5p RNA相对表达水平降低(P＜0.05),HSP90AA mRNA和蛋白质相对表达水平均升高(P＜0.05),PINK1和E3泛素连接酶蛋白质相对表达水平均升高(P＜0.05).与共转染miR-9-5p mimic和HSP90AA-MUT的细胞比较,共转染miR-9-5p mimic和HSP90AA-WT的细胞内荧光素酶活性降低,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 M postC经miR-9-5p/HSP90轴可促进线粒体自噬,减轻心肌缺血再灌注损伤.

目的 评价氢吗啡酮后处理对大鼠离体心脏缺血再灌注时电生理稳定性的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠,2～3月龄,体重280～ 360 g,取成功建立Langendroff离体心脏灌注模型的心脏24个,采用随机数字表法分为3组(n=8):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)和氢吗啡酮后处理组(HM组).采用全血停灌60 min再灌注60 min的方法制备离体心脏缺血再灌注损伤模型.HM组再灌注即刻灌注含4.1 ng/ml氢吗啡酮的K-H液10 min.于平衡灌注20 min、再灌注10、25、40、60 min时记录HR、ECG、冠脉流量(CF)及左心室前壁内膜层、中膜层、外膜层心肌单相动作电位振幅(MAPA)、0相最大上升速率(Vmax)、50％和90％单相动作电位时程(MAPD50、MAPD90),并计算跨室壁复极离散度(TDR),记录心脏复跳时间.结果 3组各时点HR、CF和MAPA比较差异无统计学意义(P＞0.05).与C组比较,I/R组外膜层Vmax降低,3层心肌MAPD50和MAPD90延长,TDR延长(P＜0.05);与I/R组比较,HM组心脏复跳时间、内膜层和中膜层MAPD50、内膜层MAPD90和TDR缩短(P＜0.05),Vmax差异无统计学意义(P＞0.05).结论 氢吗啡酮后处理有助于维持大鼠离体心脏缺血再灌注时电生理稳定性.

目的 评价δ受体在氢吗啡酮后处理维持大鼠离体心脏缺血再灌注时电生理稳定性中的作用.方法 健康雄性SD大鼠,2~3月龄,体重280~360 g,取成功建立Langendorff离体心脏灌注模型的心脏32个,采用随机数字表法分为4组(n=8):对照组(C组)、心脏缺血再灌注组(I∕R组)、氢吗啡酮后处理组(HP组)和氢吗啡酮+δ受体拮抗剂纳曲吲哚后处理组(HNP组).采用全心停灌60 min 再灌注60 min的方法制备离体心脏缺血再灌注损伤模型.HP组和HNP组于再灌注即刻灌注含4.1 ng∕ml氢吗啡酮或含4.1 ng∕ml氢吗啡酮+5 μmol∕L纳曲吲哚的K-H液10 min,然后灌注K-H液50 min.分别于平衡灌注20 min(T0)和再灌注10、25、60 min(T1-3)时,记录HR、左心室前壁内外膜层心肌90%单相动作电位时程(MAPD90),并计算跨室壁复极离散度(TDR),记录再灌注期间心律失常发生情况、心脏复跳时间和心律失常持续时间.结果 与C组比较,I∕R组和HP组T1,2时内膜层心肌MAPD90、T1时外膜层心肌MAPD90延长,HNP组T2,3时HR降低,T1-3时内膜层和外膜层心肌MAPD90延长,I∕R组T1时、HNP组T2时TDR增大,HP组T3时TDR减小(P<005);与I∕R组比较,HP组和HNP组心律失常评分差异无统计学意义(P>005),心脏复跳时间缩短,T1时TDR减少, HP组心律失常持续时间缩短,T1时内膜层心肌MAPD90缩短,HNP组T2,3时HR降低,T1-3时内外膜层心肌MAPD90延长,T2,3时TDR减少(P<005);与HP组比较,HNP组心脏复跳时间、心律失常持续时间和心律失常评分差异无统计学意义(P>005),T2,3时HR降低,T1-3时内膜层和外膜层心肌MAPD90延长,T3时TDR增大(P<005).结论 氢吗啡酮后处理维持大鼠离体心脏缺血再灌注时电生理稳定性的机制与激活δ阿片受体有关.

目的 探讨线粒体通透性转换孔(MPTP)的开放对内吗啡肽-1后处理减轻心肌缺血再灌注损伤的作用.方法 将45只雄性SD大鼠随机分为5组(n=9/组):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、内吗啡肽-1后处理组(EM50组)、线粒体通透性转换孔开放剂苍术苷后处理组(Atr组)和内吗啡肽-1+苍术苷后处理组(EM50+Atr组).建立大鼠在体心肌缺血再灌注模型,通过经颈动脉插管至左心室实时监测血流动力学,记录各组大鼠的血流动力学指标,再灌结束后采集大鼠血浆,检测乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α,氧化应激指标超氧化物歧化酶和丙二醛,细胞色素C等生化指标,大鼠心肌组织HE染色,采用Evans blue和TTC双染色法检测心肌梗死面积,Western blot检测心肌组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3的表达.结果 与S组比较,IR组心率和血压降低(P<0.05);与IR组比较,EM50组心率和血压有所增高(P<0.05);血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、丙二醛、细胞色素C含量或活性下降(P<0.05),氧化应激指标超氧化物歧化酶活性增加(P<0.05);心肌梗死面积减少(P<0.05);Bax和cleaved caspase-3蛋白表达量降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量升高(P<0.05);与EM50组比较,EM50+Atr组心率和血压降低(P<0.05);血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、心肌肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、丙二醛、细胞色素C含量或活性增加(P<0.05),超氧化物歧化酶活性降低(P<0.05);心肌梗死面积增加(P<0.05);Bax和cleaved caspase-3蛋白表达量升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量降低(P<0.05).结论 内吗啡肽-1后处理可能通过抑制MPTP的开放,减少线粒体中Cyt-C的释放,下调凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达,减少心肌细胞凋亡,减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,发挥心肌保护作用.

目的 研究肢体远程缺血后处理对脊髓缺血再灌注损伤的保护作用,并探讨阿片受体在此机制中的可能作用.方法 新西兰大白兔24只,随机分为4组,每组6只.缺血组(SCⅡ组):阻断肾下腹主动脉25 min后再灌注;远程缺血后处理组(RIP组):脊髓缺血操作同SCⅡ组,在开放腹主动脉前2 min予3个循环双下肢缺血后处理;吗啡组(MOR组)及纳洛酮组(NAL组):脊髓缺血前经耳缘静脉分别给予吗啡、纳洛酮1 mg/kg,余操作同RIP组.分别于再灌注4、12、24、48 h对所有动物行后肢运动功能评分;再灌注48 h后行脊髓组织病理学观察并计数脊髓前角正常运动神经元;行再灌注48 h神经功能评分与脊髓前角正常运动神经元计数之间相关性分析.结果 RIP组再灌注4、12、24、48 h神经功能评分及脊髓前角正常运动神经元计数均明显高于SCⅡ组(P＜0.05);再灌注4 h MOR组神经功能评分高于RIP组(P＜0.05),而再灌注12、24、48 h神经功能评分及脊髓前角正常运动神经元计数二者差异无统计学意义(P＞0.05);NAL组再灌后4、12、24、48 h神经功能评分及脊髓前角正常运动神经元计数均明显低于RIP组(P＜0.05);再灌注48 h神经功能评分与脊髓前角正常神经元计数之间等级相关系数 rS＝0.882(P＜0.001),二者之间具有良好的相关性.结论 肢体远程缺血后处理对兔脊髓缺血损伤具有保护作用;该保护作用可被纳洛酮阻断,提示阿片受体参与肢体远程缺血后处理的脊髓保护作用机制.

目的 评价不同阿片受体在吗啡后处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠,7～8周龄,体重250～ 300 g,采用Langendorff灌流装置建立大鼠离体心脏灌注模型.取模型制备成功的心脏48个,采用随机数字表法分为4组(n=12):缺血再灌注组(Ⅰ/R组)、吗啡后处理组(M组)、δ受体拮抗剂纳曲吲哚+吗啡后处理组(N+M组)组和κ受体拮抗剂nor-binaltorphimine+吗啡后处理组(B+M组).M组再灌注即刻灌注含1μmol/L吗啡的K-H液15s,然后灌注不含吗啡的K-H液15s,共循环4次;N+M组与B+M组于平衡灌注10 min时分别用含5μμmol/L纳曲吲哚和5μmol/L nor-binaltorphimine的K-H液灌注至再灌注5 min,吗啡后处理措施同M组.分别于平衡灌注20 min和再灌注30、60 min时记录HR、左心室内压上升最大速率(+dp/dtmax)和左心室内压下降最大速率(-dp/dtmax).分别于平衡灌注20 min和再灌注60 min时,收集冠状动脉流出液,采用比色法测定CK活性.再灌注60 min时,每组取8个心脏,测定心肌梗死面积百分比.再灌注60 min时,每组取4个心脏,采用Western blot法测定微管相关蛋白1轻链3 Ⅰ(LC3 Ⅰ)和LC3Ⅱ的表达水平,计算LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值.结果 与平衡灌注20 min时比较,4组再灌注30和60 min时HR、+dp/dtmax和-dp/dtmax降低,再灌注60 min时冠状动脉流出液CK活性升高(P＜0.05);与Ⅰ/R组比较,M组再灌注60 min时冠状动脉流出液CK活性、心肌梗死面积百分比和LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值降低(P＜0.05);与M组比较,N+M组和B+M组再灌注60 min时冠状动脉流出液CK活性、心肌梗死面积百分比和LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值升高(P＜0.05).结论 δ受体和κ受体参与了吗啡后处理减轻大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的过程,其机制可能与抑制自噬水平有关.

目的 研究吗啡后处理(PC)对离体大鼠缺血再灌注心肌自噬的影响及其可能机制.方法 成年雄性SD大鼠48只,随机分为3组:空白对照组(C组),缺血再灌注组(I/R组),吗啡PC组( M组),每组16 只.采用Langendorff心脏灌流装置构建大鼠离体心肌缺血再灌注模型.C组持续灌注110 min,另两组平衡灌注20 min后实行30 min缺血、60 min再灌注;M组于再灌注开始前即刻给予1 μmol/L吗啡灌流15 s、洗脱15 s,共重复4次.再灌注末,检测冠脉流出液肌酸激酶(CK)活性,分析心肌梗死面积,观察心肌病理学变化,Western blot测定心肌组织微管相关蛋白1 轻链3-Ⅱ/Ⅰ(LC3-Ⅱ/Ⅰ)以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)的表达.结果 与 I/R组比较,M组CK活性显著降低(P<0.01),心肌梗死面积显著减小(P<0.01),心肌病理学改变较轻,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值明显降低(P<0.01)、p-mTOR表达增高(P<0.01).结论 吗啡PC通过激活mTOR抑制缺血再灌注诱导的心肌自噬,并进一步减轻心肌缺血再灌注损伤.

目的 观察氢吗啡酮后处理对缺血-再灌注大鼠体外心肌再灌注性心律失常及心肌组织缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响,并探讨其相关机制.方法 SD大鼠24只,随机分为3组:对照组(C组)、缺血-再灌注组(IR组)和氢吗啡酮后处理组(HM组),每组8只.建立Langendorff体外心脏缺血-再灌注模型,连续监测心电图和心率.分析再灌注时心律失常发生情况并评分,采用Western blotting技术检测缺血-再灌注心室肌Cx43和Akt信号通路蛋白的表达.结果 3组大鼠各时点心率组间、组内比较均差异无统计学意义(P>0.05).再灌注期间,IR组和HM组的室性期前收缩数量和再灌注心律失常评分差异无统计学意义(P>0.05);与IR组比较,HM组发生室速和室颤的大鼠数更少,再灌注时心律失常的持续时间更短(P<0.05).与C组比较,IR组Akt的表达差异无统计学意义(P>0.05),HM组的Akt表达上调,IR组和HM组心肌Cx43的表达均下调;与IR组比较,HM组心肌Akt和Cx43的表达均上调(P<0.05).结论 氢吗啡酮后处理抑制大鼠心肌缺血-再灌注损伤诱发的心律失常机制与其激活Akt信号通路后上调心肌Cx43表达有关.