在体-离体生物感受细胞模型采用在体暴露评估、离体结局分析以及系统环境关键组分筛选的方法，评估环境污染物通过影响机体内环境稳态而导致的健康效应和毒作用机制。该模型整合了人群现场的真实暴露与实验室细胞分子机制研究，结合了体外和体内模型的优势，弥补了单一的毒理学评价模型的不足，从宏观人群研究和微观机制探索之间的介尺度层面，为环境污染物毒性测试和评价提供了新的视角和方法。

在由烧伤等因素导致的皮肤损伤修复过程中，触觉功能的重建离不开触觉感受器默克尔细胞的功能再生。默克尔细胞主要存在于表皮基底层，与神经紧密相连形成默克尔细胞-神经复合体，在生物机体内发挥重要作用。大量研究表明默克尔细胞通过机械门控离子通道PIEZO2对机械力刺激进行精确传导，行使触觉感受器的功能。该文通过论述默克尔细胞的特征，分析该类细胞可能存在的不同亚群及其功能，同时调研了触觉相关疾病的动物模型研究和触觉相关的临床疾病，揭示了默克尔细胞功能研究的重要性。

在大肠杆菌中优化重组人GST-TCF4 βBD(recombinant human GST-TCF4 β-catenin binding domain,rhGST-TCF4 βBD)的表达条件及其生物学活性初探.化学合成的人TCF4 βBD基因片段与pGEX-6P-1表达载体连接,构建重组质粒,再将其转化到Escherichia coli Rosetta(DE3)感受态细胞中诱导目的蛋白质表达.通过优化诱导时间、诱导温度和IPTG浓度,确定rhGST-TCF4 βBD可溶表达的最佳条件.以GSTrapTM亲和柱分离纯化rhGST-TCF4 βBD后,再以GST Pull-down实验进行生物学活性鉴定.SDS-PAGE结果表明,在大肠杆菌中成功进行了rhGST-TCF4 βBD的可溶表达,确定诱导温度25℃、诱导时间8h和0.2 mmol/L IPTG作为rhGST-TCF4 βBD可溶表达的最佳表达条件,此时表达量达24％,趋于表达量峰值.GST Pull-down实验结果表明,纯化的rhGST-TCF4 βBD能与重组人β-catenin和细胞内源β-catenin特异性结合,具有良好的生物学活性.本文成功进行了rhGST-TCF4βBD在大肠杆菌中的表达条件优化与活性鉴定,为靶向β-catenin/TCF4相互作用小分子抑制剂筛选模型的建立奠定了实验基础.

新型冠状病毒主蛋白酶(Main protease,Mpro)在调控新冠病毒RNA复制中具有重要的生物学功能,且Mpro在冠状病毒中的进化高度保守并不易突变,已成为新型广谱抗冠状病毒药物开发的理想靶标之一.为了制备高纯度、高活性的Mpro,根据密码子偏爱性原则,将优化的Mpro基因分别连接到pET-21a与pET-28a表达载体中构建重组质粒.将重组质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)感受态细胞中,分别进行原核表达条件优化,所表达的重组蛋白质命名为Mpro与Mpro-28.Mpro与Mpro-28经HisTrapTM亲和层析法分离纯化后,以荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET)实验进行生物学活性鉴定.FRET实验结果表明,纯化的Mpro具有良好的水解活性,Km值为11.68 μmol/L,Kcat值为0.037/s,比活力不低于25000 U/mg,约为Mpro-28的25倍,说明天然的氨基端对Mpro的生物学功能是必需的,羧基端残留的多聚组氨酸标签对其水解活性影响较小.文中基于密码子优化策略,成功地进行了新冠病毒Mpro在大肠杆菌中的表达条件优化与活性鉴定,为靶向Mpro广谱抗冠状病毒药物高通量筛选模型的建立奠定了实验基础.

目的 对淡色库蚊抗性转录因子FTZ-F1蛋白进行原核表达并鉴定.方法 对转录因子FTZ-F1蛋白进行生物信息学分析,包括蛋白的理化性质,二级结构及三维同源模型.采用PCR技术扩增FTZ-F1基因,比对分析后选取FTZ-F1基因保守区和功能区片段,片段长度为1122bp,然后将其连接至pET-32a(+)载体,构建重组质粒pET-32a(+)-FTZ-F1,再转化入感受态细胞BL21(DE3)后用IPTG诱导重组质粒pET-32a(+)-FTZ-F1的表达,运用SDS-PAGE和Western blot初步鉴定重组蛋白FTZ-F1的表达,采用His标签镍离子蛋白纯化柱对表达产物进行纯化和增加蛋白的量,用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白FTZ-F1的表达.结果 FTZ-F1蛋白有744个氨基酸,相对分子质量为79.57×103.1％琼脂凝胶鉴定PCR扩增为单一条带,大约为2 240 bp,测序结果表明重组质粒pET-32a(+)-FTZ-F1构建正确.采用SDS-PAGE检测重组蛋白FTZ-F1,结果表明蛋白FTZ-F1在原核表达系统中主要以可溶性形式表达,其相对分子质量约为38.9×103.Western blot检测重组蛋白FTZ-F1,采用抗His标签抗体识别FTZ-F1,结果表明为单一条带.纯化后的蛋白浓度为1.25 mg/ml,纯度为90％.结论 成功构建了重组质粒pET-32a(+)-FTZ-F1,鉴定重组蛋白FTZ-F1的表达,为该蛋白生物学功能的研究奠定了基础.