基因治疗逐渐成为治疗遗传病、自身免疫性疾病和肿瘤等疾病的重要手段。近年来，人们一直致力于开发高效的基因传递载体以克服各种生理和系统性障碍。壳聚糖具有天然抑菌、止血和促进伤口愈合的能力，以及良好的生物相容性和生物降解性，已被用于药物递送系统以及制造与伤口愈合相关的基因传递系统的候选材料，其亦已被用作各类基因载体为各类难治性疾病的治疗提出新方向，比如作为小干扰RNA载体用于癌症的联合治疗，作为微RNA载体促进糖尿病大鼠皮肤创面愈合等。笔者对壳聚糖载体基因治疗在临床应用上的研究进展进行综述。

人类的生殖过程包含配子的生成与输送，受精卵的产生与种植，以及胚胎的发育与胎儿分娩等，任何环节的异常都有可能阻碍新生命的诞生。子宫内膜是女性生殖系统中重要的组成部分，它对于受精卵着床和胚胎发育都起着至关重要的作用。然而，传统形态学观测方法难以准确确定子宫内膜的容受状态，随着分子诊断的发展以及“组学”概念的兴起，出现了一系列新型检测技术。本文主要阐述子宫内膜容受性分子检测方法的研究进展，这些方法利用分子生物学技术对子宫内膜细胞、基因、代谢产物和微生物等方面的特征进行检测，从而更加准确地评估子宫内膜的容受状态。

人体携带有数以万亿计的细菌,其中大部分细菌与人体之间已经形成互惠互利的共生关系.细菌群落失调或者病原细菌感染会通过炎症以及分泌代谢物对人类健康产生负面影响,从而导致各种疾病的发生,这其中也包括肿瘤.细菌可以影响人体内肿瘤的发生发展,一方面细菌可以通过诱导慢性炎症、引起DNA损伤、激活核心致瘤信号通路等机制促进肿瘤的发生;另一方面又可以通过自身的溶瘤作用或者激活适应性免疫细胞来抑制肿瘤生长,此外通过基因工程修饰,一些被设计成低毒高效的药物输送的细菌已经成功地用在动物模型或临床试验中的肿瘤治疗.该文从细菌是如何促进肿瘤和肿瘤治疗上的应用两个方面综述近期有关细菌和肿瘤发生发展的相关文献,以期为肿瘤的治疗提供一种新的治疗思路.

皮肤穿透肽(SPP)是一类能够促进药物或活性成分通过皮肤屏障的肽类分子.SPP具有良好的生物相容性和安全性,可用于输送各种类型的药物或活性成分,包括小分子药物、蛋白质和核酸.这些特点使得SPP在医药和化妆品领域中具有广泛的应用前景.目前国内外科研人员对于SPP的结构、机制、设计和应用进行了广泛的探索和实验.按来源分类,SPP可分为3类:蛋白质来源的SPP、基因重组来源的SPP和人工设计合成的SPP;其促渗机制可以从作用于角质层和作用于皮肤附属器这2个方面来阐述;其主要的应用方式包括4种:SPP与药物的物理混合、SPP与药物形成共价连接、SPP与蛋白类药物形成融合蛋白、SPP修饰药物载体,综述SPP不同来源SPP种类、不同SPP的促渗机制及应用方式,分析其研究与应用中存在的问题,以期为SPP的开发和创新提供有价值的参考.

原发性肝癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一,其中肝细胞癌(HCC)占90％以上.早期HCC以手术切除为主,且预后较好,然而因HCC起病隐匿,绝大多数患者确诊时已进展至中晚期,手术治疗效果较差,而非手术治疗方式因为普遍存在不良反应大,肿瘤选择性低等问题,疗效也不理想,所以目前中晚期HCC治疗仍是临床工作的难点.纳米粒(NP)尺寸小、比表面积大,具有多种独特的理化性质,成为输送药物、基因及细胞活性因子等治疗剂的潜在载体.纳米递送系统以NP为载体,通过功能化修饰,从时间、空间及剂量上调控药物、基因及细胞活性因子等在体内的代谢及转化,在HCC治疗中展现出巨大的潜力.本文主要介绍了几种常见纳米递送系统,包括有机纳米载体、无机纳米载体、外泌体等在HCC治疗中的现状和优势,总结了基于NP的纳米载体治疗HCC的机制,为新型纳米递送系统的研发提供参考.

视网膜下腔是位于视网膜色素上皮层和感光细胞层之间的潜在腔隙.视网膜下注射是将治疗药物输送到视网膜下腔的一种给药方式.与玻璃体内注射相比,视网膜下注射药物对视网膜光感受器细胞和视网膜色素上皮细胞的作用更直接、更有效.近年来,随着医疗技术的进步和手术器械的更新与发展,视网膜下注射的临床应用范围逐渐拓宽,已成为多种眼底疾病基因治疗和细胞治疗的重要给药方式,在玻璃体视网膜手术中的作用也日益显著.本文将从视网膜下注射的适应证、方法与技巧以及潜在风险与并发症等方面进行探讨.

目的 观察丁香酚对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的抑制作用并分析其机制.方法 Wistar大鼠随机分为假手术组、MIRI组、丁香酚低剂量组、丁香酚中剂量组、丁香酚高剂量组、阳性对照组,每组10只.丁香酚低、中、高剂量组及阳性对照组分别给予50、100、200 mg/(kg·d)丁香酚及30 mg/(kg·d)盐酸地尔硫?灌胃14 d,假手术组、MIRI组给予羧甲基纤维素钠溶液灌胃.除假手术组外,各组均于末次给药1 h后采用结扎冠状动脉左前降支法建立大鼠MIRI模型,假手术组开胸后在冠状动脉左前降支处仅穿线不结扎.采用全自动生化分析仪检测各组血清心肌损伤标志物肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH);摘取大鼠心脏,TTC染色后计算心肌梗死面积比.采用转录组测序筛选丁香酚作用于MIRI的差异表达基因,对转录组测序筛选出的差异表达基因进行GO功能及KEGG信号通路富集分析.结果 血清心肌损伤标志物CK、CK-MB、LDH水平MIRI组>丁香酚低剂量组、丁香酚中剂量组、丁香酚高剂量组、阳性对照组>假手术组,心肌梗死面积比假手术组>丁香酚低剂量组、丁香酚中剂量组、丁香酚高剂量组、阳性对照组>MIRI组(P均<0.05).与MIRI组比较,丁香酚低剂量组共有1 035个差异表达基因,其中594个基因上调、441个基因下调;丁香酚中剂量组共有513个差异表达基因,其中197个基因上调、316个基因上调;丁香酚高剂量组共有1 962个差异表达基因,其中1 151个基因上调、811个基因下调.丁香酚各剂量组与MIRI组差异表达基因的GO分析结果显示,丁香酚作用于MIRI的生物过程主要涉及免疫反应、氧气输送、急性期反应等;细胞组分主要涉及细胞外空间、染色体、细胞外基质等;分子功能主要涉及趋化因子的活动、载氧活性、钙离子结合等.丁香酚各剂量组与MIRI组差异表达基因的KEGG分析结果显示,丁香酚作用下差异表达基因主要涉及FOXO信号通路、HIF-1信号通路、PI3K-AKT信号通路、JAK-STAT信号通路等,其中以HIF-1信号通路富集得分最高且差异最明显.结论 丁香酚可抑制大鼠MIRI,其机制可能与调控HIF-1信号通路有关.

目的 通过构建稳定表达线粒体荧光报告系统的牙髓干细胞(DPSC)建立线粒体示踪体系,并采用该示踪体系研究间充质干细胞(MSC)向辐射损伤细胞输送线粒体.方法 ① 构建质粒pSIN-EF1α-COX8A-DsRed2(简称COX8A-DsRed2),并进行基因测序和PCR鉴定;COX8A-DsRed2用293T细胞包装获得慢病毒(Lv-COX8A-DsRed2)并感染DPSC,采用荧光显微镜观测红色荧光蛋白DsRed2在DPSC线粒体的稳定表达(DPSC-COX8A-DsRed2).② 在DPSC-COX8A-DsRed2中使用荧光染色法观察DsRed2荧光蛋白与线粒体膜受体线粒体外膜转位酶20(TOMM20)和线粒体示踪试剂MitoTracker Green的共定位.③ 采用10GyX射线照射大鼠小肠隐窝上皮细胞系IEC-6建立细胞辐射损伤模型,并使用5(6)-羧基二乙酸荧光素N-琥珀酰亚胺酯(CFSE)荧光染料标记IEC-6细胞;于照射后,立即加入DPSC-COX8A-DsRed2,继续培养24 h,荧光显微镜观察DPSC-COX8A-DsRed2能否向辐照受损细胞递送线粒体.结果 ①载体成功插入基因COX8A和DsRed2基因序列,COX8A-DsRed2构建成功;DPSC-COX8A-DsRed2细胞内表达红色荧光DsRed2;② 荧光染色法结果显示,红色荧光报告系统DPSC-COX8A-DsRed2与线粒体膜受体TOMM20、线粒体示踪试剂MitoTracker Green共定位于细胞线粒体;③DPSC-COX8A-DsRed2与辐射损伤IEC-6细胞共培养,荧光显微镜可观测到绿色荧光的IEC-6细胞中出现DPSC来源的红色荧光标记的线粒体,表明DPSC与IEC-6之间发生了线粒体转移.结论 构建的线粒体荧光探针能够准确指示线粒体的转移,为下一步研究间充质干细胞线粒体转移在辐射损伤救治中的作用提供了理想工具.

背景:免疫治疗可通过多种途径增强抗肿瘤免疫反应,联合免疫治疗是一个更好的选择.超声靶向微泡破坏技术可将药物、基因、抗体和细胞因子直接输送到免疫细胞的细胞质中,进一步增强免疫应答.然而,通过超声靶向微泡破坏技术将携趋化因子受体4抗体和细胞程序性死亡配体1抗体双靶向纳米微泡应用于卵巢癌的治疗尚未见报道.目的:探讨超声辐照携趋化因子受体4抗体和程序性死亡配体1抗体双靶向纳米微泡对卵巢癌细胞增殖、迁移的影响.方法:对IOSE-80正常卵巢上皮细胞及SKOV3、CAOV3卵巢癌细胞进行培养及扩增,采用双标记荧光免疫法对3种细胞中的趋化因子受体4和细胞程序性死亡配体1蛋白进行共定位,蛋白质印迹法检测3种细胞中趋化因子受体4和程序性死亡配体1蛋白相对表达量,并筛选出实验细胞.制备携不同配体的靶向纳米微泡后,即单纯的纳米微泡、携趋化因子受体4抗体的纳米微泡、携趋化因子受体4和程序性死亡配体1抗体的纳米微泡.取对数生长期的SKOV3卵巢癌细胞,分6组处理:A组加入McCoy's 5A培养基,B组加入含基质细胞衍生因子1的McCoy's 5A培养基,C组加入单纯的纳米微泡溶液与含基质细胞衍生因子1的McCoy's 5A培养基,D组加入携趋化因子受体4抗体的纳米微泡溶液与含基质细胞衍生因子1的McCoy's 5A培养基,E组加入携趋化因子受体4和程序性死亡配体1抗体的纳米微泡溶液与含基质细胞衍生因子1的McCoy's 5A培养基,F组加入单纯的纳米微泡溶液,超声辐照120 s,孵育48 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率,通过伤口愈合实验检测B-E组细胞的愈合迁移能力.结果与结论:①免疫荧光染色显示,3种细胞均可表达趋化因子受体4和程序性死亡配体1蛋白;蛋白质印迹法检测显示,SKOV3、CAOV3卵巢癌细胞中的趋化因子受体4和程序性死亡配体1蛋白表达量均高于IOSE-80正常卵巢上皮细胞(P<0.05);②CCK-8检测结果显示,B组细胞存活率高于A组(P<0.05),F组细胞存活率低于A组(P<0.05),B-E组细胞存活率逐渐降低,组间两两比较差异有显著性意义(P<0.05);③伤口愈合实验显示,B-E组细胞愈合率逐渐降低,组间两两比较差异有显著性意义(P<0.05);④结果表明,超声靶向微泡破坏技术联合携趋化因子受体4抗体和程序性死亡配体1抗体双靶向纳米微泡可显著抑制卵巢癌细胞的增殖迁移.

目的:通过基因工程技术制备表面展示具有促进膜融合作用的水泡性口炎病毒糖蛋白G(vesicular stomatitis virus glycoprotein,VSVG)的外泌体 VSVG-Exos,利用核酸探针介导 DNA 杂交链式反应在其膜表面修饰靶向树突状细胞间黏附分子-3-结合非整合素DC-SIGN的核酸适配体,构建功能化外泌体,通过重编程肿瘤细胞与树突细胞之间的靶向识别过程增强相互作用.方法:以小鼠乳腺癌细胞4T1和小鼠树突状细胞DC2.4为研究对象,通过共聚焦成像和流式细胞术等实验证明VSVG-Exos以膜融合方式特异性结合4T1细胞,以及DC-SIGN适配体具有特异性靶向DC2.4细胞的能力.结果:功能化外泌体可以重编程修饰4T1细胞,增强与DC2.4细胞之间的靶向识别效应.结论:功能化外泌体有效地输送具有特定功能的分子到肿瘤细胞表面,对其进行重编程修饰,提高免疫细胞精准定位和高效攻击肿瘤细胞的能力,为靶向清除肿瘤细胞提供了新的思路和策略.