目的 观察复方地黄颗粒对帕金森病(PD)阴虚动风证大鼠纹状体PTEN诱导假定激酶1(PINK1)、Parkin、α-突触核蛋白(α-syn)表达的影响,探讨其治疗PD阴虚动风证的作用机制.方法 采用黑质注射6-羟基多巴胺制备PD阴虚动风证模型.将65只成模大鼠随机分为模型组、美多芭(150 mg/kg)组和中药低、中、高剂量(1.75、3.5、7 g/kg)组,另取26只大鼠分为正常对照组和假手术组,每组13只,各给药组分别予相应药液灌胃,正常对照组、假手术组和模型组予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续28 d.检测大鼠行为学变化,ELISA和生化试剂盒分别检测纹状体三磷酸腺苷(ATP)含量及线粒体呼吸链复合物Ⅳ(COXⅣ)活性,HE染色观察纹状体组织形态,免疫组化染色、Western blot和RT-qPCR检测纹状体PINK1、Parkin、α-syn蛋白和mRNA表达.结果 与正常对照组和假手术组比较,模型组大鼠旋转圈数和爬杆时间增加,游泳评分降低(P<0.01),纹状体ATP含量及COXⅣ活性降低(P<0.01),神经元排列混乱、数量减少、细胞肿胀,部分细胞核皱缩,空泡形成,边界模糊,纹状体PINK1、Parkin蛋白和mRNA表达降低(P<0.01),α-syn蛋白和mRNA表达升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠旋转圈数和爬杆时间减少,游泳评分升高(P<0.01),纹状体ATP含量及COXⅣ活性升高(P<0.05,P<0.01),神经元数量增加、排列趋于整齐、形态有所改善,纹状体PINK1、Parkin蛋白和mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01),α-syn蛋白和mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),以美多芭组和中药高剂量组改善最明显(P<0.05,P<0.01),2组差异无统计学意义(P>0.05),且中药各剂量组呈剂量依赖性(P<0.05,P<0.01).结论 复方地黄颗粒可改善PD阴虚动风证大鼠行为学症状,可能通过调节纹状体PINK1、Parkin、α-syn表达,进而减轻线粒体功能障碍,保护多巴胺能神经元,发挥治疗PD作用.

核因子E2 相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)信号通路的激活是改善顺铂肝肾毒性的重要保护机制之一,中医药可通过调控Nrf2 信号通路提升机体抗氧化应激能力,改善顺铂所致肝肾损伤,如以黄酮类、酚类及萜类化合物为主的中药单体有效成分及六味地黄丸、肾复舒颗粒等中药复方.但目前中医药调控Nrf2 信号通路防治顺铂所致肝肾损伤的研究尚存在不足之处,如Nrf2 信号通路常与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)等信号通路协同发挥提升机体抗氧化应激能力、抑制凋亡、抗纤维化等作用,但各通路间的交叉机制有待阐明;部分中药存在水溶性差、生物利用度低等局限性;中药复方活性成分复杂性,药理药效作用尚未明确;对针灸疗法研究的深度及广度不够.今后需进一步加强基础实验设计的标准化、规范化,为中医药治疗顺铂所致肝肾损伤提供依据,发挥中医药增效减毒之效.

目的 探讨复方地黄颗粒通过调节泛素-蛋白酶体系统相关蛋白变化治疗帕金森病(PD)阴虚动风证的分子机制.方法 随机选取 26 只SPF级雄性SD大鼠作为正常对照组、假手术组,每组 13 只,其余大鼠采用 6-羟基多巴胺(6-OHDA)脑部偏侧注射损毁黑质法制备PD阴虚动风证大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组,美多芭组(150 mg·kg-1),复方地黄颗粒低、中、高剂量组(1.75、3.5、7 g·kg-1),每组 13 只.各组连续灌胃给药 28 d.观察各组大鼠一般情况及神经行为学表现;免疫组化法、Western blot及 qPCR 法检测各组大鼠脑部损毁侧纹状体组织中泛素(UB)、泛素激活酶(UBE1)、泛素结合酶(UBE2A)、泛素羧基末端水解酶(UCH-L1)阳性细胞表达、蛋白及mRNA表达水平;ELISA法检测各组大鼠脑部损毁侧纹状体中多巴胺(DA)含量变化.结果 正常对照组与假手术组一般情况无明显差异,旋转圈数、悬挂时间及移动格数差异无统计学意义,与假手术组比较,模型组大鼠精神差,易激惹,肢体震颤,行动迟缓,毛色黯黄,饮食少,体质量减轻,旋转圈数增加、悬挂时间及移动格数减少(P<0.01),损毁侧纹状体中UB、UBE1、UBE2A、UCH-L1 阳性细胞表达、mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.01),DA含量明显减少(P<0.01);与模型组比较,美多芭组及复方地黄颗粒各剂量组大鼠一般情况有所改善,旋转圈数减少、悬挂时间及移动格数增加(P<0.05,P<0.01),UB、UBE1、UBE2A、UCH-L1 阳性细胞表达、mRNA及蛋白表达水平提高(P<0.05,P<0.01),DA含量增加(P<0.01);行为学检测及各指标表达水平以美多芭组和复方高剂量组改善最明显(P<0.05,P<0.01),此二者无统计学意义(P>0.05).结论 复方地黄颗粒可能通过调控泛素-蛋白酶体系统相关蛋白的表达,减少异常蛋白聚集,从而减轻DA含量缺失,发挥治疗PD阴虚动风证的作用,并以复方地黄颗粒高剂量效果最佳.

目的 探讨复方地黄颗粒对帕金森病(PD)阴虚动风证大鼠多巴胺(DA)能神经元生物学功能的作用.方法 采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)脑立体注射法制备PD阴虚动风证动物模型,成模大鼠随机分为模型组、美多芭组(150 mg/kg)和复方地黄颗粒低、中、高剂量组(1.75、3.5、7 g/kg),分别给予相应药物进行干预,正常组、假手术组及模型组给予生理盐水,共灌胃28 d,观察各组大鼠一般情况及神经行为学,HE染色观察黑质组织病理改变,透射电镜技术观察损毁侧黑质内DA能神经元的线粒体结构,免疫组化、Western b1ot及RT-qPCR法检测DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1表达.结果 与正常组、假手术组比较,模型组大鼠旋转圈数增加(P＜0.01),游泳评分降低(P＜0.01),悬挂时间减少(P＜0.01),黑质神经元数量减少,形态受损,黑质内神经元出现线粒体肿胀变性,线粒体嵴消失等损伤,损伤侧黑质DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1 mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01);与模型组比较,美多芭组及复方地黄颗粒各剂量组大鼠旋转圈数减少(P＜0.01),游泳评分升高(P＜0.01),悬挂时间增加(P＜0.01),线粒体形态结构损伤减轻,损伤侧黑质DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1 mRNA和蛋白表达均升高(P＜0.05,P＜0.01),复方地黄颗粒高剂量效果与美多芭相当(P＞0.05).结论 复方地黄颗粒可能通过调控DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1表达促进内质网-线粒体稳态,减轻线粒体损伤,维持DA能神经元生物学功能.

目的 观察复方地黄颗粒对帕金森病(PD)阴虚动风证大鼠黑质PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响,探讨其治疗PD的作用机制.方法 通过向黑质注射6-羟多巴胺制备PD阴虚动风证大鼠模型.将大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、美多芭组和复方地黄颗粒低、中、高剂量组,每组10只.各组分别予相应溶液灌胃,连续28 d.检测大鼠神经行为学变化,HE染色观察黑质形态变化,RT-qPCR检测受损黑质PI3K、AKT、mTOR、p62、LC3B mRNA表达,免疫组化检测受损黑质p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达,Western blot检测受损黑质p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR、p62、LC3B蛋白表达.结果 与对照组和假手术组比较,模型组大鼠旋转圈数增加,爬杆时间延长,悬挂时间及移动格数减少(P<0.01);黑质神经元排列紊乱,胞核固缩、结构模糊;受损黑质PI3K、AKT、mTOR、p62 mRNA表达升高,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、p62蛋白表达升高,LC3B mRNA和LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达降低(P<0.01).与模型组比较,美多芭组及复方地黄颗粒各剂量组大鼠旋转圈数减少,爬杆时间缩短,悬挂时间及移动格数增加(P<0.01);黑质神经元数目增多,结构形态明显改善;受损黑质PI3K、AKT、mTOR、p62 mRNA表达降低,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、p62蛋白表达降低,LC3B mRNA和LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),以复方地黄颗粒高剂量组作用最明显(P<0.05,P<0.01),与美多芭组差异无统计学意义(P>0.05).结论 复方地黄颗粒可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路增强受损黑质自噬能力,保护多巴胺能神经元,从而治疗PD.

目的 观察复方地黄颗粒对帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠黑质 α-syn、VAPB、PTPIP51 表达的影响,并探讨其潜在作用机制.方法 构建6-羟基多巴胺(6-OH-DA)PD大鼠模型,成模大鼠随机分为Model组、Madopar组、CLD组、CMD组、CHD组,NC组不做任何处理,SO组注射抗坏血酸,每组13只.检测大鼠神经行为学变化;Western blot、RT-PCR、免疫组化检测黑质 α-syn、VAPB、PTPIP51 表达;HE染色观察黑质组织病理形态变化;透射电镜观察黑质细胞线粒体超微结构;ELISA检测各组黑质组织ATP含量变化.结果 与NC组和SO组比,Model组大鼠旋转圈数和爬杆时间增加,α-syn表达升高,VAPB、PTPIP51表达降低,神经元细胞数量减少、胞体皱缩,线粒体肿胀,线粒体嵴消失,ER-线粒体接触距离变大,ATP含量降低;与Model组相比,Madopar组和CLD组、CMD组、CHD组大鼠旋转圈数和爬杆时间减少,α-syn表达降低,VAPB、PTPIP51表达升高,神经元损伤程度减轻,线粒体形态有所改善,ATP含量增加,呈量效差异性,Madopar组和CHD组相对疗效较佳且差异无统计学意义.结论 复方地黄颗粒能够减轻PD大鼠行为症状,并可能通过下调α-syn表达,上调PTPIP51、VAPB表达,改善线粒体功能,从而发挥治疗PD的作用.

目的 观察复方地黄颗粒对阴虚动风证帕金森病(PD)异动症模型大鼠神经行为学的影响.方法 采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)脑立体定向注射术建立大鼠PD模型,向PD大鼠腹腔注射左旋多巴(50mg/kg)/苄丝肼(12.5mg/kg),每日2次,连续2周,构建阴虚动风证PD异动症(LID)模型.将LID模型大鼠随机分为模型组和复方地黄颗粒组,每组10只,复方地黄颗粒组给予中药复方地黄颗粒(14g/kg,2ml)灌胃,模型组给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续用药6周;另设正常组及假手术组,每组10只.在给药第4、6周分别观察PD大鼠LID模型异常不自主动作(AIM)评分、旋转起动时间、旋转持续时间、旋转圈数、剂峰旋转圈数、APO诱导后旋转圈数等神经行为学的变化.结果 复方地黄颗粒干预后,LID大鼠AIM评分显著降低,旋转起动时间延长,旋转持续时间减低,旋转圈数、剂峰旋转圈数及APO诱导后旋转圈数减少,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 复方地黄颗粒可改善帕金森病LID模型大鼠的神经行为学表现,具有抗LID作用.

目的 探讨复方地黄颗粒治疗阴虚动风证帕金森病(PD)的作用机制,为临床PD治疗提供新的思路.方法 制备6-羟基多巴胺(6-OHDA)阴虚动风证PD大鼠模型,将造模成功的50只大鼠随机分为模型组,美多芭组和复方地黄颗粒低、中、高剂量组;另取不造模大鼠10只不作处理设为正常对照组,10只只注射抗坏血酸设为假手术组.美多芭组给予美多芭150mg/kg,复方地黄颗粒低、中、高剂量组分别给颗粒剂3.5、7、14g/kg灌胃;正常对照组、假手术组和模型组以等体积蒸馏水(2ml/只)灌胃,每日1次,连续用药6周.分别采用RT-qPCR及Western blotting检测神经生长因子及其受体(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、原肌球蛋白受体激酶(Trk)A、TrkB、GDNF家族受体(GFR)-α1以及Ret的mRNA及蛋白在损毁侧纹状体的表达,酪氨酸羟化酶(TH)mRNA及蛋白在损毁侧黑质及纹状体的表达.结果 与正常对照组比较,模型组大鼠NGF、BDNF、GDNF、TrkA、TrkB、GFR-α1、Ret、TH的mRNA及蛋白表达均明显降低(P＜0.01).与模型组比较,美多芭组以及复方地黄颗粒各剂量组神经营养因子及其受体的表达均明显升高(P＜0.01),但仅中剂量组表达水平与美多芭组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 复方地黄颗粒可能通过调控神经营养因子及其受体的表达来发挥抗PD作用,其中以中剂量复方地黄颗粒的疗效为佳.

目的 探讨复方地黄颗粒和毛蕊花糖苷治疗帕金森病(PD)的作用靶标.方法 采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)偏侧损毁黑质制备PD大鼠模型,分层随机分为模型组、美多芭组、毛蕊花糖苷组、复方地黄颗粒(低、中、高剂量)组,另设不作处理的正常对照组和只注射抗坏血酸的假手术组,每组12只.复方地黄颗粒(3.5、7、14g/kg)、毛蕊花糖苷(60mg/kg)和美多芭(150mg/kg)用蒸馏水溶解后分别给予复方地黄颗粒低、中、高剂量组,毛蕊花糖苷组和美多芭组大鼠灌胃,1次/d.正常对照组、假手术组和模型组以等体积蒸馏水(2ml/只)灌胃.灌胃6周后,取大鼠患侧黑质、纹状体,应用RT-PCR法检测各组大鼠N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDA-R1)、NMDA-R2、γ-氨基丁酸B1受体(GABA-RB1) mRNA水平,HPLC法检测天门冬氨酸(ASP)、谷氨酸(GLU)、甘氨酸(GLY)、γ-氨基丁酸(GABA)等含量变化,免疫组化法检测酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数.结果 复方地黄颗粒和毛蕊花糖苷可使PD模型大鼠右侧纹状体NMDA-R1、NMDA-R2 mRNA水平明显降低,GABA-RB1 mRNA表达升高(P＜0.01);ASP、GLU含量升高,GLY、GABA含量降低(P＜0.01);TH阳性表达细胞数明显增多(P＜0.01).其中以复方地黄颗粒中剂量组改善最为明显,差异有统计学意义(P＜0.01).镜下观察可见TH阳性信号定位于细胞质,在正常对照组、假手术组的右侧黑质均可见密集的TH阳性细胞,呈棕褐色,细胞形状主要为圆形或卵圆形,少数呈多边形;模型组右侧黑质可见少量、稀疏分布的TH阳性细胞;给药干预后TH阳性细胞数明显增加.结论 复方地黄颗粒和毛蕊花糖苷的作用靶标可能包括TH以及氨基酸类神经递质及其受体基因.

目的 探讨复方地黄颗粒(CRG)对阴虚动风证帕金森病(PD)大鼠纹状体细胞凋亡及对PI3K/Akt信号通路的影响.方法 采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)注射损毁黑质法制备阴虚动风证PD大鼠模型,造模成功30只大鼠.随机分为模型组、美多芭(MAD)组、复方地黄颗粒低(L-CRG)、中(M-CRG)、高(H-CRG)剂量组,每组6只.另纳入正常对照组和假手术组各6只.美多芭组予美多芭150 mg/(kg·d)灌胃;L-CRG、M-CRG、H-CRG组予复方地黄颗粒3.5 g/(kg·d)、7 g/(kg·d)、14 g/(kg·d)灌胃;正常对照组、假手术组及模型组予等量生理盐水灌胃.用药6周后处死大鼠,取纹状体.采用TUNEL法检测纹状体细胞凋亡情况;采用透射电子显微镜观察纹状体细胞超微结构;采用蛋白印迹(WB)法检测Bcl-2、Bax、PI3K、Akt、p-Akt蛋白水平.结果 与对照组和假手术组比较,模型组细胞凋亡指数明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡特征明显,Bax蛋白水平明显升高(P<0.05),Bcl-2、PI3K、p-Akt蛋白水平降低(P<0.05);与模型组比较,低中高剂量复方地黄颗粒组细胞凋亡指数显著下降(P<0.05),细胞形态趋于正常,Bax蛋白水平明显降低(P<0.05),Bcl-2、PI3K、p-Akt蛋白水平升高(P<0.05),且呈剂量依赖效应.结论 复方地黄颗粒可能通过PI3K/Akt信号通路调节凋亡相关蛋白表达,抑制阴虚动风证PD大鼠纹状体细胞凋亡,呈剂量依赖效应.