目的:研究地黄叶总苷胶囊对核苷类药物所致肾损伤的疗效及线粒体自噬的作用。方法:使用阿德福韦酯（ADV）建立乙型肝炎病毒（HBV）转基因乙型肝炎小鼠肾损伤模型，造模1周及2周检测各组肾功能，造模2周时检测肾脏组织线粒体自噬指标，透射电镜检测肾脏组织线粒体自噬现象。后分别予地黄叶总苷胶囊或等渗盐水对肾损伤小鼠灌胃治疗8周，检测肾功能，观察肾脏组织形态并检测肾脏组织线粒体自噬指标。观察不同浓度毛蕊花糖苷（地黄叶总苷胶囊主要有效成分）对ADV引起HK-2细胞损伤后的保护作用。将HK-2细胞分为对照组、ADV以及ADV加毛蕊花糖苷组。观察不同时间及不同浓度毛蕊花糖苷对HK-2细胞线粒体自噬指标的影响。收集50例使用核苷（酸）类似物治疗后出现肾损伤的慢性乙型肝炎患者。随机数法分为对照组29例按常规治疗，治疗组21例在对照组的基础上给予地黄叶总苷胶囊治疗，8周检测血清肌酐（Scr）、尿蛋白。统计学方法用 χ2 ?或 t检验。 结果:ADV组造模2周引起HBV小鼠肾功能损伤，ADV组肾组织自噬指标表达高于对照组；透射电镜观察到ADV组肾脏组织线粒体自噬现象。与对照组相比，地黄叶总苷胶囊治疗2个月HBV小鼠肾功能好转，自噬指标表达下调。毛蕊花糖苷促进ADV损害的HK-2细胞的增殖，且较单独ADV组自噬指标表达下调。50例有肾功能损伤的患者中，治疗组的尿蛋白改善显著优于对照组，治疗组有效18例、无效3例，对照组有效12例、无效17例，差异有统计学意义（ χ2 ?=?9.975?0， P ?=?0.001?6）。治疗组血肌酐减低，治疗组有效11例、无效10例，对照组有效12例、无效17例，2组差异无统计学意义（ χ2 ?=?0.593?5， P ?=?0.441?1）。 结论:地黄叶总苷胶囊可改善核苷（酸）类似物所致慢性乙型肝炎的肾功能损伤，可能通过抑制PINK1/PARKIN介导的线粒体自噬发挥作用。

目的:建立密蒙花标准汤剂超高效液相色谱（UPLC）指纹图谱及有效成分毛蕊花糖苷和蒙花苷的含量测定方法。方法:采用UPLC法建立17批密蒙花标准汤剂指纹图谱；利用相似度和聚类分析法对17批密蒙花标准汤剂进行评价分析；通过对照品对比对标准汤剂色谱峰进行归属；采用HPLC法测定密蒙花标准汤剂中有效成分毛蕊花糖苷和蒙花苷含量。结果:密蒙花标准汤剂共呈现11个指纹峰，归属其中6个指纹峰；17批样品相似度为0.972~0.999，17批次标准汤剂聚类分为2类；采用指纹图谱方法对伪品结香花标准汤剂进行有效鉴别；含量测定结果显示，四川和湖北产地密蒙花饮片制备的标准汤剂中，毛蕊花糖苷和蒙花苷含量较高，且稳定。结论:该方法可全面评价密蒙花标准汤剂质量，为其配方颗粒质量标准建立提供参考。

该研究探讨毛蕊花糖苷对单侧输尿管梗阻模型大鼠肾纤维化的作用。采用随机数字表法将24只成年健康雄性SD大鼠随机分为假手术（CON）组、单侧输尿管梗阻（UUO）组、UUO+毛蕊花糖苷（ACT）组和UUO+贝那普利（BZ）组，采用单侧输尿管结扎术建立肾纤维化动物模型。HE染色和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变。免疫组化法检测肾组织Ⅲ型胶原蛋白（CollagenⅢ）、热休克蛋白（HSP）-47、结缔组织生长因子（CTGF）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、β联蛋白（β-catenin）、B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）和半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）蛋白的表达。Western印迹法检测肾组织葡萄糖调节蛋白（GRP）78蛋白表达。结果显示，与CON组比较，UUO组大鼠肾小管扩张，肾间质胶原纤维沉积显著增加；UUO+ACT组和UUO+BZ组大鼠肾小管扩张和间质胶原纤维沉积程度较UUO组显著减轻，但仍明显重于CON组。与CON组比较，UUO组大鼠肾组织CTGF、α-SMA、CollagenⅢ、HSP-47、β-catenin及GRP78蛋白表达量均显著较高，Bcl-2蛋白表达量显著较低（均 P<0.05）；与UUO组比较，UUO+ACT组和UUO+BZ组大鼠肾组织Bcl-2蛋白表达量均显著较高，而其他蛋白表达量均显著较低（均 P<0.05）。该研究表明，毛蕊花糖苷可通过下调CTGF、α-SMA、CollagenⅢ、HSP-47、β-catenin及GRP78表达，上调Bcl-2表达，从而发挥改善肾纤维化的作用。

目的:比较不同产地车前子盐炙前后6种有效成分含量的变化。方法:采用HPLC法对车前子生品和盐炙车前子中的京尼平苷酸、车前素、槲皮素、山柰酚、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷6种成分进行定量分析。结果:京尼平苷酸、车前素、槲皮素、山柰酚、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷6种成分能够良好分离；线性范围分别为0.259 2~ 3.628 8 μg ( r＝0.999 8)、0.054 3~ 0.760 5 μg ( r＝0.999 6)、0.030 0~ 0.420 6 μg ( r＝0.999 4)、0.055 6~ 0.777 8 μg ( r＝0.999 5)、0.287 0~ 4.018 0 μg ( r＝0.999 8)、0.033 1~ 0.463 1 μg ( r＝0.999 7)；平均加样回收率分别为98.68%、98.46%、98.87%、98.99%、98.34%、98.75%( n＝6)。5个产地的8批车前子生品中6种有效成分含量均有一定差异。车前子经盐炙后，车前素含量变化不大；盐炙车前子的黄酮类成分、京尼平苷酸和异毛蕊花糖苷含量明显增多；毛蕊花糖苷含量显著降低。 结论:基于HPLC法对车前子盐炙前后6种成分进行定量分析，为进一步对车前子盐炙前后的质量变化和药效物质基础提供参考依据。

目的:探讨毛蕊花糖苷(VB)对脑出血(ICH)小鼠的脑保护作用及其是否与抑制Toll样受体4(TLR4)介导的急性炎性反应有关。方法:采用8周龄C57BL/6雄性小鼠进行研究，其中野生型40只，TLR4基因敲除(TLR4 －/－)20只。按照完全随机方法将野生型小鼠分为假手术组、ICH组，ICH后VB治疗组(ICH＋VB 15 mg/kg或30 mg/kg)，将TLR4 －/－组小鼠分为TLR4 －/－＋ICH组和TLR4 －/－＋ICH＋VB(30 mg/kg)组，每组小鼠均为10只。采用右侧纹状体注射细菌胶原酶Ⅶ的方法构建ICH模型。模型建立成功(改良Garcia评分≤10分)后分别于小鼠腹腔注射VB(15 mg/kg或30 mg/kg)或等体积生理盐水，1次/d，连续3 d。采用改良Garcia评分评价脑功能损伤情况；取脑组织切片后计算脑血肿面积以评估出血量，采用干湿比法计算脑组织含水量；采用TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡率；采用免疫荧光染色(IF)法检测脑组织Iba-1的相对表达量；采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验和蛋白质免疫印迹法(WB)检测TLR4及其下游炎症介质[核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)1β及IL-6]的表达。比较野生型小鼠组间及TLR4 －/－小鼠组间上述指标的差异。取出生2 h内的TLR4 －/－乳鼠皮质组织培养原代神经元，采用Transwell小室将神经元与小鼠小胶质细胞株(BV2细胞)共培养，并分别用红细胞裂解物及红细胞裂解物＋VB(50 μmol/L)处理24 h，采用IF法观察神经元NeuN蛋白的表达。 结果:与ICH组相比，VB治疗组(尤其是ICH＋VB 30 mg/kg组)小鼠的致良Garcia评分均显著升高(均 P<0.05)；假手术组、ICH组、ICH＋VB 15 mg/kg组、ICH＋VB 30 mg/kg组脑出血量分别为0 mm 3、(7.33±1.99)mm 3、(3.19±0.47)mm 3、(1.66±0.26)mm 3，脑组织含水量分别为(79.00±0.50)%、(85.00±0.75)%、(81.50±0.50)%、(80.25±0.25)%，神经元的凋亡率分别为(4.8±2.0)%、(38.7±6.8)%、(21.5±6.9)%、(9.8±4.2)%，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。IF结果显示，ICH组脑组织Iba-1的相对表达量明显高于VB治疗组(均 P<0.05)。qRT-PCR和WB结果显示，与ICH组比较，VB治疗组的TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA和蛋白的相对表达量均降低(均 P<0.05)。TLR4 －/－＋ICH＋VB组与TLR4 －/－＋ICH组比较，改良Garcia评分、脑组织含水量、神经元凋亡率的差异均无统计学意义(均 P>0.05)。与BV2细胞共培养的TLR4 －/－乳鼠神经元加入红细胞裂解物与加入红细胞裂解物＋VB处理后NeuN蛋白的表达差异无统计学意义( P＝0.872)。 结论:VB可改善ICH后小鼠的神经功能缺损，减少ICH量、减轻脑水肿程度及抑制细胞凋亡，其机制可能与通过抑制TLR4信号通路，减少小胶质细胞的激活以及促炎细胞因子的释放有关。

圣愈汤是补益气血的经典名方，具有补血、保护神经、抗氧化等药理作用，临床上常用于治疗骨科、妇科及内科疾病。通过总结分析近年圣愈汤化学成分、药理作用及临床应用研究文献，并参照质量标志物（Q-marker）“五原则”对圣愈汤的Q-marker进行预测分析，认为毛蕊花糖苷、阿魏酸、川芎内酯A、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、黄芪甲苷6种成分可作为圣愈汤的Q-marker，为建立完整的圣愈汤质量评价体系提供参考。

目的:探讨毛蕊花糖苷(VB)对胶质母细胞瘤细胞上皮间质转化的作用及分子机制。方法:(1)实验1：常规培养胶质母细胞瘤T98和U251细胞并各自分为4组，依次添加0、20、40、80 μmol/L的VB处理24 h。采用CCK-8实验检测4组细胞存活率；采用Transwell实验检测4组细胞迁移、侵袭情况；采用RT-PCR实验及Western blotting实验检测4组细胞转化生长因子-β(TGF-β)、波形蛋白、Snail蛋白mRNA及蛋白表达情况。(2)实验2：T98、U251细胞各分为4组，依次为对照组、VB组、TGF-β组和TGF-β+VB组。对照组及VB组细胞转染空载质粒、TGF-β组及TGF-β+VB组细胞转染TGF-β质粒；转染24 h后VB组、TGF-β+VB组细胞均加入40 μmol/L VB继续培养24 h，随后进行后续实验(迁移和侵袭实验、Western blotting实验，实验方法及检测指标同实验1)。(3)体内实验：裸鼠皮下种植U251细胞后分为2组，每组8只。实验组每天腹腔注射100 mg/kg的VB，对照组注射等量的PBS。记录小鼠肿瘤体积大小和小鼠体质量的变化；实验终点(移植后21 d)时，检测小鼠肿瘤重量并采用Western blotting实验检测肿瘤中TGF-β、波形蛋白、Snail的表达。结果:(1)实验1：与0 μmol/L VB组相比较，20 μmol/L、40 μmol/L VB组的细胞存活率差异无统计学意义( P>0.05)，而80 μmol/L VB组细胞存活率下降，差异有统计学意义( P<0.05)；与0 μmol/L VB组比较，20和40 μmol/L VB组迁移和侵袭到下室的细胞随浓度的增高而减少，TGF-β、波形蛋白、Snail蛋白的mRNA和蛋白表达水平也依次降低，差异有统计学意义( P<0.05)。(2)实验2：与对照组相比较，VB组细胞迁移和侵袭的细胞数量减少，TGF-β、波形蛋白及Snail蛋白的表达下调，差异有统计学意义( P<0.05)；而TGF-β组细胞迁移和侵袭的细胞数量增加，TGF-β、波形蛋白及Snail蛋白的表达上调，差异有统计学意义( P<0.05)；与VB组比较，TGF-β组及TGF-β+VB组细胞迁移和侵袭的细胞数量增加，TGF-β、波形蛋白及Snail蛋白的表达上调，差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)体内实验：与对照组相比，实验组小鼠的肿瘤体积和肿瘤重量更小，TGF-β、波形蛋白及Snail蛋白表达量更小，差异均有统计学意义( P<0.05)；但2组小鼠的体质量差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:VB通过下调TGF-β的表达而抑制胶质母细胞瘤的上皮间质转化。

目的:探讨毛蕊花糖苷对糖尿病肾病小鼠肾组织中高迁移率族蛋白1（high mobility group box 1，HMGB1）及核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）表达的影响。方法:采用20只8周龄健康C57BL/6雄性小鼠，选取其中5只作为正常对照组，余15只单次腹腔注射链脲菌素（150 mg/kg）诱导建立1型糖尿病模型后随机平均分为模型组、毛蕊花糖苷组和厄贝沙坦组。持续给药8周后处死小鼠，收集血清、尿液和肾组织，分别进行生化、病理和相关mRNA与蛋白的检测。体外实验采用肾小管上皮细胞（NRK-52E细胞），将其分为对照组（1 g/L葡萄糖）、高糖组（4.5 g/L葡萄糖）和高糖+毛蕊花糖苷组（4.5 g/L葡萄糖+32 μmol/L毛蕊花糖苷），分别于48 h、72 h时间点收获细胞。用实时定量PCR和Western印迹法检测HMGB1和NF-κB mRNA及蛋白的表达。结果:与正常对照组比较，模型组血糖、24 h尿蛋白量、血尿素氮、血肌酐均升高（均 P<0.05），血清、尿液HMGB1均升高（均 P<0.05）；病理染色可见肾小管间质炎性细胞浸润，系膜扩增改变；HMGB1和NF-κB的mRNA、蛋白表达均增加（均 P<0.05）。与模型组比较，毛蕊花糖苷组24 h尿蛋白量、血尿素氮、血肌酐均下降（均 P<0.05），血糖无明显变化（ P>0.05），血清、尿液HMGB1均下降（均 P<0.05），肾脏组织病变减轻，HMGB1和NF-κB的mRNA、蛋白表达下调（均 P<0.05）。NRK-52E细胞中，与对照组比较，高糖组HMGB1、NF-κB mRNA及蛋白水平表达均升高（均 P<0.05）；毛蕊花糖苷干预后，HMGB1、NF-κB mRNA及蛋白水平表达均下调（均 P<0.05）。 结论:毛蕊花糖苷可改善糖尿病肾病小鼠的肾脏病变，其机制可能与降低HMGB1和NF-κB的表达有关。

目的:建立密蒙花超高效液相色谱（UPLC）指纹图谱和2个有效成分含量测定方法，为全面评价不同产地密蒙花药材的质量提供参考。方法:采用UPLC法建立密蒙花药材的指纹图谱；对其进行相似度评价、聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA），并测定密蒙花药材中毛蕊花糖苷和蒙花苷含量。结果:17批密蒙花药材指纹图谱有12个共有指纹峰，经对照品比对，指认其中6个指纹峰，分别为松果菊苷、蒙花苷、木犀草苷、毛蕊花糖苷、异类叶升麻苷、芹菜素；17批密蒙花药材指纹图谱相似度均大于0.9；不同产地的药材分为2类，采用OPLS-DA发现5个差异性标志物，显著性差异排序分别为毛蕊花糖苷>峰3>松果菊苷>异类叶升麻苷>蒙花苷；采用指纹图谱方法对伪品结香花药材进行有效鉴别；湖北和四川产区的密蒙花药材含量较高且稳定。结论:该方法可有效分析不同产地密蒙花药材的质量差异，为其质量控制提供依据。

目的 基于网络药理学和分子对接技术筛选补肾活血方防治糖尿病性视网膜病变的质量评价指标,同时建立活性成分的超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UHPLC-QqQ-MS/MS)含量测定方法.方法 利用网络药理学筛选补肾活血方防治糖尿病性视网膜病变的关键化合物和靶点.基于分子对接技术验证化合物和靶点的相关性,确定补肾活血方的活性成分作为质量评价指标.建立补肾活血方活性成分的UHPLC-QqQ-MS/MS含量测定方法.采用ZORBAX SB-C18(2.1 mm×50 mm,1.8 μm)色谱柱,甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)作为流动相,在多反应监测模式下进行梯度洗脱.流速:0.3 mL·min-1;进样量:1 μL.结果 网络药理学及分子对接筛选出了 5 个核心靶点及 12 个活性成分(毛蕊花糖苷,松果菊苷,异类叶升麻苷,丹参酮ⅡA,隐丹参酮,二氢丹参酮I,人参皂苷Re、Rd和Rb1,葛根素,大豆苷,鹰嘴豆牙素A),其亲和力良好(结合能≤-5.0 kcal·mol-1).含量测定结果表明,各成分在线性范围内相关性良好(r＞0.999 5),平均加样回收率在 97.57%～101.48%.8 批样品中 12个成分含量分别为 0.027 9%～0.050 6%、0.006 4%～0.022 0%、0.017 1%～0.041 5%、0.009 2%～0.015 4%、0.012 6%～0.020 5%、0.004 4%～0.007 6%、0.334%～0.643%、0.238%～0.530%、0.353%～0.693%、3.411%～6.048%、1.023%～1.352%和 0.000 8%～0.001 8%.结论 基于网络药理学、分子对接和UHPLC-QqQ-MS/MS技术,建立了快速筛选并测定补肾活血方中 12 个活性成分的方法,为全面评价其质量及有效性提供了参考.