目的:探讨过表达多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其分子机制。方法:采用杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基培养U373细胞，分为对照组和LRIG1组，对照组采用对照慢病毒感染，LRIG1组采用过表达LRIG1慢病毒感染，48 h后筛选阳性细胞。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析两组细胞增殖；采用流式细胞术分析两组细胞凋亡；采用Transwell分析两组细胞侵袭；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析凋亡和侵袭相关蛋白表达水平。计量资料比较采用 t检验。 结果:与对照组细胞(1.24±0.21)比较，LRIG1组细胞中LRIG1蛋白表达水平(2.81±0.30)显著增加，差异有统计学意义( t＝3.015， P<0.05)。与对照组细胞(1.74±0.25)比较，LRIG1组细胞吸光度值(1.12±0.18)显著下降，差异有统计学意义( t＝3.641， P<0.05)。与对照组细胞[(78.65±10.58)%]比较，LRIG1组细胞EdU阳性率[(34.02±8.01)%]明显下降，差异有统计学意义( t＝4.387， P<0.05)。与对照组细胞[(5.02±1.81)%]比较，LRIG1组细胞凋亡率[(25.49±6.89)%]明显增加，差异有统计学意义( t＝6.914， P<0.05)。与对照组细胞[(88.14±9.28)个]比较，LRIG1组细胞侵袭数量[(39.48±5.81)个]明显下降，差异有统计学意义( t＝5.498， P<0.05)。与对照组细胞(0.58±0.10)比较，LRIG1组细胞中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平(1.16±0.13)显著增加，差异有统计学意义( t＝3.001， P<0.05)。与对照组细胞(1.18±0.18)比较，LRIG1组细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达水平(0.44±0.11)显著下调，差异有统计学意义( t＝3.482， P<0.05)。 结论:过表达LRIG1可显著抑制脑胶质瘤细胞增殖和侵袭，促进肿瘤细胞凋亡。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-183对胃癌细胞增殖和迁移的影响及其分子机制。方法:选取2016年6月到2019年6月在郑州大学附属肿瘤医院收集的胃癌和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析胃癌和癌旁组织中miR-183表达水平；在胃癌细胞株MKN-28中采用慢病毒建立对照miRNA和miR-183过表达细胞株(miR-NC组和miR-183组)，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和Tranwell分析两组细胞增殖和迁移能力；异体移植瘤模型分析两组细胞在体内的增殖能力；采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-183靶基因，并分析靶基因对胃癌细胞增殖和迁移的影响。采用 t检验分析两组的数值的统计学意义，组间比较采用 t检验。 结果:与癌旁组织miR-183表达水平(1.02±0.16)比较，胃癌组织中miR-183表达水平(2.74±0.24)显著增加，差异有统计学意义( t＝2.891， P<0.05)。体外和体内细胞增殖实验证实，与miR-NC组细胞(1.18±0.15)、(1 028.34±129.38) mm 3比较，miR-183组细胞肿瘤体积增殖(1.82±0.23)、(1 927.34±209.38) mm 3显著增加，差异均有统计学意义( F＝3.711， P<0.05； F＝2.981， P<0.05)。与miR-NC组细胞迁移数[(74.44±8.43)个]比较，miR-183组细胞迁移数量[(171.34±12.78)个]显著增加，差异有统计学意义( t＝3.910， P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶基因证实多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)是miR-183的靶基因。与miR-NC组细胞LRIG1蛋白表达水平(1.25±0.17)比较，miR-183组细胞LRIG1蛋白表达水平(0.48±0.17)显著下调，差异有统计学意义( t＝3.719， P<0.05)。 结论:miR-183在胃癌中呈高表达，通过调控LRIG1蛋白表达调控着胃癌的增殖和迁移。

目的:观察微小RNA(miRNA，miR)-4295靶向调控多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)对脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:选取2018年6月到2020年4月经手术切除的120例脑胶质瘤及癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析胶质瘤组织和癌旁组织中miR-4295表达水平。采用慢病毒在脑胶质瘤细胞系U251建立miR-4295沉默细胞系(实验组)和对照细胞系(对照组)。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析两组细胞增殖能力；采用Transwell分析细胞侵袭能力；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析对照组和实验组EMT标志物表达变化。生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-4295基因，并分析对照组和实验组细胞靶蛋白表达水平。组间数据比较采用 t检验。 结果:与癌旁组织(1.29±0.20)比较，脑胶质瘤组织中miR-4295表达水平(2.81±0.19)显著增加，差异有统计学意义( t＝2.809， P<0.05)。与对照组(1.07±0.15)比较，实验组细胞miR-4295表达水平(0.38±0.11)显著下调，差异有统计学意义( t＝2.441， P<0.05)。与对照组细胞48 h吸光度( A)值(1.61±0.25)比较，实验组细胞48 h A值(1.22±0.18)显著下降，差异有统计学意义( t＝2.091， P<0.05)。与对照组细胞[(89.27±9.10)个]比较，实验组侵袭细胞数量[(32.49±5.94)个]显著下降，差异有统计学意义( t＝4.109， P<0.05)。与对照组细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平(1.13±0.13、1.20±0.19)比较，实验组细胞N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平(0.30±0.11、0.37±0.12)显著下调，差异有统计学意义( t＝3.091、2.861， P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示LRIG1是miR-4295靶基因。癌旁组织中LRIG1相对表达水平(1.05±0.22)比较，肿瘤组织LRIG1相对表达水平(0.23±0.11)显著下调，差异有统计学意义( t＝3.021， P<0.05)。与对照组细胞LRIG1相对表达水平(0.35±0.13)比较，实验组细胞LRIG1相对表达水平(0.89±0.17)显著增加，差异有统计学意义( t＝2.198， P<0.05)。 结论:miR-4295通过靶向LRIG1调控着脑胶质瘤细胞增殖、侵袭和EMT。

目的:探讨过表达多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)通过细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路影响神经胶质瘤细胞增殖、迁徙和侵袭及其分子机制。方法:选取南昌大学第二附属医院2018年9月至2020年6月手术治疗的103例患者的神经胶质瘤组织和癌旁组织为研究对象，癌旁组织为对照组。培养胶质瘤U251细胞，采用荧光定量聚合酶链反应(PT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测LRIG1、CTLA-4基因及蛋白的表达水平。利用Flag-LRIG1质粒构建LRIG1过表达细胞模型，命名为对照组和LRIG1组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测两组细胞增殖能力，细胞划痕及Transwell实验检测两组细胞迁徙和侵袭能力。Western blot检测PI3K、Akt蛋白表达水平。组间数据比较采用 t检验。 结果:胶质瘤组LRIG1表达水平(1.54±0.11)明显低于癌旁对照组LRIG1表达水平(2.11±0.12)，差异有统计学意义( t＝6.070， P<0.01)。胶质瘤组CTLA-4表达水平(3.82±0.09)明显高于癌旁对照组CTLA-4表达水平(0.51±0.48)，差异有统计学意义( t＝8.190， P<0.01)。Flag-LRIG1质粒转染后LRIG1组LRIG1蛋白表达水平(2.83±0.17)高于对照组LRIG1表达水平(1.41±0.08)，差异有统计学意义( t＝13.090， P<0.01)。LRIG1组细胞吸光度值(0.51±0.04)低于对照组细胞吸光度值(1.11±0.09)，差异有统计学意义( t＝10.550， P<0.01)；划痕实验24 h LRIG1组细胞迁移面积[(9.52±0.12)% ]低于对照组细胞迁移面积[(12.05±0.54)%]，差异有统计学意义( t＝7.920， P<0.05)；Transwell实验LRIG1组细胞迁移数量[(43.15±5.17)个]低于对照组细胞迁移数量[(70.13±6.13)个]，差异有统计学意义( t＝5.830， P<0.01)。LRIG1组CTLA-4蛋白表达水平(0.50±0.08)低于对照组CTLA-4蛋白表达水平(0.83±0.14)，差异有统计学意义( t＝3.550， P<0.05)。 结论:LRIG1通过下调CTLA-4表达来调控PI3K /AKT通路从而抑制脑质瘤细胞的增殖和迁移。

目的:研究孕期尼古丁暴露对子代小鼠牙釉质形成的影响及其可能的表观遗传学机制。方法:通过随机数字表法将10只C57BL/6孕鼠分为对照组（皮下注射生理盐水）及孕期尼古丁暴露（prenatal nicotine exposure，PNE）组（皮下注射尼古丁溶液），每组5只，孕鼠生产后分别收集出生后0 d（postnatal day 0，P0；P14、P25含义依此类推）、P14、P25新生小鼠，根据母代分组分为子代对照组及子代PNE组，并记录P0、P25子代小鼠体质量。采用显微CT（micro-CT）扫描分析、扫描电镜和维氏显微硬度检测对子代小鼠牙槽骨和下颌切牙进行硬组织相关参数分析。提取P25子代小鼠下颌骨组织及第3代牙上皮干细胞（dental epithelial stem cell，DESC）中的总RNA，通过实时荧光定量PCR检测成骨向及成釉向分化相关基因、增殖相关标志物和干细胞标志物的表达水平。采用石蜡切片免疫组织化学染色观察增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，Pcna）、釉原蛋白（amelogenin，Amelx）、甲基转移酶ZESTE增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2，Ezh2）、组蛋白H3第27位赖氨酸的三甲基化修饰（histone H3 trimethylated at lysine 27，H3K27me3）阳性染色分布及水平。使用细胞增殖（cell counting kit-8，CCK-8）试剂盒对外源性添加不同浓度（0.01、0.1、1 mmol/L）尼古丁以及Ezh2抑制剂GSK126的DESC进行细胞活力检测。结果:PNE组孕鼠较对照组更容易出现不良妊娠结局，P0时子代PNE组小鼠体质量［（0.99±0.02）g］显著低于子代对照组［（1.20±0.04）g］（ P<0.001）；P25时，子代PNE组小鼠体质量［（9.65±1.32）g］显著低于子代对照组［（15.26±1.70）g］（ P<0.001），死产率［（46.40±9.30）%］显著高于对照组（0）（ P<0.001）。P14和P25时，子代PNE组小鼠下颌切牙釉质矿化沉积点与第一磨牙近中面的距离数值［分别为（-1 349±45）、（-506±380）μm］均较子代对照组［分别为（-1 192±147）、（504±198）μm］显著减小（ P<0.05， P<0.001），提示矿化沉积点延迟。子代PNE组小鼠切牙釉柱及釉柱间质较对照组排列松散无序，显微硬度［（245.7±18.4）MPa］较子代对照组［（371.9±28.7）MPa］显著降低（ P<0.001）。HE染色显示子代PNE组小鼠前成釉细胞（pre-ameloblast，Pre-Am）区域排列较对照组紊乱，矿化沉积点推迟，暂时性扩增细胞（transit-amplifying cell，TA）及Pre-Am区域延长。免疫组织化学染色显示，子代PNE组小鼠唇侧颈环（labial cervical loop，LaCL）整体Pcna表达较子代对照组显著增多（ P<0.05），H3K27me3较对照组显著富集（ P<0.01），对应区域可见Ezh2表达显著增加（ P<0.01），同时成釉细胞胞质中Amelx阳性信号减弱。体外实验添加1 mmol/L 尼古丁能显著上调子代PNE组DESC的Pcna基因表达水平（ P<0.01），同时显著下调DESC标志物B淋巴瘤Mo-MLV插入蛋白1、富亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域1和成釉细胞向分化的相关基因Amelx等的基因表达水平（ P<0.05， P<0.05， P<0.01）。此外，与0 h时相比，干预24 h后1 mmol/L尼古丁可显著增强DESC的增殖活性（ P<0.001），添加10 μmol/L Ezh2抑制剂GSK126可挽救1 mmol/L尼古丁对DESC带来的增殖促进作用。 结论:孕期尼古丁暴露可能导致成釉向谱系定向分化过程延迟，致子代小鼠DESC增殖及分化异常，并且影响H3K27me3表观遗传修饰水平，造成子代牙釉质发育障碍，提示孕期尼古丁暴露是牙发育的危险环境因素。

目的 采用多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1 (Lrig1)过表达的方式,确定在食管鳞癌细胞(Eca109细胞)中是否存在Lrig1对Survivin和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-9)的调控.方法 使用重组质粒GV-219-Lrig1转染Eca109细胞使其过表达Lrig1;采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法和蛋白质印迹法分别检测细胞中Lfig1、Survivin和Caspase-9的信使核糖核酸(mRNA)及蛋白的表达水平,使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 重组质粒GV-219-Lrig1转染Eca109细胞24 h后,在mRNA水平,Lrig1表达量显著增高(P＜0.01),而Survivin和Caspase-9无明显变化(P＞0.05);在蛋白水平,Lrig1和Cleaved-Caspase-9表达量都显著增加(P＜0.05),而Survivin表达量无明显变化(P＞0.05);流式细胞仪检测结果显示,与GV-219(NC组)相比,重组质粒GV-219-Lrig1转染的Eca109细胞24 h细胞晚期凋亡率增加1.6％.结论 在Eca109细胞中,过表达Lrig1使其在转录和蛋白水平的表达量显著增加,可明显增加Cleaved-Caspase-9的蛋白水平.但对Survivin的表达没有影响.其调控机制尚待进一步研究.

目的 用T7噬菌体展示技术(phage-displayed technique,PDT)筛选与可溶性多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(soluble leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1,sLRIG1)相互作用的蛋白,为进一步研究sLRIG1作用于人脑胶质瘤的机制找到突破点.方法 利用BacPAK6杆状病毒蛋白表达系统(baculovirus expression system,BEVS)获得人sLRIG1重组蛋白,以该蛋白为靶标,采用亲和淘洗方法经6轮筛选人肝细胞cDNA T7噬菌体展示文库;随机挑选96个筛选到的噬菌体行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳回收DNA片段并送测序.结果 经过6轮筛选,噬菌体投入和产出量比达1.85×106 PFU,趋于稳定.回收的DNA片段多在250～750bp,纯化回收后得到35个克隆样本,送测序后得到35条有效表达序列标签,对其行同源性搜索及功能预测等生物信息学分析,最终获得12个可能与sLRIG1蛋白有相互作用的蛋白或多肽,这些蛋白大多与肿瘤相关.结论 通过PDT可获得与sLRIG1蛋白相互结合的蛋白,这些结果为下一步研究sLRIG1的生物功能及其对人脑胶质瘤的作用及机制奠定了基础.

目的 研究术前新辅助化疗对宫颈癌患者手术切除病灶内恶性分子表达的影响.方法 选择2015年3月—2017年6月期间在南方医科大学附属小榄医院妇产科诊断为Ⅰb2和Ⅱa2期宫颈癌患者118例,随机数字表法分为2组各59例,试验组接受新辅助化疗联合手术切除,对照组直接接受手术切除治疗.取手术切除的宫颈癌组织,测定促增殖分子[Ki-67、人细胞周期相关激酶(CCRK)、细胞周期蛋白B1(CyclinB1)、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、Polo样激酶1(Plk1)、生成素(Survivin)]、抑癌基因[多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)、p16基因、真核起始因子4E3(eIF4E3)、N-myc下游调节基因4(NDRG4)、Ras相关结构域因子2A(RASSF2A)、增强子结合蛋白1(Ebp1)]及侵袭基因[β-连环蛋白(β-catenin)、基质金属蛋白酶-8(MMP-8)、解聚素—金属蛋白酶19(ADAM19)、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)]的表达量.结果 试验组患者的宫颈癌病灶内促增殖分子Ki-67、CCRK、CyclinB1、CDK1、Plk1、Survivin和促侵袭基因β-catenin、MMP8、ADAM19的mRNA表达量显著低于对照组(t=22.019、26.009、15.096、21.991、26.727、14.592、14.309、21.111、18.154,P=0.000),抑癌基因LRIG1、p16、eIF4E3、NDRG4、RASSF2A、Ebp1和侵袭基因TIMP1、E-cadherin的mRNA表达量显著高于对照组(t=19.018、18.706、16.997、20.411、25.332、20.446、22.476、20.289,P=0.000).结论 术前新辅助化疗能够抑制宫颈癌病灶内促增殖分子及促侵袭基因的表达,促进抑癌基因及侵袭抑制基因的表达.

1 临床资料患者,女,29岁.因"右侧肢体麻木6 m,记忆力减退4 m,言语欠清2 m"于2019年2月1日入院.现病史:患者缘于6 m前,无明显诱因及原因出现右足麻木,时有头晕,4 m前出现记忆力减退,伴右侧偏身麻木,2 m前出现言语欠清且记忆力明显下降,无法正常工作.发病以来体重无明显变化,二便正常.患者2015 年曾行肺结核手术且有输血史.2018年6月开始接种乙肝疫苗.否认家族中有遗传倾向疾病.神经系统查体:意识清楚,轻度构音障碍,计算力、记忆力下降,右侧肢体浅感觉减退,四肢肌力5-级,右上下肢腱反射(■),双侧 Babinski 征、Chadocki 征( +),双侧指鼻试验、快速轮替试验、跟膝胫试验欠稳准.简易精神状态检查(MMSE)评分26/30 分.辅助检查:血常规、血生化、血沉、C-反应蛋白、HIV抗体、梅毒螺旋体抗体、结核杆菌抗体、维生素B12、叶酸等正常或阴性.脑脊液常规、生化正常,脑脊液免疫学、蛋白学监测分析:白蛋白和免疫球蛋白定量结果正常,IgG生成指数正常,未见寡克隆区带.血清及脑脊液AQP4抗体IgG 阴性、抗 MOG 抗体 IgG 阴性、抗 MBP 抗体IgG阴性.脑脊液及血清其它免疫组化:抗 NMDA-R抗体、抗CASPR2抗体、抗 AMPA1-R 抗体、抗 AMPA2-R 抗体、抗LGI1抗体、抗GABAB-R抗体及抗GAD65抗体均阴性.颈椎MRI(2018 年11 月13 日):C5/6 颈椎间盘突出.颅脑 MR (见图1)显示:双侧放射冠、半卵圆中心、侧脑室周围脑白质及胼胝体可见多发对称性片状略长 T1 略长 T2 信号, T2 FLAIR呈高信号,DWI为高信号,ADC值无明显减低,脑室池扩大,脑沟裂增宽. DTI显示胼胝体纤维丢失(见图2).颅脑增强MRI示异常信号未见明显强化.脑电图:异常脑电图(慢波阵发,前部为主).肌电图检测正常.视觉诱发电位示:双眼全、半(鼻,颞)视野 P100 波形分化差,重复性差, P100潜伏期延长,波幅正常,提示双侧视觉传导径路异常.诊断和治疗:患者住院期间,结合症状与辅助检查,考虑中枢神经系统脱髓鞘性病变,不除外多发性硬化,予甲泼尼龙抗炎、抑制免疫,维生素B1、B12营养周围神经,患者病情未见明显好转于2019年2月17日自动出院. 2019年3月26日患者及其父亲基因检测结果示(见图3、图4):血液样本在CSF1R基因外显子区域存在一处杂合突变:c. 2381T＞C(胸腺嘧啶＞胞嘧啶),导致氨基酸改变p. I794T(异亮氨酸＞苏氨酸),家系验证结果显示此杂合突变来自于其父.