目的:探讨CD147表达对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法:分析UCSC数据库中基因BSG（编码CD147蛋白）在结肠癌中的表达，利用Kaplan-Meier Plotter数据库评估BSG的表达与生存结局之间的关系。应用Western blot检测CD147在HCT116和HCoEPiC细胞中的表达，通过慢病毒转染HCT116细胞下调CD147表达进一步验证其转染效率。应用CCK-8、平板克隆和Hoechst 33342染色实验检测细胞增殖和凋亡能力。Western blot检测各组细胞内MAPK、p-MAPK、C-MYC、BAX和BCL-2的表达；同时应用TIMER 2.0数据库对结肠癌组织中的BSG表达和MAPK1、MYC、BAX、BCL-2进行相关性分析。结果:UCSC数据库观察到CD147在结肠癌组织中表达高于正常组织（P<0.01）；过表达CD147患者的预后不良。Western blot结果显示，与HCoEPiC细胞比较，HCT116细胞中CD147蛋白表达增高（P<0.001）。荧光显微镜下shCD147低表达组与sh-NON空载组细胞的荧光表达丰度均可达90%；Western blot结果显示，与HCT116细胞比较，shCD147组细胞中CD147蛋白表达降低（P<0.001）。下调CD147后，与HCT116组比较，sh-CD147组细胞增殖和细胞集落形成能力降低；Hoechst 33342染色结果显示，与HCT116组相比，shCD147组凋亡的细胞核染色增强，荧光更为明亮（P<0.001）。与HCT116相比，sh-CD147组细胞内p-MAPK、C-MYC和BCL-2表达降低，但BAX表达升高；TIMER 2.0数据库相关性分析，结肠癌组织中BSG表达水平与MAPK1、MYC、BCL-2表达呈现正相关，但与BAX表达呈现负相关（P<0.001）。结论:下调CD147表达降低结肠癌细胞增殖能力，促进凋亡发生，该过程可能与抑制MAPK信号通路有关。

细胞衰老可由应激损伤或生理过程引发，衰老相关分泌表型（SASP）是细胞衰老的重要表现形式。前列腺癌和正常前列腺的SASP因子包括白介素（IL-1、IL-6）、趋化因子（CXCL-8、GRO-a）、基质金属蛋白酶（MMP）家族、TNF-α、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）等。P53、IL-1α、KDM4、ATM/HIF1α、ATM /TRAF6、MTORC1均调控了SASP。内分泌治疗、放疗、化疗均可诱导细胞衰老并发生SASP。SASP因子在前列腺癌细胞中的作用目前仍不完全清楚，尽管许多研究显示SASP因子在前列腺癌细胞存活、生长增殖、血管生成、转移、疾病进展、治疗抵抗等方面发挥了重要作用，但现有结果仍有不一致的地方，SASP因子在免疫反应上也同时具有抑制和促进的作用。并且SASP因子在其他恶性肿瘤中显示出了潜在的抑制肿瘤作用。此外，诱导前列腺癌细胞衰老是潜在的抗癌策略，多种分子均可通过诱导前列腺癌细胞衰老发挥肿瘤抑制作用，但研究显示，SASP因子诱导了前列腺正常上皮细胞系（PNT2）永生化前列腺细胞衰老，但未诱导前列腺癌细胞衰老。鉴于SASP因子在前列腺癌中的作用尚不完全清楚，并且现有的SASP因子靶向治疗临床研究仍然不足，未来应进一步加强SASP因子相关研究。

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)PVT1和miR-106a-5p对骨肉瘤细胞恶性行为的影响及分子机制.方法 将骨肉瘤MG-63细胞分为NC组、PVT1-siRNA组、miRNA抑制剂组以及共转染组.以CCK-8实验检测细胞增殖能力,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况,以DCFH-DA法检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluores-cent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测基因表达,以蛋白印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶 4(glutathione peroxidase 4,GPX4),铁蛋白(ferritin heavy chain,FTH)、血红素氧合酶 1(heme oxygen-ase-1,HO1)和MDM4(murine double minute 4,MDM4)的表达水平.结果 CCK-8实验结果显示敲低ln-cRNA PVT1后MG-63细胞12 h、24 h、48 h、72 h增殖能力降低(P＜0.05),流式细胞仪检测结果显示敲低lncRNA PVT1后MG-63细胞凋亡水平以及ROS水平显著升高(P＜0.05),lncRNA PVT1敲低联合miR-106a-5p抑制剂相对于lncRNA PVT1敲低组结果逆转(P＜0.05).RT-qPCR实验结果显示敲低ln-cRNA PVT1后miR-106a-5p基因表达水平升高并抑制MDM4基因表达(P＜0.05),Western blot结果显示敲低lncRNA PVT1后抑制MDM4、HO1、GPX4和FTH蛋白水平(P＜0.05).结论 在人骨肉瘤MG-63 中,抑制lncRNA PVT1表达可促进miR-106a-5p表达,促进铁死亡和凋亡并抑制增殖.

目的:探讨化瘀解毒汤对多发性骨髓瘤(MM)细胞恶性生物学特性的影响及其分子机制,为抗MM的中医替代治疗提供实验基础与理论依据.方法:采用不同浓度化瘀解毒汤干预骨髓瘤U266细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性改变情况,Annexin V/PI双染流式细胞术检测凋亡情况,Western blot检测凋亡及相关信号通路蛋白表达变化,实时荧光定量PCR技术检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、CXC趋化因子受体4(CXCR4)以及白细胞介素-6(IL-6)mRNA的表达变化.结果:化瘀解毒汤可抑制U266细胞的增殖活性,并诱导其发生凋亡,呈浓度及时间依赖性(r=-0.713,r=-0.827).化瘀解毒汤干预U266细胞48 h后,可下调抗凋亡蛋白Bcl-2、survivin的表达,并上调促凋亡蛋白Bax的表达,同时抑制TLR4/NF-κB信号通路的磷酸化水平.化瘀解毒汤干预U266细胞后,可显著降低HMGB1、IL-6 mRNA的表达,但对CXCR4 mRNA的表达基本无影响.结论:化瘀解毒汤能抑制U266细胞增殖活性并诱发程序性死亡,其分子机制可能与调控各凋亡蛋白表达以及抑制TLR4/NF-κB通路激活并下调HMGB1、IL-6 mRNA的表达有关.

目的 探讨人乳头瘤病毒E6 蛋白(human papillomavirus E6 protein,HPV E6)对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭和迁移的影响及潜在分子机制.方法 基于Illumina Hiseq 4000 转录组测序技术检测 12 例不同程度的宫颈病变组织之间的基因表达特征,筛选与HPV相关的差异基因;利用GO、KEGG Pathway 方法对差异基因进行生物学功能富集分析;Western blotting检测正常宫颈上皮细胞 HCerEpic、宫颈癌细胞 Hela中 Rap、Rap1GAP蛋白表达水平;通过平板克隆实验、Transwell实验和划痕实验检测其增殖、侵袭及迁移能力;通过sh-E6 慢病毒转染下调细胞内HPV E6 表达,分为对照组(Hela细胞)、空载组(sh-NON)和sh-E6 组(低表达HPV E6);下调HPV E6 表达,采用平板克隆和CCK-8 实验分别检测每组细胞增殖能力和细胞活力;Transwell和划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力;Western blotting检测各组细胞中E6、Rap1、Rap1GAP、CyclinD1、E-cadherin、N-cadherin蛋白的表达水平.在sh-E6 组基础上过表达Rap1,Western blot检测细胞中Rap1 通路及相关蛋白的表达水平;平板克隆实验、Transwell实验和划痕实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移能力.结果 测序结果显示,与正常宫颈HPV阴性比较,HPV阳性的正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中差异上调表达的基因分别有 340、864 和 1036 个;3 个数据集寻找共有差异基因共 24 个.GO|KEGG 富集分析 24 个差异表达基因主要富集在Rap1 相关信号通路.与HCerEpic细胞相比,Hela细胞内Rap1 表达升高,Rap1GAP表达降低(P<0.01);其细胞的增殖、侵袭和迁移能力增强(P<0.01);下调HPV E6 表达后,与Hela组比较,sh-E6 组细胞的增殖、细胞集落形成、侵袭和迁移能力降低(P<0.001);Western blotting表明,与Hela组比较,sh-E6 组细胞内Rap1、CyclinD1、N-cadherin蛋白表达降低,Rap1GAP和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.001).与sh-E6 组相比,过表达Rap1 组(sh-E6/OE Rap1)细胞内Rap1/Rap1GAP、CyclinD1、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达被恢复(P<0.001),细胞增殖、侵袭迁移能力被恢复(P<0.01).结论 在宫颈癌发展过程中,HPV E6 通过激活Rap1 信号通路促进宫颈癌细胞增殖、侵袭及迁移.

目的 探究微小RNA-135b(miR-135b)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响及其分子机制.方法 用简单随机法将SH-SY5Y细胞分为miR-135b模拟物(mimics)组和miR-135b抑制物(inhibitor)组,以及阴性对照NC mimics组和NC inhibitor组并转染,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测各组细胞转染效果,细胞划痕实验、细胞活力检测(CCK-8)、细胞侵袭实验(Transwell?)检测细胞迁移、增殖和侵袭的生物学功能.生物信息学软件预测miR-135b的下游靶基因,双荧光素酶报告实验加以验证.免疫印迹法(Western blot)检测各组叉头蛋白N3(FOXN3)和磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路相关蛋白的表达情况.组间比较用t检验,多组比较用单因素方差分析.结果 miR-135b mimics组的细胞迁移、增殖和侵袭能力高于 NC mimics 组[(28.47±1.10)％比(15.04±1.38)％,t=10.70,P＜0.01;1.97±0.11 比1.47±0.10,t=5.79,P＜0.05;265.00±21.93 比 204.56±29.54,t=2.85,P＜0.05];miR-135b inhibitor组的细胞迁移、增殖和侵袭能力低于NC inhibitor组[(7.67±1.24)％比(14.06±2.92)％,t=2.80,P＜0.05;1.04±0.08 比 1.49±0.12,t=5.39,P＜0.05;75.89±3.00 比 201.11±19.78,t=10.84,P＜0.01].生物信息学软件预测发现FOXN3是miR-135b的靶基因之一,双荧光素酶报告基因实验证实.Western blot示miR-135b mimics组的FOXN3表达低于NC mimics组(0.35±0.15 比 0.82±0.07,t=4.96,P＜0.01),PI3K、p-Akt/Akt 表达高于 NC mimics 组(1.50±0.18 比 0.85±0.05,t=5.31,P＜0.01;1.19±0.08 比 0.89±0.02,t=5.53,P＜0.01);miR-135b inhibitor 组的 FOXN3 表达高于 NC inhibitor 组(1.97±0.09 比 0.75±0.10,t=2.78,P＜0.05),PI3K、p-Akt/Akt 表达低于 NC inhibitor组(0.77±0.11 比 1.03±0.07,t=4.58,P＜0.05;0.64±0.01比 0.82±0.07,t=4.43,P＜0.05).结论 miR-135b 可能通过靶向结合 FOXN3 激活 PI3K/Akt 信号通路促进人神经母细胞瘤细胞增殖.

目的:运用网络药理学及分子对接技术探究升陷汤干预肺癌的活性成分、作用靶点及可能作用机制,并通过体外试验进行初步验证.方法:通过TCMSP数据库与文献筛选升陷汤的化合物,运用Gene-Cards、OMIM和Drugbank数据库获取肺癌相关靶点.使用Cytoscape构建"升陷汤-活性成分-潜在作用靶点"网络,拓扑分析获得关键化合物.利用STRING构建升陷汤-肺癌靶点PPI网络,MCODE cluster识别升陷汤的核心靶点.Metascape对核心靶点进行GO功能分析和KEGG通路富集分析.Autodock进行分子对接验证.开展细胞试验测定升陷汤含药血清对A549 细胞增殖、侵袭和凋亡的影响,Western blot、qRT-PCR检测关键通路蛋白和基因的表达.结果:确定了升陷汤活性成分76 种,与肺癌关联靶点142 个,主要活性成分为槲皮素、山奈酚、豆甾醇、木犀草素和异鼠李素.PPI确定了AKT1、IL-6、VEGFA、JUN和IL-1β等 20 个核心靶标.GO和KEGG通路富集分析提示,升陷汤抗肺癌的机制涉及细胞凋亡、细胞增殖、细胞周期、DNA转录、PI3K-Akt、NF-κB和VEGF信号通路等.分子对接结果表明,这些化合物与AKT1 之间具有很强的结合力和稳定性.体外试验结果表明,升陷汤能有效抑制肺癌A549 细胞的增殖、侵袭水平,并促进其凋亡.RT-qPCR结果显示,与空白对照组比较,升陷汤含药血清高、中、低剂量组均能显著下调PI3K,AKT mRNA的表达(P<0.01),Western blot结果显示,升陷汤含药血清高剂量组能显著下调A549 细胞p-PI3K、p-AKT蛋白的表达水平(P<0.01).结论:升陷汤可能通过调控PI3K/AKT信号通路,有效抑制肺癌细胞的增殖、侵袭,促进其凋亡,发挥抗肺癌作用,为后续效用机制验证及临床应用提供参考.

根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)具有很强的多系分化潜能,其中成骨分化可以应用于骨组织再生,为口腔颌骨缺损治疗提供新思路.成骨分化是个复杂的网络调控过程,诸如各种细胞因子、表观遗传物质、各种信号分子和信号通路等内源性物质均可产生不同程度的影响.这些因素相互作用可以促进SCAP的增殖、迁移和成骨分化,但其在SCAP成骨分化的不同进程中的具体机制和内在联系各不相同.对近年来有关促进SCAP成骨分化的各种因素及其可能的调控机制研究文献进行综述,以期为其进一步的应用研究提供新信息.

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌(Pg)的毒力因子RgpB在食管鳞癌化疗耐药中的作用机制.方法 采用免疫沉淀-质谱联用技术筛选与Pg的毒力因子RgpB互作的自噬调节因子;运用免疫共沉淀实验探索RgpB和自噬调节因子TBC1D5之间的相互作用;采用蛋白免疫印迹法测定Pg感染对食管癌细胞膜受体分子Cx43表达的影响;使用细胞免疫荧光检测Lamp1、Cx43与TBC1D5的关系;利用自噬双荧光观察Pg感染对自噬小体与溶酶体融合的影响;使用平板克隆及CCK-8法检测Pg感染及Cx43抑制剂在使用化疗药后对食管癌细胞系增殖作用的影响.结果 免疫沉淀-质谱联用技术筛选出与RgpB互作的自噬调节因子TBC1D5;免疫共沉淀结果显示,Pg分泌的毒力因子 RgpB可与自噬调节因子TBC1D5直接结合并相互作用;蛋白免疫印迹法结果显示,感染Pg后食管癌细胞膜Cx43表达量高于未感染组(P<0.05);细胞免疫荧光结果显示,在感染Pg后,Cx43在细胞膜表面的表达量增加(P<0.05);stubRFP-sensGFP-LC3自噬双荧光结果显示,在Pg感染时,自噬体与溶酶体融合受到阻断;平板克隆及CCK-8法结果显示,使用化疗药后,Cx43抑制剂能够逆转Pg感染对食管癌细胞系的促进作用.结论 Pg入侵食管癌,其毒力因子RgpB阻碍自噬小体与溶酶体融合,从而使膜受体分子Cx43免受溶酶体降解,导致食管癌化疗耐药.

肾移植是目前终末期肾脏病最有效的治疗方案,但排斥反应是肾移植术后面临的最大挑战,也是导致移植肾失功的重要原因.目前,临床评估移植肾功能常规的免疫监测手段主要依赖于血肌酐检测和移植肾穿刺活检.但血肌酐检测不能及时准确地反映免疫排斥状态,而移植肾穿刺活检则具有创伤性,不适合长期应用.因此,临床亟需寻找一些操作简单且足够准确的免疫监测标志物,以便准确地识别肾移植术后排斥反应并指导临床治疗.细胞因子是一类能在细胞间传递信息,具有免疫调节和效应功能的低相对分子质量蛋白质或小分子多肽,是由活化的免疫细胞及某些基质细胞表达并分泌的活性物质,其主要生物学功能是介导和调节免疫应答及炎症反应.其中,与肾移植免疫排斥反应发生密切相关的细胞因子有IL-10/TNF-α、IL-33、IL-34、IL-6等.在这些细胞因子中,有些能够增强免疫应答,促进排斥反应发生;有些则能够抑制免疫细胞活化和增殖,维持免疫耐受.因此,这些细胞因子有望成为肾移植术后免疫监测的潜在生物标志物.