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乳杆菌源性外囊泡对LPS诱导小胶质细胞活化的影响及蛋白质组学分析
编辑人员丨1天前
目的:评价乳杆菌源性细胞外囊泡(Lac-EVs)对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞活化的影响及蛋白质组学分析。方法:取生长状态较好的小鼠BV2小胶质细胞,采用随机数字表法分为3组( n=12):对照组(C组)、LPS组(L组)和LPS+Lac-EVs组(L+E组)。C组正常培养;L组LPS(终浓度1 μg/ml)孵育24 h;L+E组于LPS处理后24 h加入Lac-EVs(终浓度2.5 μg/ml)孵育24 h。随后采用免疫荧光染色法检测CD86和CD206的表达。取L组和L+E组细胞沉淀,采用蛋白质组学方法筛选两组差异表达蛋白。对鉴定得到的差异表达蛋白进行生物信息学分析并采用RT-qPCR和Western blot法对载脂蛋白1(Apoa1)和G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2(Git2)两个差异表达蛋白进行验证。 结果:与C组相比,L组CD86表达上调,CD206表达下调( P<0.05);与L组相比,L+E组CD86表达下调,CD206表达上调( P<0.05)。采用蛋白质组学法筛选出125个差异表达蛋白(FC=2.0, P<0.05),其中66个蛋白表达上调,59个蛋白表达下调,其中Apoa1和Git2表达上调并且排名较前。GO分析结果表明,这些差异表达蛋白主要参与内皮细胞增殖、SDNA损伤检查以及脂蛋白运输等生物过程。KEGG分析结果表明,PPAR信号通路、内吞作用、代谢途径、MAPK信号通路等存在差异。Western blot法和RT-qPCR法测定上述差异蛋白的表达趋势与蛋白质组学结果一致。 结论:Lac-EVs可抑制LPS诱导小胶质细胞向M1型极化,其机制可能与上调的差异表达蛋白Apoa1和Git2有关。
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编辑人员丨1天前
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脂多糖诱导Toll样受体4对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块内质网应激的影响
编辑人员丨1天前
目的:通过观察脂多糖(LPS)诱导的Toll样受体4(TLR4)对载脂蛋白E基因敲除(ApoE -/-)小鼠动脉粥样硬化斑块内质网应激通路蛋白表达水平的影响,探讨内质网应激对小鼠动脉粥样硬化斑块稳定性的影响。 方法:2015年10月至2016年2月选择ApoE -/-小鼠24只,高脂喂养10周后数字抽签随机分为对照组、LPS组、TLR4的特异性抑制剂TAK(TAK组),各8只。干预10周后取眼球血检测总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)。处死小鼠留取颈动脉和主动脉标本。免疫组化法检测颈动脉斑块巨噬细胞(MOMA-2)、平滑肌肌动蛋白(α-actin)、TLR4、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNFα)及κ基因结合核因子(NFκB)的表达。免疫印迹法检测PKR样真核起始因子2α激酶(PERK)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、糖调节蛋白78(GRP78)的水平。 结果:LPS组小鼠与对照组和TAK组小鼠比较,TC(25.0±2.3)mmol/L比(20.2±1.6)mmol/L、(20.8±2.6)mmol/L、TG(1.3±0.1)mmol/L比(1.3±0.1)mmol/L、(1.0±0.1)mmol/L、ox-LDL(17.4±1.3)mmol/L比(15.8±1.6)mmol/L、(12.1±1.1)mmol/L水平升高( P<0.05);斑块形态学及病理学比较,LPS组小鼠动脉粥样硬化斑块范围大,巨噬细胞含量增多( P<0.05),平滑肌细胞含量减少( P<0.05),斑块TLR4、IL-1β、IL-6、TNFα及NFκB的表达水平较其他两组增加( P<0.05);PERK、CHOP、GRP78的表达水平增加( P<0.05)。与对照组比较,TAK组PERK、CHOP、GRP78的表达水平减少( P<0.05)。LPS组TLR4,质网应激通路蛋白PERK、CHOP、GRP78的表达水平增加。 结论:LPS诱导的TLR4可上调内质网应激通路蛋白的表达,且引起内质网应激下游炎性细胞因子分泌增加,加重脂质代谢紊乱,增加动脉硬化斑块的不稳定性。
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编辑人员丨1天前
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沉默信息调节因子1对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞lncRNA表达谱的影响
编辑人员丨1天前
目的:探讨沉默信息调节因子1(Sirt1)对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞长链非编码RNA(lncRNA)表达谱的影响。方法:选取野生型C57BL/6雄性小鼠9只(野生型组)和髓系特异性敲除型小鼠9只(敲除型组),分离腹腔巨噬细胞,1 μg/ml的LPS处理细胞,提取总RNA并进行质量检测,合格后进行测序实验,以差异倍数(野生型组/敲除型组)≥2且 P≤0.05为纳入标准,检测野生型组和敲除型组中lncRNA差异表达谱,并对差异lncRNA进行基因本体(GO)分析和信号通路分析,构建共表达网络图,从而了解lncRNA参与的生物学功能。 结果:两组比较,差异表达的lncRNA基因共445个,其中185个基因表达上调,260个基因表达下调。差异表达的mRNA基因共200个,其中113个基因表达上升和87个基因表达下降。通过GO分析和信号通路分析发现差异表达的lncRNA基因及其共表达的mRNA基因主要富集于影响巨噬细胞的炎症反应,巨噬细胞的渗漏,细胞的代谢等生物过程。结论:Sirt1敲除之后,LPS诱导巨噬细胞中lncRNA表达谱发生明显变化,与巨噬细胞功能的改变密切相关。
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编辑人员丨1天前
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续断提取物对骨质疏松性大鼠信号通路作用的研究进展
编辑人员丨2023/9/16
骨质疏松症(osteoporosis,OP)是骨吸收大于骨形成的骨代谢疾病,随着全球老龄化加重,严重威胁人类健康安全.续断作为传统补肾中药在防治OP方面具有广阔潜力,有关研究表明续断通过多靶点、多途径调控相关信号通路防治OP.最新药理学研究证明续断提取物木通皂苷D等成分可通过调控有关信号通路和促炎因子干预碱性磷酸酶、骨保护蛋白、骨钙素等蛋白因子表达,作用于成骨细胞、破骨细胞以及骨髓间充质干细胞有效防治OP.通过检索续断提取物防治OP的基础研究发现,续断提取物木通皂苷D、熊果酸、多糖类可以通过Wnt/β-catenin、MAPK、PI3K/AKT、BMP-Smads信号通路促骨形成,通过OPG/RANKL/RANK、雌激素信号通路抑制骨吸收防治OP.笔者就续断提取物调控不同信号通路,促进成骨细胞增殖,抑制破骨细胞分化,诱导骨髓间充质干细胞定向分化作一综述,为今后中医药防治OP的基础研究提供新思路.
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编辑人员丨2023/9/16
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DCN、HtrA1及VEGFR-2在子痫前期患者血清及胎盘组织中的表达及其意义
编辑人员丨2023/8/6
[目的]探讨核心蛋白多糖(DCN)、丝氨酸蛋白酶(HtrA1)及血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2)在子痫前期孕妇血清、胎盘组织中的表达及其意义.[方法]选择同期住院的正常对照组孕妇25例,轻度子痫前期孕妇25例,重度子痫前期孕妇25例,采用酶联免疫吸附法(ELISA)及免疫组化SP法检测DCN、HtrA1及VEGFR-2在血清中的浓度及胎盘组织中的表达情况并比较.[结果]正常对照组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组血清中DCN水平、HtrA1水平、VEGFR-2水平均随着病情的加重依次增高(P<0.05),且组间比较差异有统计学意义(P<0.05).DCN、HtrA1、VEGFR-2在正常对照组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组胎盘组织中的表达也依次增高,差异有统计学意义(H=25.029,P=0.000;H=24.815,P=0.000;H=24.515,P=0.000);且表达强度与疾病程度呈正相关(r =0.517,P=0.000;r =0.511,P=0.000;r =0.513,P=0.000).[结论]DCN、HtrA1及VEGFR-2在子痫前期患者血清及胎盘组织中的表达随病情加重显著增强,其可能共同参与子痫前期的发病机制.
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编辑人员丨2023/8/6
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半胱氨酰白三烯受体对小鼠小胶质细胞吞噬功能的调节作用
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究半胱氨酰白三烯(CysLT)受体(CysLT1 R和CysLT2 R)对小鼠BV2小胶质细胞吞噬功能的调节作用.方法:以经典炎症激活剂脂多糖和CysLT受体激动剂LTD4处理BV2细胞,采用免疫荧光计数法和流式细胞仪检测BV2细胞吞噬功能,免疫荧光共染法观察BV2细胞中CysLT1 R和CysLT2 R表达分布.结果:脂多糖和LTD4均能增强BV2细胞吞噬功能,而CysLT1受体选择性拮抗剂孟鲁司特和CysLT2受体选择性拮抗剂HAMI 3379均能抑制脂多糖和LTD4诱导的BV2细胞吞噬功能增强;脂多糖和LTD4激活BV2细胞后可引起CysLT1 R和CysLT2 R在细胞内分布变化,两种亚型的受体分布变化趋势基本一致,且存在共表达.结论:CysLT1 R和CysLT2 R均可以调节BV2细胞的吞噬功能,且两者具有协同性.
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编辑人员丨2023/8/6
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脂多糖通过NF-κB信号途径上调大鼠腹膜间皮细胞表达IP-10
编辑人员丨2023/8/6
目的 观察脂多糖作用下大鼠腹膜间皮细胞表达干扰素诱导蛋白(IP)-10的情况及核因子(NF) κB信号通路在其中的作用.方法 分离及培养大鼠腹膜间皮细胞.于脂多糖不同浓度(0、10、100、1 000、10 000 ng/ml)作用3h及脂多糖(100 ng/ml)作用不同时间点(0、1、3、6、12、24、48 h)收集细胞;脂多糖(100 ng/ml)或BAY 11-7085(一种IκBα的磷酸化抑制剂)不同浓度(5μmol/L)预处理2h加脂多糖,作用3h后收集细胞;采用RT-PCR方法检测IP-10 mRNA表达.采用蛋白印迹检测NF-κB p65 (p65)蛋白表达,采用ELISA方法测定IP-10蛋白的表达.结果 与常规培养基对照组相比,10 ng/ml脂多糖组IP-10 mRNA表达显著升高(P<0.05),1 000 ng/ml脂多糖组最高,但与10 ng/ml脂多糖组相比,差异无统计学意义(P>0.05).脂多糖(100 ng/ml)作用下,IP-10 mRNA表达从1h开始升高,3h达到高峰,之后逐渐降低.常规培养的大鼠腹膜间皮细胞结构性表达p-p65蛋白;加入脂多糖后,p-p65蛋白表达显著增加,其中30 min至1h表达最强,之后逐渐降低,至2h仍显著高于常规培养组(P<0.05).加入5μmol/L BAY11-7085后,脂多糖诱导的IP-10基因和蛋白表达显著降低(P<0.05).结论 脂多糖以时间依赖和浓度依赖模式上调IP-10的表达.NF-κB信号途径参与调节脂多糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞IP-10的表达.
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编辑人员丨2023/8/6
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补阴中药治疗糖尿病及其并发症物质基础及机制研究新思路
编辑人员丨2023/8/5
糖尿病在临床较为常见,患者血糖偏高,常伴有并发症,是一种严重慢性代谢性疾病.在医药界,中医对糖尿病的认识和研究最早.中医研究认为,糖尿病的临床特点与“消渴”基本一致,同时也认为“阴虚燥热”是消渴病的主要病机.基于上述认识,补阴中药被中医临床广泛用于治疗消渴病或糖尿病.目前用于糖尿病治疗的常见补阴中药有石斛、百合、麦冬、黄精等,上述药材中治疗糖尿病的有效成/组分以多糖类物质多见,可以治疗糖尿病的并发症包括血管病变、肾病变、视网膜病变、周围神经病变等.但从文献报道来看,除个别补阴中药防治糖尿病的有效成分相对明确外,大部分补阴中药治疗糖尿病还停留在水、醇等提取物或多糖等粗糙混合物层面.由于降糖药效物质基础、量效关系、机制靶点等尚不完全清楚,使补阴中药在临床应用中受到一定限制,也使其深入研究面临一定困难.该文通过对补阴中药治疗糖尿病及其并发症相关文献资料进行归纳,分析存在问题,提出基于色谱技术和代谢组学为主的研究思路与方法,以期为补阴中药的应用开发提供参考.
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编辑人员丨2023/8/5
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基于UHPLC-QTOF/MS代谢组学技术比较分析半枫荷不同组织化学成分
编辑人员丨2023/8/5
本文以半枫荷(Semiliquidambar cathayensis)不同组织为研究对象,采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF/MS)代谢组学手段检测其化学成分种类,通过主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等方法找出各组织间的差异代谢物,依据精确分子质量测定和相关文献信息对差异代谢物进行鉴定.结果 显示:半枫荷叶片、茎和根中共检测到169个代谢物,结合PCA法综合判别出38个显著差异代谢物.差异代谢物在不同组织中表达模式不同:叶片中表达上调的差异代谢物较多,其次是根,再次是茎.不同组织中主要共有差异代谢物有5个,分别为柠檬酸、山奈酚3-O-桑布双糖苷、3-β-羟基齐墩果酸丁二酸单酯、1-O-乙酰基-α-麦芽糖、胞苷;叶片与根、茎相比主要差异代谢物有17个,主要为黄酮类、萜类和多糖类化合物;茎与叶片、根相比主要差异代谢物有4个,包括毛蕊花糖苷和β-熊果苷;根与叶片、茎相比主要差异代谢物有4个,包括香草酸、山茶苷B和三癸酸甘油酯.半枫荷不同组织中差异萜类化合物主要为三萜化合物,齐墩果酸等三萜化合物是区分半枫荷不同组织的重要差异性物质;不同种类的黄酮类化合物在半枫荷不同组织分布情况也不相同,大部分差异黄酮类化合物在叶片中富集明显.
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编辑人员丨2023/8/5
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多糖类组分对大鼠肝微粒体酶CYP1A2的体外活性抑制作用
编辑人员丨2023/8/5
目的 建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)测定大鼠肝微粒体中对乙酰氨基酚含量,研究人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对大鼠肝微粒体细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)1A2的体外抑制作用.方法 以格列齐特为内标,建立LC-MS/MS测定大鼠肝微粒体中对乙酰氨基酚含量方法.以α-萘黄酮为阳性对照药,分别将系列多糖溶液、CYP1A2酶的特异性探针底物非那西丁及大鼠肝微粒体进行孵育,LC-MS/MS测定代谢产物对乙酰氨基酚的含量,计算半数抑制浓度(IC50),评价人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对大鼠肝微粒体CYP1A2酶的抑制活性.结果 对乙酰氨基酚在10~1000 ng·mL-1内线性良好,精密度试验RSD均<8.24%,提取回收率为92.53%~103.23%,稳定性试验RSD均<10.77%.该试验条件下,在大鼠肝微粒体温孵体系中,人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对CYP1A2的IC50值均>100 μmol·L-1.结论 在正常剂量下,人参多糖、贻贝多糖、黄原胶对CYP1A2酶亚型均无抑制作用,可以与其底物联合用药.
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编辑人员丨2023/8/5
