目的:探讨血红素加氧酶-1（HO-1）对巨噬细胞炎症反应的抑制作用及其机制。方法:体外培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7，取对数生长期细胞用于实验。将RAW264.7细胞分为4组。空白对照组细胞于37 ℃下95%空气、5% CO 2常规培养，不给予任何处理；脂多糖（LPS）模型组在培养基中加入1 mg/L的LPS制备LPS攻击模型；HO-1诱导组在培养基中加入30 μmol/L的HO-1诱导剂血红素孵育1 h后，再加入1 mg/L的LPS孵育；HO-1抑制组在培养基中加入5 μmol/L的HO-1特异性拮抗剂锌原卟啉Ⅸ（ZnPPⅨ）孵育0.5 h后，再加入1 mg/L的LPS孵育。各组加入LPS孵育48 h后取细胞上清液，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测HO-1、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、硫氧还蛋白相互作用蛋白（TXNIP）、NOD样受体蛋白3（NLRP3）及线粒体自噬标志物微管相关蛋白1轻链3B（LC-3B）的蛋白表达；采用免疫荧光染色法检测活性氧（ROS）的表达。 结果:与空白对照组比较，LPS模型组细胞发生了一定的应激反应，出现线粒体自噬，但部分炎症因子表达受限，与细胞功能受损有关，表现为HO-1、IL-1β、LC-3B、ROS的蛋白表达均明显升高，而TNF-α、TXNIP、NLRP3的蛋白表达均明显降低，说明LPS攻击后细胞受损严重，模型制备成功。与LPS模型组比较，HO-1诱导组HO-1蛋白表达明显增加（HO-1/GAPDH：0.31±0.03比0.22±0.03， P<0.05），TNF-α、IL-1β、TXNIP、NLRP3、LC-3B、ROS蛋白表达均被明显抑制〔TNF-α蛋白（TNF-α/GAPDH）：0.08±0.01比0.45±0.05，IL-1β蛋白（IL-1β/GAPDH）：0.50±0.01比0.82±0.03，TXNIP蛋白（TXNIP/GAPDH）：0.21±0.02比0.28±0.02，NLRP3蛋白（NLRP3/GAPDH）：0.11±0.01比0.17±0.02，LC-3B蛋白（LC-3B/GAPDH）：0.67±0.04比0.92±0.12，ROS（荧光强度）：80.9±12.5比94.1±19.5，均 P<0.05〕，说明诱导HO-1表达可抑制炎症反应和氧化应激，减少线粒体自噬；而拮抗HO-1可促进炎症反应、氧化应激及线粒体自噬，表现为TNF-α、IL-1β蛋白表达被抑制程度较HO-1诱导组明显减轻〔TNF-α蛋白（TNF-α/GAPDH）：0.26±0.02比0.08±0.01，IL-1β蛋白（IL-1β/GAPDH）：0.76±0.01比0.50±0.01，均 P<0.05〕，且TXNIP、NLRP3、LC-3B、ROS蛋白表达均较LPS模型组明显增加〔TXNIP蛋白（TXNIP/GAPDH）：0.43±0.02比0.28±0.02，NLRP3蛋白（NLRP3/GAPDH）：0.24±0.02比0.17±0.02，LC-3B蛋白（LC-3B/GAPDH）：1.12±0.07比0.92±0.12，ROS（荧光强度）：112.0±17.0比94.1±19.5，均 P<0.05〕。 结论:HO-1可通过抑制TXNIP/NLRP3炎症小体活化减少炎症介质释放，从而降低炎症反应。

目的 研究槐耳多糖通过调节索尼克刺猬-Gli家族锌指蛋白1(Shh-Gli1)信号通路对肺癌细胞A549增殖、凋亡和血管生成的影响.方法 将肺癌细胞A549分为对照组(正常培养)及低、中、高剂量实验组(2、5、10 μg·mL-1槐耳多糖).给药24 h后,以噻唑蓝法检测细胞增殖水平,以流式细胞术检测细胞凋亡水平,以比色法检测细胞中胱天蛋白酶3(caspase-3)酶活性,以蛋白质印迹实验检测细胞中血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)、Shh及Gli1蛋白的表达水平.结果 对照组和低、中、高剂量实验组的细胞存活率分别为 100.00％、(73.13±3.86)％、(47.97±6.12)％和(30.73±6.67)％,细胞凋亡率分别为(0.72±0.04)％、(19.21±1.27)％、(29.48±0.92)％和(46.29±2.81)％,细胞中 caspase-3 酶活性分别为 1.00、1.33±0.08、1.71±0.09和2.28±0.14,VEGF蛋白相对表达水平分别为1.17±0.04、0.95±0.08、0.39±0.04 和 0.11±0.03,VEGFR2 蛋白相对表达水平分别为0.99±0.04、0.80±0.03、0.29±0.03 和 0.24±0.03,Gli1 蛋白相对表达水平分别为 1.22±0.04、1.07±0.04、0.60±0.04 和 0.41±0.05.对照组的上述指标与低、中、高剂量实验组相比,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 槐耳多糖可通过调节Shh-Gli1信号通路抑制肺癌细胞的增殖及血管生成,并促进其凋亡.

[目的]探讨铁皮石斛多糖(DOP)对CCl4 诱导肝纤维化(HF)的影响及其作用机制.[方法]将56 只雄性SD 大鼠随机分为七组:正常组(NG)、模型组(MG)、秋水仙碱组(CG,0.1mg/kg)、扶正化瘀组(FG,0.45g/kg)、低剂量DOP 组(LDG,0.05 g/kg)、中剂量DOP 组(MDG,0.1 g/kg)和高剂量DOP 组(HDG,0.2 g/kg),每组8 只.采用皮下注射40%CCl4 橄榄油混合液制备HF 大鼠模型,每3 d 注射1次,共10周.造模第6周结束后,各药物组分别给予秋水仙碱、扶正化瘀和DOP 溶液灌胃处理,NG 和MG 大鼠给予等量0.9%生理盐水处理,每天1次,连续4周.各组大鼠肝组织病理学采用苏木精-伊红(HE)、Masson 染色、天狼星红(Sirius red)染色检测;肝功能和肝纤四项指标采用血液生化法检测;肝组织中α-SMA、Col-I、E-cadherin、ZEB1 基因和蛋白的表达分别采用RT-qPCR 法和Western Blot法检测.[结果]HE、Masson、Sirius red 染色结果显示MG 大鼠肝脏组织出现典型的HF 病理特征,LDG、MDG 和HDG大鼠HF 均出现不同程度改善.肝功能检测结果显示,LDG、MDG、HDG 大鼠的血清AST、TBIL、AKP 水平与MG 相比均显著降低(P＜0.05或＜0.01),血清ALT 水平除LDG 外均显著降低(P＜0.05或＜0.01).肝纤四项指标检测结果显示,LDG、MDG、HDG 大鼠的血清HA、LN、PC-Ⅲ、COL-Ⅳ 含量与MG 比较均明显下降(P＜0.05或＜0.01).基因、蛋白检测结果显示,LDG、MDG、HDG 大鼠肝组织中α-SMA、COL-I、ZEB1 的相对表达量明显降低(P＜0.05或＜0.01),而E-cadherin 的相对表达量升高(P＜0.05或＜0.01).此外,HA、α-SMA、COL-I、ZEB1、E-cadherin 的表达均存在一定的DOP 剂量依赖性.[结论]DOP 可通过抑制大鼠肝组织的上皮-间质转化减轻CCl4 诱导的HF 程度.

目的:探讨槲皮素(QUE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞炎症反应的作用及其机制.方法:将小鼠RAW264.7巨噬细胞分为正常对照组、LPS组和QUE +LPS组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞培养上清液中白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-6水平,流式细胞仪检测FluoZin-3标记细胞内游离锌含量,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中ZIP8 mRNA表达,western blotting法检测ZIP8蛋白表达.结果:与LPS组(1 μg/mL)相比,QUE +LPS组上清液中IL-1β、TNF-α和IL-6含量降低(P＜0.01);与LPS组相比,QUE +LPS组巨噬细胞内游离锌含量降低(P＜0.05),并可抑制LPS诱导的ZIP8表达(P＜0.05).结论:QUE可抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,其作用可能与下调ZIP8表达,抑制锌内流,减少巨噬细胞内游离锌含量有关.

目的:探讨槐耳多糖(HP)调节丝苏氨酸蛋白激酶B(AKT)/糖原合酶激酶-3β(GSK3β)/锌指转录因子(Snail)信号通路对胰腺癌(PC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响.方法:将人胰腺癌SW1990细胞分为:Control组(正常培养)、HP低浓度组(1 μg/mL)、HP中浓度组(5 μg/mL)、HP高浓度组(10 μg/mL)、激活剂组(10 μg/mL HP+10 μmol/L AKT/GSK3β/Snail 通路激活剂 SC79);四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;黏附实验检测细胞黏附能力;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹法(Western blot)方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bel-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及 AKT/GSK3β/Snail 通路蛋白的表达.结果:与control组比较,HP低、中、高浓度组SW1990细胞OD490值、黏附细胞数、划痕愈合率、侵袭数、PCNA、Bcl-2、MMP-2、Vimentin、N-cadherin、p-AKT/AKT、p-GSK3β/GSK3β、Snail 蛋白表达水平降低,细胞凋亡率及Bax、E-cadherin蛋白表达水平升高(P＜0.05);与HP高浓度组比较,激活剂组SW1990细胞 OD490 值、黏附细胞数、划痕愈合率、侵袭数、PCNA、Bcl-2、MMP-2、Vimentin、N-cadherin、p-AKT/AKT、p-GSK3 β/GSK3 β、Snail蛋白表达水平升高,细胞凋亡率及Bax、E-cadherin蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论:HP可能通过抑制AKT/GSK3β/Snail信号通路,抑制SW1990细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,促进凋亡.

目的 观察热毒宁注射液(reduning,RDN)对脂多糖(LPS)诱导小鼠的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)保护作用,探讨其作用是否与血红素加氧酶-1(HO-1)有关.方法 将48只雄性ICR小鼠平均随机分为Control组、RDN组、LPS组、LPS+地塞米松(DEX)组、LPS+RDN组、LPS+RDN+ZnPP(HO-1特异性抑制剂,锌原卟啉)组,每组8只.采用气管内滴注LPS(5mg/kg)诱导ALI;造模后24 h,采集静脉血、取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF),观察各组肺组织病理学改变,测量肺湿/干重比(W/D),BALF中的细胞总数和血清LDH活性、肺组织HO-1活性和HO-1蛋白表达量.结果 与LPS组相比,LPS+RDN组大鼠肺组织损伤较轻,肺W/D、BALF中细胞总数和血清LDH活性显著降低,HO-1的活性和蛋白表达量显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与LPS+RDN组相比,LPS+RDN+ZnPP组大鼠肺W/D、BALF中细胞总数、血清LDH活性显著升高,HO-1的活性和蛋白表达量减低,均差异有统计学意义(P<0.05).结论 RDN对LPS诱导的ALI有保护作用,其保护作用与HO-1表达和活性增加有关.

目的:探究锰、钼、硼三种微量元素对黄芪生长指标、总多糖含量及生理特性的影响.筛选最佳的锰、钼、硼配比及合适的营养液浓度,为黄芪施肥过程中微量元素的施入提供一定的理论依据.方法:本试验采用三因素三水平正交试验设计,在保证其他营养元素用量一致的基础上,调整锰、钼、硼三种元素的用量,以黄芪的生长情况、总多糖含量及生理特性为评价指标.结果:0.48 mg·L-1的锰元素、0.54 mg·L-1L的钼元素和0.81 mg·L-1的钼元素组合条件下,更有利与促进黄芪的生长和物质积累.0.96 mg·L-1的锰元素、0.54 mg·L-1的钼元素和0.27 mg·L-1的钼元素组合条件下,更有利与增加黄芪总多糖的含量.0.48 mg·L-1的锰元素、0.54 mg·L-1的钼元素和0.27 mg·L-1的钼元素组合条件下,更有利黄芪生理指标及抗逆性的增加.结论:锰钼硼合理配施能促进黄芪生长和多糖含量的增加,并增加黄芪的抗逆性.以0.48 mg·L-1的锰元素、0.54 mg·L-1的钼元素和0.27 mg·L-1的钼元素组合条件作为基肥施入,可促进黄芪抗逆性的增加,生长旺盛期以0.96 mg·L-1的锰元素、0.54 mg·L-1的钼元素和0.81 mg·L-1的钼元素配比下进行叶面喷施,更有利与促进黄芪的生长和总多糖含量的增加.

目的 探讨血红素氧合酶-1/一氧化碳(HO-1/CO)通路对脂多糖(LPS)诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)线粒体融合的影响.方法 体外培养大鼠AECⅡ细胞株RLE-6TN,待细胞融合度达到85%时传代培养,并随机分为7组(n=5):空白对照组细胞常规培养;LPS组加入10 mg/L的LPS制备内毒素攻击AECⅡ模型;外源性一氧化碳释放分子-2(CORM-2,体外CO释放剂)+LPS组(CL组)和氯高铁血红素(Hemin,HO-1诱导剂)+LPS组(HL组)分别加入100 μmol/L的CORM-2或20 μmol/L的Hemin预处理1 h,再加入10 mg/L LPS孵育;锌原卟啉-Ⅸ(ZnPP-Ⅸ,HO-1活性抑制剂)+ LPS组(ZL组)加入10 μmol/L的ZnPP-Ⅸ预处理0.5 h,然后加入10 mg/L的LPS孵育;CORM-2+ZnPP-Ⅸ+LPS组(CZL组)和Hemin+ZnPP-Ⅸ+LPS组(HZL组)先分别加入100 μmol/L的CORM-2或20 μmol/L的Hemin预处理1 h,其余处理同ZL组.LPS孵育24 h后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定HO-1、线粒体融合蛋白1和蛋白2(Mfn1、Mfn2)以及视神经萎缩蛋白1(OPA1)的蛋白表达.结果 与空白对照组比较,各处理组细胞上清液中IL-6和TNF-α含量升高,HO-1蛋白表达上调,线粒体融合相关蛋白Mfn1、Mfn2 和OPA1蛋白表达下调.与LPS组比较,给予CORM-2或Hemin预处理后,IL-6、TNF-α含量均明显降低〔IL-6(ng/L): 48.6±3.7、48.4±3.1比58.7±2.5, TNF-α(ng/L): 40.7±5.3、39.4±4.3比51.8±5.1〕,HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1蛋白表达均明显上调(HO-1蛋白:0.873±0.051、0.839±0.061比0.671±0.044,Mfn1蛋白:0.673±0.037、0.654±0.025比0.568±0.021,Mfn2蛋白:0.676±0.044、0.683±0.035比0.571±0.043,OPA1蛋白:0.648±0.031、0.632±0.031比0.554±0.032,均P<0.05);而给予ZnPP-Ⅸ预处理后,IL-6、TNF-α含量及HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1蛋白表达的变化趋势与CORM-2或Hemin预处理组相反,与LPS组比较差异均有统计学意义〔IL-6(ng/L):69.8±5.1比58.7±2.5, TNF-α(ng/L): 61.9±3.3比51.8±5.1,HO-1蛋白:0.545±0.023比0.671±0.044,Mfn1蛋白:0.406±0.051比0.568±0.021,Mfn2蛋白: 0.393±0.051比0.571±0.043,OPA1蛋白:0.372±0.050比0.554±0.032,均P<0.05〕.CL组与HL组间,LPS组、CZL组与HZL组间上述各指标比较差异均无统计学意义.结论 HO-1/CO通路可上调LPS诱导的大鼠AECⅡ细胞线粒体融合蛋白表达,促进线粒体融合,从而减轻细胞炎症反应.

为推广栽培铁皮石斛Dendrobium catenatum'6A2B’、‘7869’、‘966’三个优良新品系,进一步提升药材质量,在2013年2月6日和2013年4月27日2个生长时期,分别采集2年生萌条,测定其中钾、钙、镁、钠、锡、硒、锌、镍、铁、硼、锰、铬、钛、铝、锶、汞、砷、铅、镉、铜等20种矿质元素,研究铁皮石斛中矿质元素的动态积累.结果表明:供试铁皮石斛铅、砷、汞、铬、铜5种重金属元素含量均在规定限度范围内;三个铁皮石斛优良品系间矿质元素差异不显著,生长时期对铁皮石斛矿质元素含量存在显著的影响;钙的含量与多糖含量呈极显著负相关,镁、硼、锰的含量与醇溶性浸出物含量呈显著正相关.

采自西藏日喀则地区的两份野生蘑菇标本及其分离菌株,通过形态学及基于ITS序列的分子系统发育分析鉴定为卵孢侧耳Pleurotus placentodes.该物种在2016年首次报道于中国.人工驯化栽培试验表明卵孢侧耳可以在人工条件下出菇,生长周期80-95d:初步的营养成分分析表明,卵孢侧耳蛋白质、粗多糖、氨基酸含量比香菇、糙皮侧耳(平菇)、金针菇、柱状田头菇(茶树菇)等都高,尤其含有较高的组氨酸和丰富的矿物质,如铁、钙、锌等.卵孢侧耳可作为新的食用菌进行开发利用.