目的 对大花红景天的化学成分进行全面表征分析,为其药效物质基础研究提供参考.方法 采用UPLC-Q-TOF-MS 结合分子网络技术,并与文献报道数据比较,结合质谱裂解特征规律分析,以及分子网络中对已知和未知化合物节点的关联分析,对大花红景天的化学成分进行快速表征.结果 从大花红景天中共鉴定118个化合物,包括有机酸53个,黄酮类33个,醇苷类19个,其他类13个,其中8个化合物为首次在大花红景天中发现.结论 UPLC-Q-TOF-MS 联合分子网络策略能够快速、全面、系统地分析鉴定大花红景天中的化学成分,为今后进一步阐明其药效、质量标准及资源开发利用提供科学依据.

大花红景天作为我国珍贵的藏药材,因其具有抗缺氧、抗衰老、抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳及神经保护等作用,成为新药研究、保健品和化妆品开发的热点植物.为保证其品质,使之在临床上发挥更好的疗效,通过查阅近十年来关于大花红景天质量控制的相关文献,从药材鉴别和含量测定方面对大花红景天的质量控制进行综述,以期为大花红景天质量控制的进一步研究提供参考和依据.

首次采用RAPD分子标记法研究内生真菌接种宿主红景天条件下,前者对后者DNA序列水平遗传性状的影响.结果显示,12条RAPD引物对ZPRs-R-11接种的红景天扩增出87条条带,多态性百分比为83.91％.聚类分析结果表明,内生真菌ZPRs-R-11接种的红景天可分为三个遗传分支,共培养时间越长,纽培苗与内生真菌之间的遗传相似系数越大;红景天接种后,其基因流Nm为0.209 8研究结果为内生真菌与宿主大花红景天共生条件下内生真菌对大花红景天的品质改良和研究提供参考.

目的:建立UPLC法同时测定大花红景天中没食子酸、红景天苷、酪醇、没食子酸乙酯、对香豆酸5种成分的含量,运用主成分分析法对38批不同来源的商品药材和自采药材进行对比分析.方法:采用ACQUITY UP-LC@HSS T3色谱柱(150 mm×2.1 mm,1.8 μm);以乙腈-0.2％磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速:0.2 mL/min;柱温:40℃;进样量:2μL;检测波长:没食子酸、红景天苷、酪醇、没食子酸乙酯为275 nm,对香豆酸为308 nm.结果:各指标成分之间分离度良好,在选定的浓度范围内线性关系良好(r≥0.9995),平均加样回收率(n=6)为96.54％～102.15％,RSD为1.95％～ 2.95％,表明该法快速、准确,具有良好的重复性和稳定性.主成分分析结果表明,商品药材与自采药材中上述几种成分存在一定的差异.结论:建立的UPLC检测方法可用于快速测定大花红景天中5种成分的含量,能够为红景天药材标准的提高和完善提供依据.

目的 探讨超声波法及微波法提取大花红景天有效成分的应用价值.方法 通过正交实验探讨微波法的最佳实验条件,并在微波帮助提取和超声波提取方法的最佳提取条件下比较微波法和超声波的提取率和重复性.结果 正交试验结果显示,微波法的最佳实验条件为溶剂选取30％乙醇,溶剂倍量30,加热时间1min,控制压力0.10 mPa.在微波法的最佳实验条件下,微波法提取率为6.245％,明显高于超声波法的提取率5.321％(P＜0.05),且微波法提取结果的平行性好于超声法.结论 微波法提取大花红景天有效成分不仅所需时间短,而且提取率比超声波法高.

目的 建立基于核磁共振技术1H-NMR指纹图谱-化学模式识别的四裂红景天和大花红景天的品种分类和鉴别方法.方法 采用高分辨(600 MHz)的核磁共振(NMR)指纹图谱技术,测定四裂红景天和大花红景天的全成分信息1H-NMR指纹图谱,结合相似性分析、层次聚类分析、主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)进行化学模式识别分析.结果 1H-NMR指纹图谱-化学模式识别方法是一种有效的区分、鉴别四裂红景天和大花红景天的方法.四裂红景天和大花红景天的1H-NMR指纹图谱差异性较明显,能够真实、全面地反映红景天中的特征性成分和内在品质,四裂红景天和大花红景天主要差异成分为萜类、黄酮类,尤其萜类成分大花红天素是鉴别四裂红景天和大花红景天的特征性成分,可作为四裂红景天和大花红景天的分类和鉴别指标.结论 1H-NMR指纹图谱-化学模式识别方法是一种有效的红景天品种分类和鉴别方法,为红景天属药用植物的品种鉴别和品质评价奠定基础.

目的 评价大花红景天不同提取成分对受照射BALB/c小鼠体重和外周血象的影响.方法 选取6～8周的BALB/C小鼠60只,随机分为正常组、对照组、乙醇提取物组、总黄酮组、乙醇提取其余成分组.采用3.5 Gy 60Coγ 射线全身单次照射,复制小鼠电离辐射损伤模型,照射后连续7 d灌胃给药.照射后1、4、7、10、13和16 d,观察大花红景天不同提取成分对小鼠体重、外周血象的影响.结果 与对照组比较,乙醇提取物、总黄酮、乙醇提取其余成分可有效提高受照射小鼠的外周血白细胞数、红细胞数、血红蛋白含量和血小板数(P<0.05).乙醇提取物和乙醇提取其余成分提高受照射小鼠外周血红细胞数、血红蛋白含量的作用低于总黄酮组(P<0.05).大花红景天不同提取成分对受照射小鼠的体重无明显影响(P>0.05).结论 总黄酮可能是大花红景天主要抗辐射活性成分.

目的:建立同时测定大花红景天、狭叶红景天和长鞭红景天药材中没食子酸、红景天苷、酪醇、咖啡酸、对香豆酸含量的方法,并比较3种红景天药材中5种化学成分的含量差异.方法:采用高效液相色谱法测定含量,色谱柱为WondaSil C18,流动相为乙腈-0.3％磷酸溶液(梯度洗脱),检测波长为275 nm,柱温为25℃,流速为1.0 mL/min,进样量为10μL;采用GraphPad Prism 5.0软件对含量测定结果进行单因素方差分析和Tukey's多重比较.结果:没食子酸、红景天苷、酪醇、咖啡酸、对香豆酸的检测进样量线性范围分别为0.02048～0.6144μg(r=0.9997)、0.118～3.54μg(r=0.9995)、0.01084～0.3252μg(r=0.9997)、0.00848～0.2544μg(r=0.9995)、0.0041～0.123μg(r=0.9995);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于2％;加样回收率分别为99.62％～104.92％(RSD=1.68％,n=9)、96.55％～100.69％(RSD=1.67％,n=9)、98.91％～103.39％(RSD=1.48％,n=9)、100.93％～104.98％(RSD=1.37％,n=9)、97.71％～103.89％(RSD=1.99％,n=9).大花红景天中没食子酸、红景天苷、酪醇和咖啡酸含量均显著高于长鞭红景天,大花红景天中的红景天苷、咖啡酸含量均显著高于狭叶红景天,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01或P<0.001).结论:该方法简便可行、结果准确,可用于同时测定大花红景天、狭叶红景天和长鞭红景天药材中没食子酸、红景天苷、酪醇、咖啡酸、对香豆酸的含量.3种常见红景天药材中的化学成分含量存在较大差异,大花红景天中红景天苷的含量最高.

讨论三种不同的双水相提取红景天苷,筛选出乙醇-K2 HPO4为适合的双水相体系.以西藏野生大花红景天为原料,研究超声波辅助乙醇-K2HPO4双水相提取红景天苷的提取条件.以单因素试验为基础,根据Box-Behnken试验设计原理和响应面法,分析乙醇体积分数、液固比、K2 HPO4浓度、超声温度、超声时间5个因素及两因素交互作用对红景天苷提取率的影响,确定红景天苷提取的最佳工艺参数.结果表明:在乙醇体积分数51％,液固比6 mL/g,K2HPO4浓度0.16 g/mL,超声温度57℃,超声时间45 min时,红景天苷提取率最大,为45.4％.与预测值45.1％基本相符,说明回归模型有效.与超声波辅助乙醇法相比,红景天苷提取率有大幅提高.

药用植物发育和代谢受到多种因素的影响,而内生真菌对植物的影响是近年来才得以重视并逐步成为热点.为探索内生真菌Phialocephala fortinii对大花红景天基因及代谢途径的影响,本实验通过RNA转录组测序筛选差异表达基因;并用Real-time PCR对基因表达进行验证,利用2-△△Ct的方法分析脂代谢、信号转导和环境适应性等重要代谢途径差异基因的相对表达量.结果表明,验证结果与测序结果一致,内生真菌P.fortinii能够促进大花红景天脂代谢途径中的差异基因表达量;它对信号转导途径中相关基因表达的影响不同,但控制Notch信号通路途径的基因表达量显著提高,为对照组的34倍;对适应性代谢途径差异基因表达上调,进而促进红景天环境适应能力.研究结果旨在为揭示内生真菌与红景天的互作机制、红景天道地性形成原因、内生真菌功能的开发等提供分子基础数据.