研究乳源性外泌体与脂质体进行膜融合得到的杂化外泌体装载青藤碱(sinomenine,SIN)后对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的治疗效果.通过蔗糖密度梯度离心法从鲜牛乳中提取外泌体,采用乳化蒸发-低温固化法制备脂质体,共孵育法进行膜融合后对杂化外泌体进行表征:透射电镜检测形貌,纳米粒度电位仪检测粒径与电位,蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测膜融合前后外泌体膜表面特征蛋白CD63和TSG101的表达.超声法装载青藤碱后,酶标仪检测其载药量与包封率.胶原抗体诱导法建立CIA大鼠模型,药效实验设对照组、模型组、SIN组、SIN-脂质体组、SIN-乳外泌体组、SIN-杂化外泌体组及阳性药(地塞米松)组.记录给药期间大鼠体质量变化,以足肿胀度、免疫器官指数、关节炎指数、微循环指标变化、滑膜组织病理学检查、血清炎症因子水平变化为指标进行药效学研究.透射电镜结果显示,杂化外泌体与乳外泌体外观均呈茶托状,共孵育后外泌体粒径由(97.92±3.42)nm 增长到(132.70±4.07)nm,Zeta 电位由(-2.01±0.33)mV 变为(-17.90±2.13)mV,WB结果显示CD63与TSG101蛋白在乳外泌体及杂化外泌体中均正常表达.酶标仪测定乳外泌体包封率31.64％±2.48％、载药量2.35％±0.52％,杂化外泌体包封率48.21％±3.12％、载药量3.17％±0.36％.药效学结果显示,与模型组相比,各给药组一般情况及足肿胀度、关节炎指数及免疫器官指数均得到显著改善(P＜0.05,P＜0.01),微血管综合评分及血管阻力显著下降(P＜0.05,P＜0.01),血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)炎症因子水平显著降低(P＜0.01),滑膜组织的病变得到一定程度的改善.同时与SIN组、SIN-脂质体组及SIN-乳外泌体组相比,SIN-杂化外泌体组具备更平稳持久的药效.该研究将乳源性外泌体与脂质体共孵育得到的杂化外泌体成功改善了外泌体载药量小与脂质体生物相容性差等问题,负载青藤碱的杂化外泌体对CIA大鼠有着良好的疗效,可有效解决青风藤等疗效佳但生物半衰期短的问题,为传统中药的新发展及类风湿性关节炎等疾病的治疗提供了新思路.

研究祖师麻及其炮制品对SD大鼠Ⅱ型胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)中辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)分化的影响.按体质量将64只SD大鼠随机分为正常组,模型组,祖师麻炙品低、高剂量组,生品低、高剂量组,祖师麻甲素组,雷公藤多苷组.除正常组外,CIA模型在第1次免疫后第7天进行二免,并在二免7 d后灌胃28 d.取材后,采用苏木素-伊红(HE)染色观察CIA大鼠关节滑膜炎症的情况;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中转化生长因子-β(TGF-β)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10水平变化;实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测关节滑膜中分化簇80(B7-1)、分化簇86(B7-2)、分化簇28(CD28)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)mRNA和蛋白表达;流式细胞术用于检测大鼠关节滑膜中Th17和Treg细胞的比例.结果显示,与正常组相比,模型组大鼠的关节滑膜炎症明显加剧,关节炎指数评分明显上升,免疫器官指数上升(P＜0.01);与模型组相比,各给药组均能不同程度地改善大鼠的关节炎症,降低关节评分指数,抑制滑膜增生,降低免疫器官指数;相较于模型组,各给药组中大鼠血清中IL-2、IFN-γ 显著下降(P＜0.01),TGF-β、IL-4、IL-10 显著上升(P＜0.01),滑膜中 B7-1、CTLA-4 mRNA 及蛋白表达显著升高(P＜0.01),关节组织中的Th17细胞和Treg细胞的比例出现显著降低(P＜0.01).综上得出祖师麻通过调控B7/CD28/CTLA-4通路以及调节Th17/Treg平衡,抑制CIA大鼠中Th17细胞的表达,促进Treg细胞的表达,进而治疗RA.

目的:基于 Toll 样受体(Toll-like receptor,TLR)/髓系分化初级反应蛋白质 88(myeloid differentiation primary response pro-tein 88,MyD88)信号通路探讨四妙汤加土茯苓方治疗急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)的作用机制.方法:将48只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,每组8只.模型组、秋水仙碱组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组大鼠以高尿酸造模法结合尿酸盐注射法在右侧踝关节进行AGA造模,空白组以生理盐水灌胃,并在右侧踝关节注射生理盐水.AGA造模结束后,观察大鼠右侧踝关节,评估炎症指数,并计算踝关节肿胀指数.AGA造模结束后24 h,中药低、中、高剂量组大鼠均以四妙散加土茯苓方药液灌胃(生药用量分别为5 g·kg-1、10 g·kg-1、20 g·kg-1),秋水仙碱组以秋水仙碱混悬液灌胃,空白组和模型组大鼠均以等量生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃7 d.药物干预结束后24 h,腹主动脉取血,测定血清尿素氮和肌酐含量;取右侧踝关节滑膜组织,以实时荧光定量聚合酶链反应技术检测TLR/MyD88信号通路相关基因TLR2、TLR4、MyD88、核因子κB抑制剂激酶 α(nuclear factor-κB inhibitor kinase-α,IKK-α)、核因子 κB 抑制剂 α(nuclear factor-κB inhibitor-α,IκB-α)mRNA 表达水平,以蛋白质印迹技术检测IKK-α、IκB-α蛋白表达水平,采用免疫组化技术观察TLR2、TLR4蛋白表达情况及巨噬细胞聚集情况.结果:①模型验证结果.除空白组外,其余5组大鼠右侧踝关节注射尿酸盐混悬液后均逐渐发生肿胀,24 h后炎症指数均达到2级以上.造模后4 h、8 h、12 h、24 h,模型组、秋水仙碱组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组的踝关节肿胀指数均高于空白组(造模后 4 h:P=0.000,P=0.000,P=0.002,P=0.004,P=0.031;造模后 8 h:P=0.001,P=0.000,P=0.002,P=0.007,P=0.002;造模后 12 h:P=0.000,P=0.000,P=0.004,P=0.010,P=0.006;造模后 24 h:P=0.004,P=0.000,P=0.003,P=0.001,P=0.006).②血清尿素氮和肌酐含量检测结果.6组大鼠血清尿素氮、肌酐含量总体比较,组间差异均无统计学意义.③踝关节滑膜组织中TLR/MyD88信号通路相关基因mRNA水平检测结果.6组大鼠踝关节滑膜组织中MyD88 mRNA水平比较,差异无统计学意义.模型组的TLR2、TLR4、IKK-α、IKB-α mRNA水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000,P=0.000,P=0.020).秋水仙碱组和中药中剂量组的TLR2、TLR4、IKK-α、IκB-α mRNA水平均低于模型组(TLR2:P=0.000,P=0.005;TLR4:P=0.018,P=0.000;IKK-α:P=0.003,P=0.004;IKB-α:P=0.008,P=0.010);中药低剂 量组的 TLR2、IKB-α mRNA 水平均低于模型组(P=0.000,P=0.020),2组TLR4、IKK-α mRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.564,P=0.884);中药高剂量组的TLR4 mRNA水平低于模型组(P=0.024),2组TLR2、IKK-α、IκB-α mRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.349,P=0.320,P=0.579).中药低、中剂量组与秋水仙碱组的TLR2、TLR4、IKK-α、IKB-α mRNA水平比较,组间差异均无统计学意义(TLR2:P=0.836,P=0.056;TLR4:P=0.669,P=0.069;IKK-α:P=0.387,P=0.989;IKB-α:P=0.721,P=0.518);中药高剂量组的 TLR2、TLR4 mRNA水平均高于秋水仙碱组(P=0.000,P=0.002),2组IKK-α、IKB-α mRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.313,P=0.136).中药低、高剂量组的 TLR2、TLR4、IKK-α、IKB-α mRNA 水平均高于中药中剂量组(TLR2:P=0.000,P=0.047;TLR4:P=0.000,P=0.001;IKK-α:P=0.006,P=0.042;IKB-α:P=0.021,P=0.037);中药低剂量组的 TLR2、TLR4 mRNA 水平均低于中药高剂量组(P=0.001,P=0.006),2组IKK-α、IκB-α mRNA水平的组间差异均无统计学意义(P=0.394,P=0.068).④踝关节滑膜组织中IKK-α、JKB-α蛋白水平检测结果.模型组大鼠踝关节滑膜组织中IKK-α、IκB-α蛋白水平均高于空白组(P=0.000,P=0.000);秋水仙碱组IKK-α、IKB-α蛋白水平均低于模型组(P=0.000,P=0.000);秋水仙碱组IKK-α蛋白水平高于中药低剂量组(P=0.000),2组IκB-α蛋白水平的差异无统计学意义(P=0.050);秋水仙碱组IKK-α、IκB-α蛋白水平均高于中药中、高剂量组(IKK-α:P=0.000,P=0.000;IκB-α:P=0.000,P=0.000);中药低剂量组IKK-α、IKB-α蛋白水平均高于中药中、高剂量组(IKK-α:P=0.000,P=0.005;IKB-α:P=0.000,P=0.006);中药中剂量组IKK-α蛋白水平低于中药高剂量组(P=0.005),2组IKB-α蛋白水平的差异无统计学意义(P=0.108).⑤踝关节滑膜组织中巨噬细胞聚集情况观察结果.与空白组相比,其余5组大鼠踝关节滑膜组织中巨噬细胞均明显聚集,其中模型组巨噬细胞数量最多;4个药物干预组巨噬细胞数量均较模型组减少,其中中药中剂量组和秋水碱组巨噬细胞数量减少更明显.⑥踝关节滑膜组织中TLR2、TLR4蛋白表达情况观察结果.与空白组相比,其余5组大鼠踝关节滑膜组织中TLR2、TLR4蛋白均明显表达,其中模型组表达最明显;4个药物干预组TLR2、TLR4蛋白表达水平均较模型组降低,其中中药中剂量组和秋水仙碱组降低更明显.结论:四妙汤加土茯苓方治疗AGA的机制可能与其减少巨噬细胞聚集,下调TLR/MyD88信号通路相关基因表达,减少炎症因子释放有关,其中中剂量作用效果最佳,作用效果与秋水仙碱相当.

目的:探讨微小RNA(miR)-29b-3p对大鼠膝骨关节炎模型的保护作用及其机制。方法:30只SD大鼠随机分为对照组、模型组和miR-29b-3p KD组，miR-29b-3p KD组大鼠经膝关节腔注射过表达miR-29b-3p沉默腺相关病毒，对照组和模型组经膝关节腔给予对照腺相关病毒。3组大鼠表达30 d后，模型组和miR-29b-3p KD组大鼠采用木瓜蛋白酶局部注射复制膝骨关节炎动物模型。建模4周后，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析膝关节miR-29b-3p表达水平；Mankin组织学评分和Pelletier评分分析关节炎病变程度；分析3组大鼠膝关节最大活动度；采用酶联免疫吸附实验分析白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平；采用免疫组织化学分析基质金属蛋白酶(MMP)-13和Ⅱ型胶原的表达水平。组间比较采用单因素方差分析。结果:miR-29b-3p KD组大鼠膝关节组织miR-29b-3p表达水平(0.76±0.11)明显低于模型组(2.09±0.15)，差异有统计学意义( t＝22.240， P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节最大屈伸角度[(126.51±6.50)°]明显大于模型组[(102.53±5.33)°]，差异有统计学意义( t＝9.017， P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节Pelletier评分[(2.36±0.24)分]明显低于模型组[(3.40±0.84)分]，差异有统计学意义( t＝5.196， P<0.05)，miR-29b-3p KD组大鼠膝关节Mankin评分[(2.50±0.85)分]明显低于模型组[(3.70±0.0.82)分]，差异有统计学意义( t＝3.207， P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节滑膜液IL-1β和TNF-α水平[(82.62±8.76)、(51.43±5.61) ng/mg]明显低于模型组[(163.02±11.87)、(122.07±13.21) ng/mg]，差异有统计学意义( t＝17.250， P<0.05； t＝15.560， P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节滑膜液TGF-β1水平[(55.44±5.91) ng/mg]明显高于模型组[(25.40±4.09) ng/mg]，差异有统计学意义( t＝13.230， P<0.05)。miR-29b-3pKD组大鼠膝关节胶原酶Ⅱ水平(50.12±4.17)明显高于模型组(33.43±3.61)，差异有统计学意义( t＝9.579， P<0.05)。miR-29b-3p KD组大鼠膝关节MMP-13水平(82.62±8.76)明显低于模型组(163.02±11.87)，差异有统计学意义( t＝17.250， P<0.05)。 结论:miR-29b-3p沉默可显著上调TGF-β1表达水平，进而对大鼠膝关节软骨具有修复与保护作用。

目的:探讨柚皮苷诱导自噬对骨关节炎模型大鼠血清和关节软骨中炎性因子表达的影响。方法:在2022年11—12月，由温州市人民医院骨科将30只健康Sprague-Dawley大鼠通过随机数字表法分为对照组、模型组及低、中、高剂量实验组各6只。切除模型组及低、中、高剂量实验组大鼠右膝关节内侧半月板和前交叉韧带，构建骨关节炎模型；对照组施行假手术。低、中、高剂量实验组建模期间分别灌胃25 mg·kg -1·d -1、50 mg·kg -1·d -1、100 mg·kg -1·d -1柚皮苷，对照组与模型组则灌胃等量0.9%氯化钠注射液。造模成功后通过国际骨关节炎研究学会（OARSI）评分和滑膜评分评价骨关节炎严重程度；以酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测大鼠血清和软骨细胞中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平；反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测软骨细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达；以蛋白质印迹（WB）法检测软骨细胞中自噬活性和AKT/mTOR信号通路变化。 结果:对照组、模型组及低、中、高剂量实验组大鼠OARSI评分分别为（0.80±0.75）分、（9.40±1.02）分、（8.20±1.33）分、（6.80±1.17）分和（4.60±1.50）分；滑膜评分分别为（0.40±0.49）分、（3.80±0.75）分、（3.40±0.49）分、（2.20±0.98）分和（1.60±0.80）分；大鼠血清中IL-1β水平分别为（186.48±50.31）ng/L、（817.43±66.99）ng/L、（533.42±45.67）ng/L、（462.90±21.43）ng/L和（396.64±24.66）ng/L；IL-6水平分别为（448.25±89.42）ng/L、（1 762.49±171.95）ng/L、（1 517.08±83.87）ng/L、（1 019.78±103.32）ng/L和（819.42±169.37）ng/L；TNF-α水平分别为（419.67±60.99）ng/L、（1 287.40±184.68）ng/L、（948.73±87.82）ng/L、（860.55±102.21）ng/L和（726.95±15.65）ng/L；模型组OARSI评分、滑膜评分、血清IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平及软骨细胞磷酸化AKT（p-AKT）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）蛋白表达量比对照组高，高剂量实验组OARSI评分、滑膜评分、血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量以及软骨细胞p62、p-AKT、p-mTOR蛋白表达量比模型组低，高剂量实验组软骨细胞LC3-Ⅱ蛋白表达量比模型组高，差异均有统计学意义（均 P < 0.05）。 结论:柚皮苷通过抑制AKT/mTOR信号通路，激活自噬，降低骨关节炎模型大鼠炎性因子分泌，最终抑制骨关节炎。

目的:通过 99Tc m-联肼尼克酰胺-3聚乙二醇-精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸环肽二聚体(3PRGD 2)显像在体观察类风湿关节炎(RA)大鼠蒙药森登-4汤治疗前后放射性分布变化，并探究其治疗机制。 方法:取200只雌性SD大鼠(6~7周龄)，分为胶原诱导性关节炎(CIA)组(176只)和空白对照组(24只)。将CIA模型大鼠通过简单随机抽样法分为森登-4汤治疗组(24只)、依那西普治疗组(24只)和阴性对照组(24只)。造模及治疗前后均行 99Tc m-3PRGD 2显像，分析各组病变关节与纵隔的靶/非靶(T/NT)放射性比值，分析相应血清学、病理及免疫组织化学指标。采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis秩和检验分析数据。相关性分析采用Pearson或Spearman相关分析。 结果:CIA组成功造模95只，成模率为54%(95/176)。治疗后，阴性对照组、森登-4汤治疗组、依那西普治疗组T/NT比值差异有统计学意义(0.766±0.144、0.260±0.094和0.238±0.099； F＝163.00， P<0.001)，而2个药物治疗组间差异无统计学意义( P>0.05)。药物治疗后，血清血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、整合素α vβ 3表达水平均显著低于阴性对照组( F值：49.43~92.36，均 P<0.001)；关节病理滑膜细胞增生指数也明显低于阴性对照组( H＝34.25， P<0.001)；滑膜组织中VEGF、TNF-α、整合素α vβ 3、CD31、CD34表达水平也显著低于阴性对照组( H值：13.51~26.84，均 P<0.001)，而2组药物治疗组间上述指标差异均无统计学意义(均 P>0.05)。治疗后，森登-4汤治疗组( r值：0.56~0.59， rs值：0.49~0.69)、依那西普治疗组( r值：0.50~0.55， rs值：0.46~0.70)和阴性对照组( r值：0.55~0.80， rs值：0.58~0.86)的T/NT比值与上述各指标均呈正相关( P<0.001或 P<0.05)。 结论:通过 99Tc m-3PRGD 2显像与分子病理验证，蒙药森登-4汤可通过下调VEGF等血管因子抑制新生血管形成，延缓病情进展、改善临床症状。

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在大鼠膝骨关节炎模型中表达及靶向干预效果。方法:10只大鼠采用木瓜蛋白酶局部注射复制膝骨关节炎动物模型，另外10只作为对照组，建模后采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分析膝关节液中HIF-1α表达水平。另30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和PX-478组，模型组和PX-478组建立膝骨关节炎模型，PX-478组大鼠经膝关节腔注射PX-478 5 mg/kg，假手术组和模型组分别注射等体积生理盐水。治疗30 d后，采用Mankin组织学评分和Pelletier评分分析膝骨关节炎病变程度；原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析3组大鼠膝关节软骨的凋亡水平；蛋白质免疫印迹分析3组大鼠膝关节软骨半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)蛋白表达水平。组间比较采用单因素方差分析。结果:膝骨关节炎大鼠膝关节组织液HIF-1α水平[(281.71±26.14) ng/ml]明显高于对照组[(116.37±19.98) ng/ml]，差异有统计学意义( t＝15.890， P<0.05)。PX-478组大鼠膝关节Pelletier评分[(1.50±0.53)分]明显低于模型组[(3.80±0.92)分]，差异有统计学意义( t＝6.866， P<0.05)；PX-478组大鼠膝关节Mankin评分[(2.20±0.42)分]明显低于模型组[(4.20±0.79)分]，差异有统计学意义( t＝7.071， P<0.05)；PX-478组大鼠膝关节滑膜液白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平[(92.78±9.75)、(61.59±5.69) ng/mg]明显低于模型组[(173.21±11.87)、(132.23±13.21) ng/mg]，差异有统计学意义( t＝22.390、15.697， P<0.05)。PX-478组大鼠膝关节软骨TUNEL染色阳性率[(12.41±2.45)%]明显低于模型组大鼠膝关节Mankin评分[(31.82±3.38)%]，差异有统计学意义( t＝8.982， P<0.05)。PX-478组大鼠膝关节软骨Caspase-3表达水平(1.36±0.07)明显低于模型组(1.92±0.18)，差异有统计学意义( t＝9.538， P<0.05)。PX-478组大鼠膝关节软骨bcl-2表达水平(1.28±0.09)明显低于模型组(0.96±0.05)，差异有统计学意义( t＝9.577， P<0.05)。 结论:膝骨关节炎大鼠膝关节液中HIF-1α表达水平明显增加，采用PX-478治疗可显著抑制HIF-1α活性，下调炎性因子水平，改善膝关节病变程度，对膝关节起保护作用。

目的:观察腺相关病毒介导核心结合蛋白因子2(Runx2)对小鼠退行性膝关节炎的修复作用。方法:60只大鼠(购自上海斯莱克实验动物有限公司)随机分为假手术组、模型组和Runx2组，模型组和Runx2组小鼠通过小鼠右后肢膝关节前交叉韧带切断手术，建立退行性膝骨关节炎小鼠模型。假手术组小鼠仅做手术，不切断交叉韧带。小鼠建模成功4周后，假手术组和模型组小鼠膝关节腔注射携带空载体的阴性腺相关病毒。Runx2组小鼠膝关节腔注射携带Runx2基因的腺相关病毒。注射21 d后，分析3组小鼠攀爬时间和长距离运动能力；分析关节软骨和滑膜评分的变化；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测3组小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β水平；采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析3组小鼠软骨组织中OSX和骨保护素(OPG) mRNA表达水平。计量数据比较采用单因素方差分析，组建两两比较采用LSD法。结果:与模型组小鼠攀爬时间和长运动距离[(539.11±79.21) s和(68.20±13.99) m]比较，Runx2组[(1401.72±102.83) s和(201.58±17.92) m]明显增加，差异有统计学意义( t＝9.102， P<0.05； t＝6.119， P<0.05)。与模型组小鼠膝关节软骨评分和膝关节滑膜评分[(7.51±1.82)分和(7.25±1.93)分]比较，Runx2组[(5.98±1.86)分和(6.01±1.62)分]明显下降，差异有统计学意义( t＝6.195， P<0.05； t＝5.018， P<0.05)。与模型组小鼠外周血TNF-α和IL-1β水平[(251.50±43.19) ng/L和(271.57±32.19) ng/L]比较，Runx2组[(78.54±8.19) ng/L和(98.40±10.32) ng/L]明显下降，差异有统计学意义( t＝7.001， P<0.05； t＝7.193， P<0.05)。与假手术组和模型组骨桥蛋白(OPN) mRNA水平(1.00±0.19和0.94±0.17)比较，Runx2组(2.55±0.23)显著增加，差异有统计学意义( t＝2.209， P<0.05； t＝2.413， P<0.05)。与假手术组和模型组OSX mRNA水平(0.98±0.14和1.09±0.21)比较，Runx2组(3.01±0.20)显著增加，差异有统计学意义( t＝2.501， P<0.05； t＝2.216， P<0.05)。 结论:腺相关病毒介导Runx2可降低退行性膝关节炎小鼠的炎性因子水平，促进成骨细胞成熟，降低膝关节软骨和滑膜的病理变化，提高小鼠运动能力。

目的:探讨脂联素(AD)调控滑膜细胞产生炎性因子进而诱发骨关节炎(OA)。方法:采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测刺激细胞的最适加药浓度；通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)通路标志基因如促分裂原活化的蛋白激酶(MEK)、丝裂原活化蛋白激酶(ERK1/2)的表达变化。蛋白质印迹法(Western blot)分析AD的刺激对ERK1/2、p38的磷酸化作用；酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定AD作用后滑膜细胞炎性因子的产量。多个样本比较采用单因素方差分析。结果:AD(1 μg/ml)可显著对滑膜细胞产生增殖抑制作用( F＝136.900、11.930， P<0.05)；荧光定量PCR结果显示，与对照组比较，AD可上调MEK及ERK基因表达(1.026±0.072、2.926±0.158， t＝21.910， P<0.05；0.960±0.194、5.433±0.532， t＝15.810， P<0.05)；Western blot结果表明，与对照组比较，AD可刺激滑膜细胞增加ERK1/2、p38的磷酸化(0.488±0.083、1.152±0.050， t＝11.860， P<0.05；0.407±0.014、1.312±0.063， t＝24.370， P<0.05)；ELISA法结果显示，AD可显著促进由趋化蛋白引起的下游炎性因子如白细胞介素(IL)-1β、IL-6、基质金属蛋白酶(MMP)-3和MMP-13、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的产生[(15.077±0.884)、(69.947±2.950) pg/ml、(9.225±0.323)、(134.925±15.02) ng/ml、(93.055±6.073) pg/ml]，与对照组比较，差异有统计学意义( t＝3.239、4.838、5.312、4.366、3.292， P<0.05)，与抑制剂组比较，差异有统计学意义( t＝2.275、6.251、4.331、1.221、3.456， P<0.05)。 结论:AD可通过影响MAPK/ERK信号通路来增强滑膜细胞炎性因子的产生。

目的:探讨雷公藤甲素调控Caspase-1/Gasdermins D蛋白（GSDMD）通路干预胶原诱导性关节炎大鼠骨破坏的作用及机制。方法:将大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、雷公藤甲素组、甲氨蝶呤组，每组5只。除空白组外，其余各组大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原建立关节炎模型。加强免疫7 d后，雷公藤甲素组灌胃雷公藤甲素18 μg/kg，1 d/次；甲氨蝶呤组腹腔注射甲氨蝶呤0.3 mg/kg，3 d/次，连续干预15 d。记录大鼠关节炎指数（AI）评分与足趾容积变化，采用HE染色观察大鼠踝关节组织形态学改变，番红固绿染色观察大鼠踝关节软骨及骨改变；ELISA法检测大鼠血清IL-18、IL-1β水平；实时荧光定量PCR法检测大鼠踝关节GSDMD、Caspase-1、骨骼保护因子（OPG）、NF-κB受体活化因子配体（RANKL）mRNA水平；Western blot法检测踝关节组织中GSDMD、Caspase-1、OPG、RANKL蛋白表达。结果:给药1、2周，与模型组比较，雷公藤甲素组、甲氨蝶呤组AI评分及足趾容积数值降低（ P<0.01）；模型组大鼠踝关节组织可见大量炎性细胞浸润、滑膜血管翳生成，软骨及骨染色潮线模糊缺损，各给药组均不同程度改善大鼠关节炎性浸润、滑膜血管翳生成、关节软骨及骨破坏。与模型组比较，雷公藤甲素组与甲氨蝶呤组大鼠血清IL-18、IL-1β水平降低（ P<0.01），GSDMD、Caspase-1、RANKL mRNA及蛋白表达降低（ P<0.01），OPG mRNA及蛋白表达升高（ P<0.01）。 结论:雷公藤甲素可有效改善胶原诱导性关节炎大鼠关节炎症与骨破坏表现，其作用机制可能与下调GSDMD、Caspase-1、RANKL表达，上调OPG表达相关。