研究乳源性外泌体与脂质体进行膜融合得到的杂化外泌体装载青藤碱(sinomenine,SIN)后对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的治疗效果.通过蔗糖密度梯度离心法从鲜牛乳中提取外泌体,采用乳化蒸发-低温固化法制备脂质体,共孵育法进行膜融合后对杂化外泌体进行表征:透射电镜检测形貌,纳米粒度电位仪检测粒径与电位,蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测膜融合前后外泌体膜表面特征蛋白CD63和TSG101的表达.超声法装载青藤碱后,酶标仪检测其载药量与包封率.胶原抗体诱导法建立CIA大鼠模型,药效实验设对照组、模型组、SIN组、SIN-脂质体组、SIN-乳外泌体组、SIN-杂化外泌体组及阳性药(地塞米松)组.记录给药期间大鼠体质量变化,以足肿胀度、免疫器官指数、关节炎指数、微循环指标变化、滑膜组织病理学检查、血清炎症因子水平变化为指标进行药效学研究.透射电镜结果显示,杂化外泌体与乳外泌体外观均呈茶托状,共孵育后外泌体粒径由(97.92±3.42)nm 增长到(132.70±4.07)nm,Zeta 电位由(-2.01±0.33)mV 变为(-17.90±2.13)mV,WB结果显示CD63与TSG101蛋白在乳外泌体及杂化外泌体中均正常表达.酶标仪测定乳外泌体包封率31.64％±2.48％、载药量2.35％±0.52％,杂化外泌体包封率48.21％±3.12％、载药量3.17％±0.36％.药效学结果显示,与模型组相比,各给药组一般情况及足肿胀度、关节炎指数及免疫器官指数均得到显著改善(P＜0.05,P＜0.01),微血管综合评分及血管阻力显著下降(P＜0.05,P＜0.01),血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)炎症因子水平显著降低(P＜0.01),滑膜组织的病变得到一定程度的改善.同时与SIN组、SIN-脂质体组及SIN-乳外泌体组相比,SIN-杂化外泌体组具备更平稳持久的药效.该研究将乳源性外泌体与脂质体共孵育得到的杂化外泌体成功改善了外泌体载药量小与脂质体生物相容性差等问题,负载青藤碱的杂化外泌体对CIA大鼠有着良好的疗效,可有效解决青风藤等疗效佳但生物半衰期短的问题,为传统中药的新发展及类风湿性关节炎等疾病的治疗提供了新思路.

目的:观察青藤碱对急性脑外伤模型大鼠脑水肿及水通道蛋白4(aquaporins 4, AQP-4)与AQP-5表达的影响。方法:将大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、青藤碱低剂量组、青藤碱高剂量组，每组20只。除假手术组外，其余各组大鼠采用Feeney自由落体法制作急性脑外伤模型。青藤碱低、高剂量组腹腔注射青藤碱30、60 mg/kg，假手术组和模型组腹腔注射等体积生理盐水，1次/d，连续注射7 d。采用HE染色、电镜观察各组大鼠脑组织病理学改变，采用Western blot及RT-PCR检测脑组织AQP-4、AQP-5蛋白及基因表达。结果:HE染色结果显示，模型组大鼠神经细胞排列松散，层次紊乱，部分细胞变性。青藤碱低、高剂量组脑组织神经细胞水肿、坏死程度较模型组减轻。与模型组比较，青藤碱低、高剂量组大鼠脑组织AQP-4[(0.74±0.13)、(0.49±0.11)比(1.30±0.21)]、AQP-5[(0.98±0.07)、(0.45±0.10)比(1.47±0.18)]蛋白表达降低( P<0.05)，AQP-4 mRNA[(1.48±0.18)、(1.26±0.12)比(2.04±0.14)]、AQP-5 mRNA[(1.31±0.17)、(1.20±0.11)比(1.87±0.15)]表达降低( P<0.05)。 结论:青藤碱可降低急性脑外伤模型大鼠脑组织AQP-4、AQP-5基因及蛋白表达，减轻脑组织损伤。

大骨节病（Kashin-Beck disease，KBD）是一种地方性、多发性、对称性、变形性骨关节病，好发于发育期儿童的骨骺生长板和关节软骨，可致软骨细胞变性、降解和坏死，临床上依据患者病变范围和畸形程度分为早期、Ⅰ度、Ⅱ度和Ⅲ度4个阶段。KBD的病因与发病机制至今仍不清楚，针对此病尚无特效药，对各种医学干预手段有效性的研究也较少。目前，KBD的治疗多参照中西医关于骨关节炎的相关方法。本文以现有研究作为基础，依据KBD的疾病分期对其中西医治疗方法进行了总结分析，提出应在阶梯化和个体化原则下，中西医并重治疗，并以药物治疗为主、手术治疗为辅，最大程度减轻患者疼痛、保护关节和预防损伤，以期为临床治疗KBD提供参考依据。

目的:观察青藤碱通过调节核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)通路减少颅脑外伤引起的神经元凋亡。方法:采用随机数字表法将大鼠分为SIN组、SIN＋Brusatol组和对照组，每组5只，建立模型后，实验组每天腹腔注射SIN[50 mg/(kg·d)]；SIN＋Brusatol组每天注射SIN[50 mg/(kg·d)]和Brusatol[1 mg/(kg·d)]；对照组腹腔内注射等体积的生理盐水。蛋白质印迹法(Western blot)技术检测细胞中相关蛋白表达量；NSS评分量表评价青藤碱对神经功能影响；通过原位缺口末端标记法(TUNEL)染色，计算阳性细胞数量；定量资料比较采用 t检验。 结果:通过神经功能分析，SIN组NSS评分[(1.76±0.43)分]低于SIN＋Brusatol组、对照组[(3.96±0.45)、(4.02±0.49)分]，差异有统计学意义( t＝－10.76、－10.40， P<0.05)。通过TUNEL染色统计阳性细胞数量，SIN组阳性细胞数量(52.33±5.13)明显低于SIN＋Brusatol组、对照组(91.33±7.10、99.33±5.86)，差异有统计学意义( t＝10.45、7.72， P<0.01)。通过Western blot技术检测细胞中相关蛋白表达情况，SIN组Nrf2(1.35±0.05)表达量高于SIN＋Brusatol组、对照组(0.81±0.04、0.83±0.06)，差异有统计学意义( t＝24.47、20.17， P<0.05)；SIN组HO-1(1.20±0.07)表达量高于SIN＋Brusatol组、对照组(0.61±0.04、0.62±0.05)，差异有统计学意义( t＝20.84、22.30， P<0.05)。 结论:青藤碱通过调节Nrf2/HO-1通路减少颅脑外伤引起的神经元凋亡。

目的:探讨青藤碱(SIN)在诱导大鼠来源树突状细胞(DCs)中发挥免疫抑制作用的可能机制。方法:体外培养Wistar大鼠骨髓来源前体细胞，显微镜下观察青藤碱处理DCs(青藤碱修饰组，SIN组)与常规诱导DCs(常规诱导组，对照组)的形态学差异，利用流式细胞术检测DCs的CD表型特点。以脂多糖(LPS)刺激诱导DCs成熟，采用流式细胞术检测青藤碱对LPS诱导的树突状细胞表面Toll样受体(TLR)2、TLR3、TLR4表达的影响。结果:常规诱导组可见细胞呈葡萄串样的细胞集落或悬浮生长，细胞表面颗粒感明显；而青藤碱诱导组细胞集落在一起，细胞体积、形态无明显变化。常规诱导组中DCs表面CD80、CD86的相对表达量为70.7%、71.3%，而SIN组中DCs表面CD80、CD86的相对表达量为51.7%、49.4%。SIN＋LPS组DCs表面TLRs相对表达量TLR2(51.2±0.34)%、TLR3(50.3±0.14)%、TLR4(52.1±0.16)%，较单纯LPS组DCs表面相应TLRs相对表达量[(94.35±0.16)%、(97.55±0.16)%、(94.6±0.12)%]明显降低。结论:SIN可能可以通过抑制TLRs信号通路抑制DCs成熟，从而诱导免疫耐受。

研究制订国际标准化组织(International Organization for Standardization, ISO)中草药国际标准已成为中药国际化和标准化的新热点，国际标准化组织/中医药技术委员会(ISO/TC249)为制定中草药标准提供了国际平台。青风藤作为疗效确切且在国际范围内有一定应用的传统中药材，也应通过制订国际标准的形式在全球层面建立统一的质量与安全控制标准。现有文献研究显示，青风藤存在较多别名，品种混淆与掺伪问题较严重。以青藤碱为主的生物碱是其主要药理活性成分。通过分析中国、日本、韩国及欧洲药典发现，中国、欧洲药典均以青藤碱作为青风藤的质量控制指标；日本、韩国药典对青风藤的质控要求较为相似，但韩国药典更偏重对安全性的要求。建议收集青风藤全球贸易数据和样本进行质量与安全性研究来制订青风藤ISO国际标准。

目的:探讨青藤碱对载脂蛋白E基因敲除(ApoE －/－)小鼠动脉粥样硬化形成的影响及其机制。 方法:采用随机数字表法将6～8周龄雄性ApoE －/－小鼠分为模型组、青藤碱低剂量组和高剂量组，每组10只。30只小鼠均高脂饲料喂养16周，在高脂饲养8周后，低剂量组和高剂量组分别给予青藤碱50 mg/(kg·d)和100 mg/(kg·d)灌胃，模型组小鼠灌胃等量蒸馏水，持续8周。干预结束后检测各组小鼠血清中血脂水平、氧化应激指标，并采用苏木精-伊红(HE)染色、马松染色及核因子E2相关因子2(Nrf2)免疫组织化学分析斑块形态，蛋白质印迹法(Western blot)检测主动脉Nrf2及下游靶向蛋白的表达。组间比较采用 t检验和单因素方差分析。 结果:高剂量青藤碱组小鼠体重轻于模型组[(30.910±3.741) g比(37.774±7.182) g， t＝0.245， P<0.05]，高剂量青藤碱组小鼠血清总胆固醇水平低于模型组[(10.301±2.210) mmol/L比(13.232±2.280) mmol/L， t＝1.217， P<0.01]。斑块形态学比较，青藤碱给药组小鼠动脉粥样硬化斑块范围小于模型组，炎性细胞浸润少于模型组，胶原含量多于模型组，主动脉Nrf2及下游靶蛋白表达水平高于模型组。 结论:青藤碱可激活Nrf2信号通路，增强抵抗氧化应激的能力，增加斑块稳定性，对动脉粥样硬化具有保护作用。

目的:探讨青风藤活性成分对糖尿病(diabetes mellitus,DM)db/db小鼠肾脏的保护作用及其机制研究.方法:30 只 6 周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组(等体积生理盐水),阳性组(195 mg/kg/d羟苯磺酸钙),盐酸青藤碱(Sinomenine Hydrochloride,SH)低、中、高剂量组(31.2、62.4、124.8 mg/kg/d SH)5 组,同时选取 6 只同周龄db/m小鼠设为对照组(等体积生理盐水),每日 1 次,定时灌胃给药,连续 6w.于 12w末观察各组小鼠一般情况,检测尿微量白蛋白(mAlb)、血肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)水平;试剂盒检测肾组织匀浆中丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平;Luminex多因子检测技术测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)的含量;ELISA法检测血清免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白A(IgA)及补体蛋白3(C3)的水平;苏木精-伊红(HE)和过碘酸-雪夫(PAS)染色观察肾脏组织病理形态变化;透射电镜观察肾脏超微结构的改变.结果:与模型组比较,阳性组和SH低、中、高剂量组小鼠mAlb、SCr和BUN水平均降低(P＜0.05);肾组织匀浆中MDA水平降低(P＜0.05),GSH水平和SOD活性均升高(P＜0.05);血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IgG、IgM、IgA和补体C3 水平均降低(P＜0.05),IL-10 水平升高(P＜0.05);镜下肾小球损伤及肾小管上皮水肿情况均有所改善,肾组织损伤减轻.结论:青风藤活性成分对DM db/db小鼠的肾脏具有保护作用,其作用机制可能与改善氧化应激反应,缓解炎症反应及提高免疫功能有关.

目的:探讨青藤碱(Sinomenine)对卵巢癌细胞增殖、迁移和血管生成拟态的影响及作用机制.方法:使用不同浓度(0、0.25、0.50、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol/L)的青藤碱分别处理 A2780 细胞24、48 h,CCK-8法检测细胞存活率.将A2780细胞随机分为对照(Control)组、CXCR4激活剂基质细胞衍生因子-1(SDF-1)(SDF-1,100 ng/mL)组、CXCR4 抑制剂普乐沙福(Plerixafor,500 ng/mL)组、青藤碱(Sinomenine,1.0 mmol/L)组、Sinomenine+SDF-1(1.0 mmol/L Sinomenine+100 ng/mL SDF-1)组,分别检测 A2780 细胞增殖、迁移与侵袭,体外血管生成拟态形成实验检测青藤碱对血管生成拟态的影响,Western blot法检测血管内皮生长因子(VEGF)、上皮细胞激酶(EphA2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、MMP-2、CXC趋化因子受体4(CXCR4)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达.结果:青藤碱可有效抑制A2780细胞增殖,且呈浓度依赖性;青藤碱可显著抑制A2780细胞迁移、侵袭及血管生成拟态形成,并下调血管生成拟态标志蛋白VEGF、EphA2、MMP-9、MMP-2表达,抑制CXCR4、p-STAT3表达(P＜0.05),青藤碱的这一抑制作用可被CXCR4激活剂减弱.结论:青藤碱可能通过抑制CXCR4-STAT3轴,抑制卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭及血管生成拟态形成.

为了解紫金龙(Dactylicapnos scandens)中异喹啉生物碱化学成分及其抗菌活性,从紫金龙根的乙酸乙酯部位分离得到10 个异喹啉类生物碱,根据理化性质和波谱数据,其结构分别鉴定为普罗托品(1)、1-甲氧基小檗碱(2)、别隐品碱(3)、伪普鲁托品(4)、巴马汀(5)、青藤碱(6)、药根碱(7)、血根碱(8)、四氢巴马汀(9)、异紫堇定(10).化合物2～4、8 为首次从该种植物中分离得到,其中化合物 4 对大肠杆菌表现出潜在的抑制活性,MIC值为 6.25 μg/mL,抗菌活性优于临床抗菌药物小檗碱(25.0 μg/mL).