目的:观察利拉鲁肽对老年2型糖尿病(T2DM)大鼠肾脏组织转化生长因子β1(TGF-β1)/细胞内信号蛋白Smads基因通路的影响并探讨其作用机制。方法:20月龄、体重(500±100)g的健康雄性SD大鼠75只，应用随机数字表法按1∶2随机分为对照组(25只)和造模组(50只)，造模组给予高糖、高脂饲料喂养8周后，一次性腹腔内推注1%链脲佐菌素30 mg/kg，成模后剩余48只再随机分为T2DM组(24只)和干预组(24只)，干预组给予利拉鲁肽200 μg·kg -1·d -1腹腔注射，对照组和T2DM组大鼠给予等量生理盐水。各组分别于分组后第4、8、12周末随机取8只大鼠，留取24 h尿液检测24 h尿蛋白。随后麻醉采血测生化指标，留取肾脏组织，行苏木素伊红(HE)染色后光学显微镜下观察其病变，并用免疫组化法测Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)的表达，应用实时荧光定量聚合酶链反应法测TGF-β1、Smad3、Smad7 mRNA的表达。组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD- t检验。 结果:在各时间段，与对照组大鼠比较，T2DM组大鼠出现肾小球基底膜增厚、系膜增生及间质纤维化改变，且随时间延长逐渐加重，TGF-β1、Smad3 mRNA及Col-Ⅳ表达增加(12周：0.69±0.01比0.15±0.01、0.51±0.02比0.02±0.01、183.33±2.08比221.67±2.08， t值分别为89.22、60.87、24.52，均 P<0.05)，而Smad7 mRNA减少( t＝13.42， P<0.05)；与同期T2DM组比较，干预组大鼠肾脏纤维化程度减轻，TGF-β1、Smad3 mRNA及Col-Ⅳ表达减少( t值分别为71.70、37.58、20.04，均 P<0.05)，而Smad7 mRNA增多( t＝9.96， P<0.05)。且随利拉鲁肽干预时间延长，病变逐渐减轻，TGF-β1、Smad3 mRNA及Col-Ⅳ逐渐减少，Smad7 mRNA逐渐增多(均 P<0.05)。 结论:利拉鲁肽可能通过抑制TGF-β1/Smads通路从而减少其下游Col-Ⅳ的生成，发挥抗肾纤维化的作用，延缓老年T2DM大鼠肾脏病变的进展。

目的:探讨脂肪源间充质干细胞(adMSC)的外泌体长链非编码RNA锌指E盒结合同源框1反义链1(Zinc finger E-box binding homeobox 1 antisense 1, ZEB1-AS1)在糖尿病肾病(DN)中的作用机制。方法:采用大鼠DN模型和高糖(HG)诱导的肾小球系膜细胞(GMCs)模型进行生化分析和炎症/氧化应激检测；双荧光素酶基因报告实验验证ZEB1-AS1、第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)与microRNA(miR)-142-5p的结合关系；Western blotting检测PTEN蛋白表达水平。结果:adMSC分泌的外泌体ZEB1-AS1可降低DN大鼠血糖、血清肌酐、24 h尿蛋白、肾脏重量、肾组织纤维化以及炎症细胞浸润水平。同时，在DN大鼠和HG诱导的GMCs中，肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的表达下降，而谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽(GSH)的表达上升。此外，miR-142-5p能与ZEB1-AS1、PTEN结合；miR-142-5p过表达或PTEN沉默逆转了外泌体ZEB1-AS1对炎症细胞因子水平的抑制作用和对抗氧化酶浓度的促进作用。结论:来自adMSC的外泌体ZEB1-AS1通过miR-142-5p/PTEN通路，控制炎症和氧化应激来抑制DN的进展。这表明ZEB1-AS1可能是治疗DN潜在、有效的靶点。

目的:观察生地黄配伍玄参对DN大鼠病理过程中肾脏微炎症状态的影响。方法:将50只SD大鼠适应性饲养1周后，随机选取10只作为空白对照组，其余采取STZ腹腔注射联合高脂饲料诱导DN模型，4周后将造模成功的大鼠按随机数字表法分为模型组、生地黄玄参组（5.25 g/kg）和二甲双胍组（200 mg/kg），每组10只。给药8周后，采用血糖仪检测大鼠空腹血糖；苯索氯铵比浊法检测尿微量白蛋白水平；ELISA法检测血清中胱抑素、TNF-α、IL-6、超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平；采用HE、Masson、过碘酸希夫反应（PAS）染色观察肾脏病理形态改变；采用Western blot法检测肾组织单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达。结果:与模型组比较，生地黄玄参组大鼠体重降低（ P<0.05），空腹血糖［（18.06±5.69）mmol/L比（29.42±0.63）mmol/L］、24 h尿蛋白定量［（11.02±1.77）mg/d比（31.61±0.65）mg/d］、血清胱抑素［（208.16±12.07）ng/ml比（278.05±19.33）ng/ml］、TNF-α［（9.13±1.46）pg/ml比（73.16±8.30）pg/ml］、IL-6［（4.27±1.07）pg/ml比（12.04±1.57）pg/ml］、hs-CRP［（219.36±22.02）ng/ml比（266.97±15.80）ng/ml］水平降低（ P<0.05），肾组织p-NF-κB［（0.49±0.07）比（0.84±0.12）］、MCP-1［（0.44±0.02）比（0.64±0.11）］蛋白表达降低（ P<0.05）。 结论:生地黄配伍玄参可通过抑制NF-κB的过度活化，降低MCP-1相关蛋白表达，减轻肾脏微炎症状态，发挥保护肾脏、治疗DN的作用。

目的:探讨加味真武汤通过调控miR-377表达水平对糖尿病肾病(DN)细胞炎症水平和免疫功能的影响及分子机制。方法:选取40只SPF级雄性大鼠，对其中30只大鼠进行腹腔注射链脲佐菌素，建立大鼠DN模型，并随机分为模型对照组、加味真武汤低剂量组、加味真武汤高剂量组，每组各10只。同时设置空白对照组(10只)。建立HK-2细胞的DN模型，分为miR-NC+DN组(将miR-NC转染至建模后的HK-2细胞)、miR-377+DN组(将miR-377转染至建模后的HK-2细胞)、anti-miR-NC+DN组(将anti-miR-NC转染至建模后的HK-2细胞)、anti-miR-377+DN组(将anti-miR-377转染至建模后的HK-2细胞)、加味真武汤+miR-NC+DN组(将miR-NC转染至建模后的HK-2细胞，再用高剂量加味真武汤处理)、加味真武汤+miR-377+DN组(将miR-377转染至建模后的HK-2细胞，再用高剂量加味真武汤处理)。采用实时荧光定量PCR检测miR-377表达水平；采用酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平；采用流式细胞仪检测CD4 +、CD8 +和Th1水平。 结果:与空白对照组比较，模型对照组的TNF-α、IL-6、IL-8、CD4 +、miR-377水平升高，CD8 +和Th1水平降低，差异均有统计学意义(均 P<0.001)；与模型对照组比较，加味真武汤低剂量组、加味真武汤高剂量组的TNF-α、IL-6、IL-8、CD4 +、miR-377水平降低，CD8 +和Th1水平升高，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。与miR-NC+DN组比较，miR-377+DN组的TNF-α、IL-6、IL-8水平以及CD4 +水平升高，CD8 +和Th1水平降低(均 P<0.001)；与anti-miR-NC+DN组比较，anti-miR-377+DN组的TNF-α、IL-6、IL-8水平以及CD4 +水平降低，CD8 +和Th1水平升高(均 P<0.001)。与加味真武汤+miR-NC+DN组比较，加味真武汤+miR-377+DN组的TNF-α、IL-6、IL-8水平以及CD4 +水平降低，CD8 +和Th1水平升高(均 P<0.001)。 结论:加味真武汤通过抑制miR-377表达减轻DN细胞炎症水平，增强患者的免疫功能，值得临床推广应用。

目的:探究温补固肾方对糖尿病肾病(DN)大鼠肾纤维化和焦亡的影响及作用机制。方法:选取60只SD大鼠随机分为对照组，模型组，温补固肾方低、中、高剂量组，厄贝沙坦组，每组各10只。除对照组，其余各组均采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ，60 mg/kg)复制DN大鼠模型。待模型构建成功后，温补固肾方低、中、高剂量组分别灌胃不同剂量(0.92、1.84和3.68 g/kg)，厄贝沙坦组灌胃13.5 mg/kg。对照组和模型组大鼠分别灌胃等量生理盐水。给药治疗12周后，检测各组大鼠24 h尿蛋白、尿素氮、肌酐值以及血糖值；观察大鼠肾脏组织病理学变化；检测肾组织Ⅲ型胶原、转化生长因子(TGF)-β1，pro-casapse-1、cleaved-caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、白细胞介素(IL)-1β、IL-18以及C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白6(CTRP6)表达水平；酶联免疫吸附试验(ELISA)测定大鼠血清IL-1β和IL-18含量。结果:与对照组相比，模型组大鼠24 h尿蛋白、尿素氮、肌酐值、血糖值均明显升高；肾组织出现明显的病理学改变，且TGF-β1、Ⅲ型胶原、cleaved-caspase-1、GSDMD-N、IL-1β、IL-18和CTRP6表达均明显升高；血清IL-1β、IL-18含量明显增加。与模型组相比，温补固肾方能够抑制上述指标变化，改善肾损伤。结论:温补固肾方对DN肾损伤具有保护作用，其机制与下调CTRP6，抑制肾纤维化和细胞焦亡相关。

目的:探讨糖尿病肾病(DN)肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)进程中整合素连接激酶(ILK)/锌指转录因子(Snail)信号通路的表达情况及大黄酸对其的影响。方法:将8周龄的健康雄性Wistar大鼠，随机分为正常组、糖尿病肾病组、大黄酸组及缬沙坦组，每组各12只。使用链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病模型，大黄酸组及缬沙坦组分别给予大黄酸100 mg/(kg·d)、缬沙坦30 mg/(kg·d)灌胃。于第8、16周末，以上四组大鼠各处死6只，原位灌洗肾脏，取出大鼠的肾脏组织后固定于蜡块并切片，使用HE及Masson染色分别对肾小管间质损伤指数、间质胶原相对面积进行评价；免疫组织化学方法测定E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、ILK、Snail及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达并作半定量分析。结果:与正常组比较，糖尿病肾病组大鼠肾小管间质损伤指数升高、肾间质胶原相对面积增加，肾小管上皮细胞E-cadherin表达下调、α-SMA表达上调( P<0.05)。与糖尿病肾病组比较，大黄酸组、缬沙坦组肾小管间质损伤指数下降、肾间质胶原相对面积减少，肾小管上皮细胞E-cadherin表达上调、α-SMA表达下调( P<0.05)，且大黄酸组、缬沙坦组两组间差异无统计学意义( P>0.05)。与正常组比较，糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞ILK、Snail及MMP-2的表达均随病情发生进行性升高( P<0.05)。与糖尿病肾病组比较，大黄酸组、缬沙坦组ILK、Snail及MMP-2的表达均有所下降( P<0.05)，且大黄酸组、缬沙坦组两组间差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:大黄酸可通过下调DN大鼠肾小管上皮细胞ILK/Snail信号通路的表达阻抑EMT的进展。

目的:探讨血脂康对糖尿病大鼠造影剂诱导肾损伤的保护作用及相关机制。方法:7周龄健康雄性SD大鼠，链脲佐菌素（STZ）腹腔注射（65 mg/kg）建立糖尿病模型。造模4周后，取24只糖尿病大鼠随机分为4组：假手术组、造影剂肾病组、术前生理盐水灌胃的造影剂肾病组（生理盐水组）、术前血脂康灌胃的造影剂肾病组（血脂康组），每组6只。所有动物均于造影剂给药24 h后处死，收集血液和肾脏组织，检测生化、炎症、氧化应激以及病理等相关指标。结果:给予造影剂24 h后，与生理盐水组相比，血脂康组大鼠血肌酐［（59.3±3.3）μmol/L比（73.2±4.1）μmol/L］、血尿素氮［（13.8±0.5）mmol/L比（16.3±0.6）mmol/L］、血清中性粒细胞明胶酶相关脂蛋白（sNGAL）［（41.4±2.0）ng/ml比（54.9±4.4）ng/ml］和尿肾损伤分子1（uKIM-1）［（11.1±0.5）ng/ml比（16.6±0.5）ng/ml］均降低（均 P<0.05）。与生理盐水组比较，血脂康组肾小管扩张、刷状边界丧失和肾小管细胞坏死的程度较轻。进一步的机制研究结果显示，血脂康组氧化应激指标改善，与生理盐水组比较，血脂康组肾丙二醛［（12.1±0.7）nmol/mg比（15.5±0.8）nmol/mg］降低，超氧化物歧化酶［（35.0±2.2）U/mg比（23.7±3.4）U/mg］和肾亚硝酸盐［（1.7±0.1）nmol/mg比（1.2±0.1）nmol/mg］升高（均 P<0.05）。炎症反应水平检测结果显示，与生理盐水组相比，血脂康组肿瘤坏死因子α、白细胞介素6的mRNA和蛋白表达水平均降低（均 P<0.05）。 结论:血脂康可能通过降低氧化应激，抑制炎症反应来减轻糖尿病大鼠造影剂诱导的肾功能不全和组织病理学损伤。

目的:探讨大黄素对早期糖尿病肾病（DN）大鼠足细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法:选取健康雄性SD大鼠40只，按数字表法随机分为对照组10只和实验组30只。对照组大鼠实验过程中采用普通饲料喂养。实验组30只大鼠采用高糖、高脂饮食喂养4周后，一次性腹腔注射链脲佐菌素（40 mg/kg）的方法，制备DN模型，取造模成功的大鼠随机分为DN组和大黄素治疗组（DN+大黄素组）。造模成功后，DN组继续高糖、高脂饮食；DN+大黄素组给予高糖、高脂饮食，联合大黄素（20 mg/kg）灌胃，每天1次，连续8周。各组大鼠在实验14周末观测以下指标：（1）收集24 h尿液，测定24 h尿蛋白量；（2）完成尿液收集后称体质量并记录；（3）处死后取腹主动脉血检测肾肌酐 、尿素氮 、血糖；（4）取左侧肾脏，苏木精-伊红（HE）染色、过碘酸希夫染色（PAS）观察肾脏病理改变，免疫组织化学染色观察Nephrin、Desmin蛋白的表达情况；（5）取右侧肾脏肾皮质部位组织，电镜下观察足细胞及基底膜变化情况。 结果:实验组大鼠30只，DN大鼠模型造模成功24只，实验过程中DN组及DN+大黄素组大鼠各死亡2只。（1）14周末对照组、DN组、DN+大黄素组大鼠体质量分别为（350.1±14.16）、（265.2±7.62）、（312.1±11.77）g，差异有统计学意义（ F=136.50， P<0.001）。（2）对照组肾肌酐 、尿素氮 、血糖、24 h尿蛋白分别为（28.88±4.36）μmol/L、（8.76±0.50）mmol/L、（9.81±0.86）mmol/L、（3.60±0.79）mg；DN组分别为（92.30±7.30）μmol/L、（29.41±6.67）mmol/L、（25.10±4.10）mmol/L、（35.23±4.07）mg；DN+大黄素组分别为（52.10±5.80）μmol/L、（14.93±1.03）mmol/L、（16.51±1.14）mmol/L、（13.35±1.89）mg。与对照组比较，DN组、DN+大黄素组肾肌酐、尿素氮、血糖、24 h尿蛋白量均升高；与DN组比较，DN+大黄素组各项指标均降低：差异均有统计学意义（ P值均<0.01）。（3）HE染色观察肾组织形态学：对照组肾小球及肾小管结构未见异常；DN组肾小球硬化，肾小囊狭窄，部分肾小管上皮细胞空泡变性；DN+大黄素组肾小球硬化及肾小囊狭窄均有改善。（4）PAS染色观察肾小球毛细血管袢、系膜基质变化情况：对照组肾小球毛细血管袢结构清晰可见，系膜基质无异常；DN组肾小球毛细血管袢结构模糊，系膜基质增多；DN+大黄素组肾小球毛细血管袢结构较模糊，系膜基质较多。（5）免疫组织化学检测Nephrin及Desmin蛋白表达情况：与对照组比较，DN组、DN+大黄素组Nephrin蛋白光密度值均降低，Desmin蛋白光密度值均增加；与DN组比较，DN+大黄素组Nephrin蛋白光密度值增加，Desmin蛋白光密度值降低，差异均有统计学意义（ P值均<0.01）。（6）透射电镜观察足细胞和基底膜变化情况：对照组足细胞轻度水肿，足突均匀、等宽排列，未见融合，基底膜完整，厚薄均一，3层结构明显；DN组足细胞呈中度水肿，足突明显融合、变宽，基底膜厚薄均一，3层结构明显；DN+大黄素组足细胞呈轻度水肿，足突融合、变宽情况减轻，基底膜厚薄均一。 结论:大黄素能显著改善早期DN大鼠的体质量、肾脏病理结构及功能，其机制可能与抑制足细胞发生EMT、促进肾病蛋白Nephrin的表达和减少足细胞EMT骨架蛋白Desmin表达有关。

目的:本研究旨在探讨外周血中APC基因DNA甲基化与糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）发生、发展的关系，分析其对基因转录和蛋白表达水平的影响，探讨miRNA135b对APC基因甲基化水平的调控作用。方法:选择2018年3月至2020年3月在浙江大学附属杭州市第一人民医院肾内科的96例DN患者和同期100例健康体检者作为研究对象，分别检测两组APC基因CpG岛甲基化水平、mRNA水平和蛋白表达水平。用三联法构建Sprague-Dawely（SD）大鼠DN模型，分为DN组、miRNA-135b过表达慢病毒组和空载病毒组，将miRNA-135b过表达慢病毒和空载病毒通过尾静脉注射到大鼠体内，1个月后处死大鼠，测定其肾组织中的miRNA-135b的表达水平和APC基因甲基化水平。结果:DN患者的APC-1岛的甲基化水平为（3.05±0.65）%，显著高于健康对照组的甲基化水平（2.34±0.56）%（ t=5.231， P<0.001）；DN患者的APC-2岛的甲基化水平为（1.65±0.37）%，显著高于健康对照组的甲基化水平（1.17±0.29）%（ t=4.381， P<0.001）；Pearson相关分析结果显示，APC-1岛的甲基化水平与血清肌酐和尿酸比值呈显著正相关关系（ P均<0.05），APC-2岛的甲基化水平与尿酸呈显著正相关（ P<0.05）；DN患者APC-1岛的甲基化水平与mRNA相对表达量间呈显著负相关（ r=-0.426， P=0.019）；此外，DN患者的APC-1岛的甲基化水平与APC蛋白水平间呈显著负相关（ r=-0.569， P=0.004）。miRNA-135b在过表达慢病毒组大鼠中的表达均显著高于空载病毒组（ t=5.432， P<0.001）和DN组大鼠（ t=5.812， P<0.001）；miRNA-135b过表达慢病毒组大鼠的APC甲基化水平也均显著高于DN组（ t=6.217， P<0.001）和空载病毒组大鼠（ t=6.446， P<0.001）。 结论:miRNA-135b可能通过上调APC基因DNA甲基化，降低mRNA和蛋白表达水平，从而参与到DN的发生、发展中。

本研究探讨金丝草总黄酮对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其机制，以期为临床治疗糖尿病肾病提供参考。