目的:探讨加味真武汤通过调控miR-377表达水平对糖尿病肾病(DN)细胞炎症水平和免疫功能的影响及分子机制。方法:选取40只SPF级雄性大鼠，对其中30只大鼠进行腹腔注射链脲佐菌素，建立大鼠DN模型，并随机分为模型对照组、加味真武汤低剂量组、加味真武汤高剂量组，每组各10只。同时设置空白对照组(10只)。建立HK-2细胞的DN模型，分为miR-NC+DN组(将miR-NC转染至建模后的HK-2细胞)、miR-377+DN组(将miR-377转染至建模后的HK-2细胞)、anti-miR-NC+DN组(将anti-miR-NC转染至建模后的HK-2细胞)、anti-miR-377+DN组(将anti-miR-377转染至建模后的HK-2细胞)、加味真武汤+miR-NC+DN组(将miR-NC转染至建模后的HK-2细胞，再用高剂量加味真武汤处理)、加味真武汤+miR-377+DN组(将miR-377转染至建模后的HK-2细胞，再用高剂量加味真武汤处理)。采用实时荧光定量PCR检测miR-377表达水平；采用酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平；采用流式细胞仪检测CD4 +、CD8 +和Th1水平。 结果:与空白对照组比较，模型对照组的TNF-α、IL-6、IL-8、CD4 +、miR-377水平升高，CD8 +和Th1水平降低，差异均有统计学意义(均 P<0.001)；与模型对照组比较，加味真武汤低剂量组、加味真武汤高剂量组的TNF-α、IL-6、IL-8、CD4 +、miR-377水平降低，CD8 +和Th1水平升高，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。与miR-NC+DN组比较，miR-377+DN组的TNF-α、IL-6、IL-8水平以及CD4 +水平升高，CD8 +和Th1水平降低(均 P<0.001)；与anti-miR-NC+DN组比较，anti-miR-377+DN组的TNF-α、IL-6、IL-8水平以及CD4 +水平降低，CD8 +和Th1水平升高(均 P<0.001)。与加味真武汤+miR-NC+DN组比较，加味真武汤+miR-377+DN组的TNF-α、IL-6、IL-8水平以及CD4 +水平降低，CD8 +和Th1水平升高(均 P<0.001)。 结论:加味真武汤通过抑制miR-377表达减轻DN细胞炎症水平，增强患者的免疫功能，值得临床推广应用。

目的:观察血清外泌体微小RNA-377(miR-377)在食管癌(EC)中的表达水平，并探讨其临床意义。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测OE33、Eca9706细胞株、5例EC癌组织中miR-377表达水平。选取2016年4月至2019年3月经山东第一医科大学附属济南人民医院确诊并住院治疗的EC患者40例作为观察组，另选取同期本院体检健康者40例作为对照组，RT-qPCR检测血清外泌体中miR-377表达水平。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清血管内皮生长因子(VEGF)水平；采用 χ2检验分析EC患者血清外泌体中miR-377、血清VEGF水平与临床病理特征的关系；Pearson法分析EC患者血清外泌体中miR-377、血清VEGF表达相关性；受试者工作特征(ROC)曲线预测miR-377、VEGF表达水平对EC的诊断价值。 结果:与正常食管上皮细胞株HEEC细胞中miR-377表达水平(1.07±0.20)比较，OE33、Eca9706癌细胞中miR-377表达水平(0.74±0.21和0.68±0.19)显著降低( F＝6.604， P<0.05)；与癌旁组织中miR-377表达水平(1.10±0.23)比较，癌组织中miR-377表达水平(0.69±0.18)显著降低( t＝3.319， P<0.05)；观察组血清外泌体中miR-377表达水平(0.76±0.22)明显低于对照组血清外泌体中miR-377表达水平(1.04±0.25， t＝5.318， P<0.05)，血清VEGF表达水平[(22.79±4.79) pg/ml]明显高于对照组血清VEGF表达水平[(16.71±3.44) pg/ml， t＝6.521， P<0.05)；EC患者血清外泌体中miR-377及血清VEGF表达水平与TNM分期、分化程度和淋巴结转移均有关(miR-377： χ2＝6.172、8.780、13.864， P<0.05；VEGF： χ2＝6.839、5.402、6.114， P<0.05)；EC患者血清外泌体中miR-377与血清VEGF表达呈负相关( r＝-0.641， P<0.05)；血清外泌体中miR-377诊断EC的ROC曲线下面积为0.835(95% CI：0.684~0.933)，灵敏度为69.50%，特异性为88.20%；血清VEGF诊断EC的ROC曲线下面积为0.909(95% CI：0.775~0.977)，灵敏度为89.65%，特异性为76.50%；miR-377联合VEGF诊断EC的ROC曲线下面积为0.949(95% CI：0.829~0.994)，灵敏度为95.70%，特异性为88.21%。 结论:miR-377在EC患者血清外泌体中呈低表达，miR-377与VEG联合检测可有效提高EC诊断率。

目的 研究环状RNA 0072088(circ_0072088)在肝癌细胞及异种移植瘤模型中的生物学功能,并探讨其参与调控肝细胞癌(HCC)发生进展的关键机制.方法 培养人正常肝细胞(THLE-2)和HCC细胞系(Huh-7、Hep G2、Hep 3B),采用 RT-qPCR 方法检测 circ_0072088、miR-377 和含三方基序 23 基因(TRIM23)mRNA 表达水平;Western blot 检测 TRIM23 蛋白表达水平.取 Hep G2 细胞分为 sh-NC 组、sh-circ_0072088 组、mimic NC 组、miR-377 mimic 组,Huh-7 细胞分为 mimic NC 组、miR-377 mimic 组和 circ_0072088+miR-377 mimic 组.分别采用 CCK8 法、克隆形成试验测定各组细胞的增殖能力变化情况;Transwell实验检测迁移能力变化情况;根据circ_0072088与miR-377的结合位点设计并合成了 circ_0072088-WT和circ_0072088-MT双荧光素酶报告质粒,并分别与miR-377 mimic或mimic NC共转染Hep G2细胞后使用双荧光素酶报告试剂盒测量荧光素酶活性;RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)测定Ago2或IgG RIP复合物中circ_0072088和miR-377的富集水平.在异种移植瘤裸鼠模型中探讨circ_0072088的体内功能.结果 circ_0072088在HCC中较瘤旁组织表达上调.与THLE-2细胞比较,HCC细胞系(Huh-7、Hep G2、Hep 3B)circ_0072088的mRNA表达水平升高,差异均有统计学意义(t=13.77、30.11、33.27,P均＜0.001).与sh-NC组比较,Hep G2转染sh-circ_0072088后细胞中circ_0072088 mRNA表达降低,差异有统计学意义(t=23.31,P均＜0.001),细胞增殖活力(48、72 h)、克隆形成能力和迁移能力降低,差异均有统计学意义(t=11.78、8.42、12.64,P均＜0.01),TRIM23蛋白表达水平明显降低.RIP检测结果显示,相对于lgG,circ_0072088(t=60.59)和miR-377(t=35.68)在Ago2免疫沉淀中富集,差异均有统计学意义(P均＜0.001).双荧光素酶检测结果显示,与转染mimic-NC组比较,转染miR-377 mimic组含有circ_0072088-WT质粒细胞的荧光素酶活性降低,差异有统计学意义(t=21.88,P＜0.001).RT-qPCR 及 Western blot 结果显示,与 mimic NC 组相比,miR-377 mimic 组中 TR1M23 mRNA(t=8.45,P＜0.001)和蛋白表达水平明显降低.在异种移植瘤裸鼠模型中,与sh-NC组相比,sh-circ_0072088组移植的肿瘤体积减小,肿瘤组织中circ_0072088和TRIM23 mRNA表达降低,而miR-377 mRNA表达升高,差异有统计学意义(t=8.63、5.56、5.52、11.97,P均＜0.001),TRIM23 的蛋白水平下降.结论 circ_0072088 通过结合 miR-377,间接上调TRIM23的表达,从而促进HCC细胞的增殖和迁移.

目的 探讨急性淋巴细胞白血病患者微小RNA-377(miR-377)和SET及MYND结构域包含蛋白3(SMYD3)表达水平及临床预后意义.方法 选择2016年3月至2020年6月该院收治的135例急性淋巴细胞白血病患者作为观察组,同时选择同期120例体检健康者作为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测研究对象外周血miR-377、SMYD3表达水平.随后比较不同组别、不同临床特征及不同疗效的患者 miR-377、SMYD3表达水平差异,并采用 Kaplan-Meier法和多因素Cox回归模型分析 miR-377、SMYD3与急性淋巴细胞白血病患者预后的关系.结果 观察组miR-377表达水平低于对照组,SMYD3表达水平高于对照组(P<0.05).miR-377高表达组患者的危险度分型,白细胞计数(WBC)(入院时、入院1月后),乳酸脱氢酶(LDH)(入院时、入院1月后),骨髓原幼细胞比例均明显低于miR-377低表达组(P<0.05).SMYD3高表达组患者的危险度分型,WBC(入院时、入院1月后),LDH(入院时、入院1月后),骨髓原幼细胞比例均明显高于SMYD3低表达组(P<0.05).完全缓解(CR)组miR-377、SMYD3表达水平与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),miR-377表达水平从低到高依次为未缓解(NR)组、部分缓解(PR)组、CR组、对照组(P<0.05),SMYD3表达水平从高到低依次为NR组、PR组、CR组、对照组(P<0.05).miR-377高表达组总生存率(65.33%)明显高于 miR-377低表达组(41.67%)(P<0.05),SMYD3高表达组总生存率(41.94%)明显低于SMYD3低表达组(65.75%)(P<0.05).多因素Cox回归模型分析显示,危险度分型、WBC、LDH、骨髓原幼细胞比例、miR-377、SMYD3均为影响急性淋巴细胞白血病患者预后的危险因素(P<0.05).结论 急性淋巴细胞白血病患者miR-377呈低表达水平,SMYD3呈高表达水平,且二者表达水平与患者临床特征、疗效及预后均密切相关,因此可作为评估患者临床预后的有效指标.

目的 观察子痫前期(PE)孕妇胎盘组织中微小RNA-377-3p(miR-377-3p)和血小板凝血酶蛋白1(TH-BS1)的表达变化,分析二者与PE发病的关系.方法 选择PE孕妇65例纳入PE组,其中重度PE 30例、轻度PE 35例;选择同期正常分娩孕妇40例纳入对照组.采用实时荧光定量PCR法检测两组孕妇胎盘组织中的miR-377-3p和THBS1 mRNA,分析miR-377-3p、THBS1 mRNA表达与PE孕妇临床病理参数的关系,采用双荧光素酶实验验证miR-377-3p对THBS1 mRNA的调控作用.结果 PE组孕妇胎盘组织中miR-377-3p表达低于对照组,且轻度患者低于重度患者(P均<0.05);PE组THBS1 mRNA表达高于对照组,且轻度患者高于重度患者(P均<0.05).PE组胎盘组织中miR-377-3p表达与收缩压、舒张压和24 h尿蛋白呈负相关(r分别为-0.339、-0.530、-0.541,P均<0.05),与血小板计数呈正相关(r=0.439,P<0.05);THBS1 mRNA表达与收缩压、舒张压和24 h尿蛋白呈正相关(r分别为0.397、0.306、0.467,P均<0.05),与血小板计数呈负相关(r=-0.289,P<0.05).miR-377-3p与THBS1存在潜在的互补结合位点,miR-377-3p可负向调节THBS1 mRNA表达.结论 PE孕妇胎盘组织中miR-377-3p表达下调、TH-BS1 mRNA表达上调,二者异常表达可能与PE严重程度及妊娠结局有关;miR-377-3p可能通过靶向调控THBS1 mRNA表达影响PE的发生发展.

目的 探讨微小RNA (miRNA)-377对高糖诱导的人肾小球系膜细胞(HMC)增殖和炎性反应的影响,并初步分析其可能的作用机制.方法 细胞分组为正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖)、高糖组(30.0 mmol/L葡萄糖)、阴性miRNA抑制物转染+高糖组、阴性miRNA类似物转染+高糖组、miRNA-377抑制物转染+高糖组(miR-377i+高糖组)、miRNA-377类似物转染+高糖组(miR-377m+高糖组).实时定量PCR检测miRNA-377的表达.BrdU染色及流式细胞术分别检测HMC的增殖及细胞周期.ELISA检测促炎因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-18、IL-6及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的释放.Western印迹评估核因子κB(NF-κB)信号通路的活性,评估指标包括磷酸化(p)-IκBα、p-P65和核内P65.结果 与正常对照组比较,高糖组HMC的细胞活力、miRNA-377表达、细胞增殖率均增加(均P＜0.05),细胞周期中S期、G2期/M期细胞比例增加(均P＜0.05),炎性因子TNF-α、IL-18、IL-6、MCP-1的表达均增加(均P＜ 0.05),胞内p-IκBα/IκBα、p-P65/P65的表达及核内P65水平均升高(均P＜0.05).与高糖组比较,miR-377i+高糖组细胞增殖率降低(P＜0.05),细胞周期中S期、G2期/M期细胞比例均降低(均P＜ 0.05),TNF-α、IL-18、IL-6、MCP-1的表达均减少(均P＜0.05),细胞内p-IκBα/IκBα、p-P65/P65的表达及核内P65水平均降低(均P＜0.05).miR-377m+高糖组与miR-377i+高糖组结果相反(均P＜0.05).结论 miRNA-377表达下调可部分逆转高糖诱导的HMC增殖和周期转换,并可抑制炎性因子的释放.其作用机制可能与抑制NF-κB的活化有关.

目的 探讨人类微小RNA-200c(hsa-miRNA-200c)在卵巢上皮性癌组织中的表达情况,及其与卵巢上皮性癌转移能力的关系.方法 采用茎环实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time Quantitative PCR),检测2010年10月至2011年5月广东省人民医院的73例卵巢上皮性癌、30例良性卵巢上皮肿瘤及30例正常卵巢组织中hsa-miRNA-200c的表达.研究于2017年12月至2018年3月开展.分析hsa-miRNA-200c与临床病理特征的相关性,进一步分层分析73例卵巢上皮癌中13例发生肝转移组、60例非肝转移复发组has-miRNA-200c的表达情况.过表达或敲低hsa-miRNA-200c,检测卵巢癌细胞侵袭迁移能力的变化.结果 卵巢上皮性癌组中hsa-miRNA-200c的相对表达量382.18±15.22均高于良性卵巢上皮性肿瘤组35.61±1.42及正常卵巢组4.43±2.23,差异有统计学意义(P＜0.01),后两组间差异无统计学意义(P＞0.05).hsa-miRNA-200c在临床分期晚期(670.91±16.88 vs.129.52±33.3,P＜0.035)、淋巴结转移阳性(529.54±75.24vs.175.85±49.80,P＜ 0.004)和发生远处转移的卵巢上皮性癌中低表达,其中在发生肝转移的卵巢癌组织中显著低表达(377±15.31 vs.28.22±9.14,P＜0.009).在预后较好的子宫内膜样卵巢癌组中高表达(浆液性353.89±12.51 vs.黏液性267.93±11.43 vs.子宫内膜样腺癌802.41±31.53,P＜0.05),与其他病理类型及组织分化程度无关(P＞0.05).transwell小室侵袭实验显示,hsa-miRNA-200c与卵巢癌细胞侵袭迁移能力呈负相关(P＜0.01).结论 hsa-miRNA-200c在卵巢上皮性癌的发生发展中可能具有双重调节的作用,其低表达与晚期卵巢上皮性癌、淋巴结转移、肝转移和不良预后密切相关.

目的 探讨微小RNA-377(miRNA-377)过表达对胶质母细胞瘤细胞增殖、凋亡、迁移的影响,并探讨其作用机制.方法 常规培养胶质母细胞瘤细胞系A172、U373、U87、U251及正常脑胶质细胞系HEB.用qRT-PCR法检测细胞中miR-377的表达.将U251细胞随机分为miR-377组、miR-CON组及Blank组,分别转染miR-377mimics、Scramble及空白对照,用qRT-PCR法检测转染效率.用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术测定细胞凋亡能力,用细胞划痕实验检测细胞迁移能力.用Western blotting法检测细胞内组蛋白去乙酰化酶9(HDAC9)和E26转录因子1(ETS-1)蛋白表达.结果 转染24h,miR-377组miR-377相对表达量高于miR-CON组、Blank组(P均＜0.05),转染成功.与miR-CON组、Blank组比较,转染72、96 h miR-377组细胞增殖能力低(P均＜0.05),细胞凋亡率高(P均＜0.05),细胞划痕愈合率低(P均＜0.05).miR-377组HDAC9、ETS-1蛋白相对表达量均低于miR-CON组、Blank组(P均＜0.05).结论 miR-377过表达可抑制胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移,并促进其凋亡,其机制可能与下调HDAC9、ETS-1蛋白表达有关.

目的:研究微小RNA-377(miR-377)介导脾酪氨酸激酶(Syk)对基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化病变的影响.方法:将实验对象分为对照组(ApoE-/-小鼠)、miR-377组(注入miR-377的ApoE-/-小鼠)、Syk组(注入Syk的ApoE-/-小鼠)和Syk+miR-377组(注入miR-377和Syk的ApoE-/-小鼠).通过制备miR-377和Syk质粒注入到ApoE-/-小鼠,通过qPCR和Western blot检测ApoE-/-小鼠Syk mRNA和蛋白的表达,检测炎症因子和脂质、氧化物歧化酶的水平.通过HE染色和油红O染色检测miR-377对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化主动脉斑块和表面积的影响.结果:miR-377组的Syk mRNA相对表达明显低于对照组,miR-377组的Syk蛋白水平表达明显低于对照组.Syk组TNF-α水平明显低于对照组和miR-377组.miR-377组的1L-6水平明显高于对照组,Syk组和miR377+Syk组低于对照组.miR-377组的1L-1β水平明显低于对照组.miR-377组的TC水平明显低于对照组,Syk组的1L-1β水平高于对照组和miR-377组.miR-377组的LDL水平明显低于对照组,miR-377组的HDL水平明显低于对照组,Syk组的HDL水平明显高于对照组和miR-377组.miR-377组SOD的水平明显高于对照组.对照组、Syk组有明显的主动脉斑块,经过miR-377处理过的miR-377组和miR377+Syk组未见明显的主动脉斑块.miR-377处理的ApoE-/-小鼠,动脉粥样硬化斑块面积显著减少.syk处理的ApoE-/-小鼠斑块面积增加.对照组的硬化斑块面积/总面积之比为25.63％,miR-377组中为7.81％,Syk组为35.19％,Syk+miR-377组为9.73％.结论:Syk基因的过表达会导致动脉粥样硬化细胞脂质的积累和氧化应激的增加,miR-377能够通过抑制Syk基因的表达来调控动脉粥样硬化的发展.

目的:有研究表明微小循环RNA(miRNA)在循环中高度稳定,并且可以用作生物标志物以改善疾病诊断和管理.本研究评估4种与前列腺癌(PCa)相关的miRNA鉴别前列腺癌和前列腺增生(BPH)的效果.方法:选取2016年1～12月入我院诊断为PCa患者40例(PCa组),BPH患者40例(BPH组),另外招募30例健康受试者(健康对照组).逆转录-定量聚合酶链反应用于评估外周血样品中的miRNA表达.结果:与BPH组和健康对照组患者相比,在PCa组患者中观察到miR-15a、miR-126、miR-192和miR-377的表达显著降低(P＜0.05).结论:本研究表明这些miRNA在血液循环中的表达可能是有希望的、非侵入性的生物标志物用于检测PCa,但在更大的队列中进一步验证这些结果的临床实施是有必要的.