目的:探讨鞘氨醇-1-磷酸转运体2(SPNS2)和富含亮氨酸重复单位的G蛋白偶联受体5(Lgr5)在喉鳞状细胞癌中的表达及其与临床病理特征和预后的关系。方法:收集2012年3月至2016年3月江苏省泰兴市人民医院82例喉鳞状细胞癌患者术后石蜡标本，采用免疫组织化学法检测82例癌组织及50例癌旁正常组织中SPNS2、Lgr5的表达状态，分析SPNS2、Lgr5的表达与患者临床病理特征及预后的关系。结果:喉鳞状细胞癌组织SPNS2高表达率为40.24%(33/82)，高于癌旁正常组织的8.00%(4/50)，癌组织Lgr5高表达率为46.34%(38/82)，高于癌旁正常组织的12.00%(6/50)，差异均有统计学意义( χ2＝16.008， P<0.001； χ2＝16.484， P<0.001)。SPNS2表达状态与肿瘤大小( χ2＝5.713， P＝0.017)、肿瘤分期( χ2＝7.071， P＝0.008)、肿瘤分化程度( χ2＝5.722， P＝0.017)及淋巴结转移( χ2＝6.595， P＝0.010)有关。Lgr5表达状态与肿瘤分期( χ2＝8.200， P＝0.004)、肿瘤分化程度( χ2＝9.435， P＝0.002)以及淋巴结转移( χ2＝16.188， P<0.001)有关。SPNS2低表达组患者的3年总生存率为90.91%，显著高于SPNS2高表达组的71.43%( χ2＝4.975， P＝0.026)。SPNS2低表达组患者的3年无进展生存率为78.79%，显著高于SPNS2高表达组的55.10%( χ2＝6.113， P＝0.013)。Lgr5低表达组患者的3年总生存率为86.84%，显著高于Lgr5高表达组的65.91%( χ2＝5.801， P＝0.016)；Lgr5低表达组患者的3年无进展生存率为78.95%，显著高于Lgr5高表达组的56.82%( χ2＝6.316， P＝0.012)。多因素Cox回归分析显示，分化程度( RR＝0.199，95% CI为0.057～0.691， P＝0.011)、肿瘤分期( RR＝0.167，95% CI为0.053～0.531， P＝0.002)、SPNS2( RR＝0.208，95% CI为0.072～0.604， P＝0.004)、Lgr5( RR＝0.198，95% CI为0.060～0.655， P＝0.008)是影响喉鳞状细胞癌患者预后的危险因素。列联相关分析显示，SPNS2和Lgr5在喉鳞状细胞癌组织中的表达呈正相关( C＝0.591， P<0.001)。 结论:SPNS2和Lgr5在喉鳞状细胞癌组织中显著高表达，与临床病理特征密切相关，且二者均是影响喉鳞状细胞癌患者预后的危险因素。

IBD与遗传易感、免疫失调、肠上皮机械屏障破损、肠道微生态失调和环境因素刺激五大因素相关。肠上皮构成的体内与体外机械屏障破损作为IBD发病机制的五大因素之一，又与其他四大因素相互关联；肠上皮修复、黏膜愈合是IBD治疗的目标。肠上皮在IBD的发病和治疗中均有重要作用。2009年，源自富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5阳性肠道干细胞的肠道类器官3D培养系统诞生，为IBD肠上皮的研究提供了良好的体外模型。现阐述肠道类器官的起源，并总结该技术在IBD研究中的应用与进展。

目的 本文旨在研究在损伤肝组织中,特异性顶部盘状底板反应蛋白 3(R-spondin3,Rspo3)上调周细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin,Ncad,基因名 Cdh2)表达,从而参与小鼠肝损伤.方法 采用反转录实时定量聚合酶链反应法(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)测定 Rspo3,小鼠肝组织富含亮氨酸重复序列 G 蛋白偶联受体 5(leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 5,Lgr5)和Cdh2 mRNA表达情况;采用蛋白质免疫印迹方法 以及免疫荧光染色方法 测定Ncad定位以及表达情况;分离并培养小鼠原代骨髓间充质细胞(bone marrow mesenchymal stromal cell,BMSC),采用靶向Lgr5 的RNA干扰实验以确定Rspo3 是否通过作用于Lgr5 上调Ncad表达.结果 在损伤小鼠肝组织中,Rspo3 及其受体Lgr5 显著上调;肝损伤时黏附连接蛋白Ncad表达上调,且与Rspo3 及Lgr5 表达量呈正相关;Ncad主要定位于损伤肝脏的周细胞;使用Rspo3 处理小鼠原代BMSC能够上调Ncad表达,Lgr5 siRNA能使Ncad水平下降.结论 在小鼠损伤肝组织中,Rspo3通过作用于受体Lgr5,上调周细胞中Ncad表达,从而影响小鼠肝损伤.

目的 探讨联合检测外周血CD59,血富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体 5(leucine-repeat-rich G-protein coupled receptor 5,LGR5)和细胞角蛋白 7(cytokeratin 7,CK7)对宫颈癌前病变进展风险的预测价值.方法 回顾性分析2019年1月～2022年1月西安市第三医院收治的342例宫颈癌前病变患者的临床资料,根据病情进展情况分为宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasias,CIN)Ⅰ组(n=89),CINⅡ组(n=128),CIN Ⅲ组(n=65)和宫颈癌组(n=60).统计四组一般资料,CD59,LGR5 和CK7,Logistic回归方程分析癌前病变进展至宫颈癌影响因素,绘制决策分析(decision curve analysis,DCA)曲线分析CD59,LGR5和CK7联合临床获益度,绘制临床影响曲线(clinical impact curve,CIC)分析在各个阈概率下,CD59,LGR5 和CK7 联合预测价值与实际情况符合度.结果 宫颈癌组、CIN Ⅲ组、CINⅡ组和CINⅠ组患者HPV感染率(50.00%,7.70%,1.56%,0.00%)及外周血CD59蛋白(55.35%±6.38%,46.17%±5.12%,42.24%±4.13%,38.35%±4.02%),LGR5基因(0.91±0.25,0.38±0.08,0.25±0.06,0.15±0.04),CK7 基因(10.12±3.04,7.96±1.55,7.12±1.48,6.50±1.36)表达水平比较,宫颈癌组＞CIN Ⅲ组＞CINⅡ组＞CINⅠ组,差异具有统计学意义(χ2=118.290,F=165.265,567.350,51.982,均P＜0.05);Logistic回归显示,CD59(OR:3.483,95%CI:1.614～7.518),LGR5(OR:5.241,95%CI:2.689～10.214),CK7(OR:4.078,95%CI:1.461～11.742)水平是癌前病变患者进展至宫颈癌的高危因素(P＜0.05);DCA曲线显示,在 0.1～0.45 范围内,LGR5,CK7 和CD59 联合应用具有更高临床获益度;CIC曲线显示,横轴从 0.4 后,LGR5,CK7 和CD59 联合预测价值与实际情况具有较高的符合率.结论 LGR5,CK7 和CD59 是影响癌前病变进展至宫颈癌高危因素,三者联合或可成为预测患者临床获益有效方案,有利于减少宫颈癌发生,增加患者净获益.

目的 探讨白头翁汤对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠黏液屏障的保护作用以及对Notch通路的影响.方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、美沙拉嗪(50mg/kg)组和白头翁汤低、高剂量(7.4、14.8 g/kg)组,对照组小鼠自由饮用纯净水,其余各组连续8 d自由饮用2.5％DSS溶液诱导UC模型,造模同时各给药组ig相应药物.每日记录小鼠体质量、粪便稠度以及血便情况;采用苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理变化;采用AB-PAS染色观察结肠组织黏蛋白2(mucin2,MUC2)的分泌情况;ELISA法检测结肠组织中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性及促炎因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和抗炎因子IL-10的含量;免疫组化法检测结肠组织Ki67的表达情况;免疫荧光法测定结肠组织富含亮氨酸重复序列的 G 蛋白偶联受体 5(leucine-rich repeat-containing G-protein-coupled receptor 5,Lgr5+)肠道干细胞(intestinal stem cells,ISCs)阳性细胞数;Western blotting 测定结肠组织 Notch-1、Atoh1、Hes1 和 MUC2 蛋白表达.结果 与模型组比较,白头翁汤能够缓解DSS诱导的UC小鼠体质量降低和疾病活动指数(disease activity index,DAI)升高(P＜0.05、0.01、0.001),缓解结肠组织的缩短、水肿以及病理学损伤(P＜0.01、0.001),减少炎性细胞浸润、隐窝的破坏与杯状细胞的丢失,降低结肠组织MPO活性和IL-1β、TNF-α水平(P＜0.05、0.01),升高IL-10水平(P＜0.05),增加结肠组织Ki67阳性细胞数(P＜0.01),促进MUC2的分泌和Lgr5+ISCs的阳性细胞数,并下调Notch和Hes-1蛋白表达水平(P＜0.05、0.001),上调Atoh1和MUC2蛋白表达水平(P＜0.05、0.01).结论 白头翁汤能够降低UC小鼠结肠组织促炎细胞因子水平,增加Lgr5+ISCs的增殖和分化,保护隐窝和杯状细胞结构,促进MUC-2分泌,其作用可能与调控Notch-1/Atoh1/Hes1通路密切相关.

目的 探讨shRNA干扰富含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5(Lgr5)的表达对结直肠癌肿瘤干细胞(CSCs)恶性行为的影响及其作用机制.方法 采用实验研究方法.流式细胞术分选Lgr5+结直肠癌CSCs,转染shLgr5慢病毒载体设为实验组;转染相应对照病毒,设为对照组.流式细胞术检测Lgr5+细胞比例,荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Lgr5 mRNA的相对表达量;成球实验检测细胞自我更新能力变化;平板克隆形成实验及裸鼠皮下成瘤实验分别检测体内外成瘤能力变化;qRT-PCR检测细胞中干细胞基因(Oct4、Sox2、Nanog、KLF4)、CSCs基因(CD133、CD44、ALDH)及Wnt/β-catenin信号通路关键基因(Axin2、Wnt5a、Wnt3a、Fzd3、c-myc、VEGF、Ascl2、claudin-1) mRNA表达变化.正态分布的计量资料以-x±s表示,组间比较采用t检验.结果 (1) shRNA慢病毒介导转染效率,流式细胞术检测结果显示:实验组Lgr5+细胞为6.8％±1.0％,对照组为92.7％±3.3％,两组比较,差异有统计学意义(t=43.148,P＜0.05).qRT-PCR检测两组CSCs中Lgr5 mRNA相对表达量:实验组和对照组分别为0.168±0.057和1.148±0.004,两组比较,差异有统计学意义(t=28.778,P＜0.05).(2) Lgr5下调对结直肠癌CSCs成球和成瘤能力的影响,成球实验结果显示:实验组和对照组成球数量分别为(29±6)个和(410±10)个,两组比较,差异有统计学意义(t=41.070,P＜0.05).平板克隆成瘤实验结果显示:实验组和对照组克隆成瘤数量分别为(72±4)个和(412±19)个,两组比较,差异有统计学意义(t=31.433,P＜0.05).裸鼠皮下成瘤实验结果显示:实验组和对照组裸鼠肿瘤体积分别为(81±15)mm3和(328±24) mm3,两组比较,差异有统计学意义(t=11.304,P＜0.05).(3) Lgr5下调对相关基因的影响,qRT-PCR检测结果显示:①实验组结直肠癌CSCs中干细胞基因Oct4、Sox2、Nanog、KLF4 mRNA的相对表达量分别为0.377±0.093、0.662±0.104、3.591±0.300、0.425±0.091;对照组结直肠癌CSCs中上述基因mRNA的相对表达量分别为1.957±0.026、2.137±0.015、5.831±0.165、1.536±0.014;两组上述指标比较,差异均有统计学意义(t=23.079,22.261,8.446,19.186,P＜0.05).②实验组结直肠癌CSCs中CSCs基因CD133、CD44、ALDH mRNA相对表达量分别为1.490±0.155、5.535±0.487、1.640±0.039;对照组结直肠癌CSCs中上述基因mRNA的相对表达量分别为2.488±0.061、9.908±0.332、5.718±0.292;两组上述指标比较,差异均有统计学意义(t=8.170,9.667,27.849,P＜0.05).③实验组结直肠癌CSCs中Wnt/β-catenin通路相关基因Axin2、Wnt5a、Wnt3a、Fzd3、c-myc、VEGF、Ascl2、claudin-1 mRNA相对表达量分别为1.592±0.267、0.528±0.138、2.153±0.078、1.480±0.064、0.248±0.128、1.492±0.025、0.658±0.095、1.647±0.087;对照组结直肠癌CSCs中上述基因mRNA的相对表达量分别为3.651±0.224、2.570±0.093、2.301±0.157、1.636±0.058、1.415±0.080、2.610±0.159、2.480±0.123、3.432±0.273;两组结直肠癌CSCs中Axin2、Wnt5a、c-myc、VEGF、Ascl2、claudin-1比较,差异均有统计学意义(t=7.316,15.332,12.649,12.320,14.831,9.063,P＜0.05).两组结直肠癌CSCs中Wnt3a、Fzd3比较,差异均无统计学意义(t=2.887,2.242,P＞0.05).结论 shRNA干扰结直肠癌CSCs中Lgr5表达后,细胞的恶性行为受到抑制,这种作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin通路活性发挥生物学效应.

目的 探讨富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(LGR5)对宫颈癌细胞上皮间质转化的影响及潜在机制.方法 采用前瞻性研究,以宫颈癌细胞Hela为研究对象,构建过表达和敲低LGR5的细胞株,RT-PCR和West-ern blot检测LGR5表达.将转染pcDNA3.1-LGR5的Hela细胞作为LGR5组,以转染pcDNA3.1空载体的细胞记为pcDNA3.1组;将转染LGR5 siRNA细胞作为siLGR5组,以转染阴性对照siRNA细胞记为NC组.Western blot分别检测各组细胞中上皮间质标记物钙黏附蛋白E(E-cadherin)、钙黏附蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及Wnt/β-cadherin通路蛋白β链蛋白(β-catenin)和下游蛋白c-Myc、细胞周期蛋白(Cyclin D1)表达变化.Transwell实验检测各组细胞迁移侵袭能力变化.结果 Hela细胞中成功过表达和敲低了LGR5;与pcDNA3.1组相比,Hela细胞转染pcD-NA3.1-LGR5后细胞中上皮标志物E-cadherin表达显著降低(P <0.05),间质标记物vimentin、N-cadherin表达显著增加(P <0.05).与NC组相比,Hela细胞转染siLGR5后细胞中E-cadherin表达明显增加(P <0.05),vimentin、N-cadherin表达明显下降(P <0.05).与pcDNA3.1组相比,Hela细胞过表达LGR5后细胞迁移侵袭能力、Wnt/β-cate-nin通路蛋白β-catenin及其下游基因c-Myc、Cyclin D1表达均显著增加(P <0.05);而Hela细胞沉默LGR5后较NC组细胞迁移侵袭能力、Hela细胞中β-catenin、c-Myc和Cyclin D1表达均明显降低(P <0.05).结论 过表达LGR5能够促进宫颈癌细胞Hela上皮间质转化和侵袭迁移,而干扰LGR5则抑制了细胞上皮间质转化和迁移侵袭,其中机制可能与LGR5调控Wnt/β-catenin信号转导有关.

目的 探讨高氧治疗对不同日龄新生大鼠肠道干细胞(ISCs)的B-淋巴瘤莫洛尼氏鼠白血病病毒插入区-1(Bmi1)和富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体5(Lgr5)表达的影响.方法 将新生大鼠随机分为对照组和高氧组(85％O2),在不同日龄(3、7、10和14 d)将其处死,收集肠道标本,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、免疫组织化学法和蛋白免疫印迹(Western blot)检测ISCs的Bmi1和Lgr5的表达.结果 与对照组相比,高氧组Bmi1和Lgr5的mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05).结论 在高氧环境中新生大鼠ISCs的Bmi1和Lgr5表达水平下降,可能是高氧损伤肠道的根源.

目的 探讨子宫内膜癌患者人表皮生长因子受体-2 (HER2)、富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5(LGRS)表达与临床病理特征的关系.方法 选取2013年10月-2014年10月该院接诊的40例子宫内膜癌患者作为观察组,另选取同期在该院行诊刮术的40例正常子宫内膜组织患者作为对照组.收集所有患者手术切除病理组织制作石蜡切片,采用免疫组织化学法观察子宫内膜癌组织中HER2、LGR5染色结果,并分析其与临床病理特征之间的关系.结果 观察组患者HER2及LGR5阳性率均高于对照组(P＜0.05).子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织中HER2、LGR5与年龄、病理分型、组织学分级、宫颈累及情况无关(P＞0.05);但与淋巴结转移、FIGO分期及肌层浸润之间存在密切关系(P＜0.05).Spearman相关分析结果显示,HER2、LGR5的表达与淋巴结转移、FIGO分期及肌层浸润之间呈正相关关系(P＜0.05).3年随访中,HER2、LGR5阳性子宫内膜癌患者死亡率均显著高于阴性患者(P＜0.05).结论 子宫内膜癌患者内膜组织中HER2、LGR5表达上调,与淋巴结转移、FIGO分期及肌层浸润之间关系密切,其参与疾病的发生与发展,有望成为临床诊断、治疗子宫内膜癌的重要标志物.

角膜内皮细胞(CECs)对于维持角膜透明至关重要.成年人的CECs在体内不可进行有丝分裂,损伤后不可再生.体外培养的人CECs可进行有丝分裂,但是体外培养的人CECs传代后形态易趋向于成纤维细胞改变且标志性蛋白表达减少,发生角膜内皮细胞间质转化(EndMT),成为体外培养CECs发展角膜再生医学的阻碍.同时,体内EndMT也参与到多种角膜病理改变,造成视力下降,甚至致盲,但是其发生机制尚未完全阐明.目前研究发现,CECs EndMT的机制可能涉及转化生长因子-β(TGF-β)信号通路、成纤维细胞生长因子(FGF)家族细胞因子、Notch信号通路.因此,相应的抑制角膜EndMT的方法有抑制TGF-β信号通路、使用PI3K抑制剂、应用小干扰RNA(siRNA)干扰p120、使用富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5(LGR5)及其配体、使用Notch信号传导抑制剂、敲低connexin43、使用基质金属蛋白酶抑制剂以及使用抗坏血酸-2-磷酸(Asc-2P).本文就角膜EndMT的发生机制、间质转化抑制或逆转方法的研究进行综述.