目的 探讨粪肠球菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)对巨噬细胞免疫检查点——细胞程序性死亡蛋白配体 1(pro-grammed cell death protein ligand 1,PD-L1)表达的影响及调控机制.方法 用不同浓度 LTA 刺激小鼠单核巨噬细胞系(RAW264.7)建立体外模型,利用流式细胞术、qRT-PCR、蛋白免疫印迹、细胞免疫荧光检测PD-L1 表达与核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65 磷酸化水平;NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082 预处理巨噬细胞,通过以上方法进一步检测PD-L1、p65 磷酸化表达变化.结果 LTA可明显诱导RAW264.7 细胞中PD-L1 表达,提高p65 磷酸化水平(P＜0.05);抑制NF-κB信号通路后,p65 磷酸化水平明显降低,同时PD-L1 表达减少(P＜0.05).结论 LTA可促进PD-L1 在巨噬细胞中的表达,该过程受到NF-κB信号通路的调控,为进一步理解慢性根尖周炎发病机制及其治疗提供了新思路.

背景:慢性根尖周炎根尖区发生不同程度的骨吸收及炎性肉芽组织,研究表明RANK-RANKL-骨保护素信号通路被认为是调节骨吸收的关键通路.目的:检测RANKL在小鼠根尖周炎中的表达及作用.方法:C57BL/6J小鼠分为正常对照组和实验组,实验组将双侧下颌第一磨牙直接开髓,暴露于口腔环境中,建立小鼠根尖周炎模型,分别在建模后1,2,3,4周收集下颌骨组织,苏木精-伊红染色观察根尖周组织的变化,免疫组织化学染色检测各时间点RANKL的表达情况.结果与结论:①苏木精-伊红染色显示,成功建立了小鼠慢性根尖周炎动物模型.正常对照组小鼠下颌第1磨牙根尖区仅有少数炎性细胞,牙周组织完整;术后1-4周,实验组根尖周组织炎性细胞不断增多,浸润范围逐渐变大,牙槽骨破坏逐渐增多;②免疫组织化学染色显示,实验组各时间点RANKL的表达量较正常对照组明显升高(P<0.05),术后1,2周RANKL的表达量明显增加(P<0.05),术后3周表达量持续增加,4周时表达量降低(P<0.05);③结果表明,实验成功建立小鼠慢性根尖周炎模型,RANKL在小鼠慢性根尖周炎中的表达量较高且具有明显趋势,可能对小鼠慢性根尖周炎的进展及骨破坏起促进作用.

背景:研究表明,抑制BTK-PLCγ2-Ca2+信号通路,破骨细胞的形成和功能受到抑制,说明PLCγ2参与了破骨细胞的形成和分化.目的:通过建立野生型小鼠慢性根尖周炎模型,观察PLCγ2在小鼠实验性根尖周炎组织中的表达.方法:选用20只C57BL/6L野生型雄性小鼠,随机选取16只为实验组行双侧下颌第1磨牙开髓术,并将开髓后的髓腔暴露于口腔环境,诱导形成根尖周炎病损.分别于开髓后1,2,3和4周各随机处死4只小鼠,分离下颌骨.剩余4只不开髓作为空白对照,0周时处死后分离下颌骨.制作冰冻切片后用苏木精-伊红染色方法观察小鼠根尖组织炎症情况,免疫组织化学染色检测PLCγ2的表达与分布情况,酶组织化学染色检测根尖组织炎症区域破骨细胞的表达.结果与结论:①苏木精-伊红染色结果:对照组小鼠下颌第1磨牙牙周组织几乎无炎性细胞浸润;实验组1-4周,下颌第1磨牙牙周组织炎性细胞浸润范围越来越大,牙槽骨破坏也逐渐增多,说明成功建立了小鼠根尖周炎模型;②免疫组织化学染色结果:发现PLCγ2在小鼠根尖周炎的0-4周都有表达;对照组根尖周组织中仅有少量PLCγ2的表达;实验组1-4周PLCγ2阳性表达随炎症细胞浸润范围的逐渐扩大而增长(P<0.05);③TRAP染色结果:对照组根尖牙周组织中几乎不能观察到破骨细胞;实验组1周,可观察到少量的多核破骨细胞;实验组2周,破骨细胞的数量持续增多;实验组3周达到峰值;实验组4周破骨细胞数量逐渐减少;与对照组相比差异均有显著性意义(P<0.05);④相关性分析:TRAP阳性细胞计数值和PLCγ2阳性细胞计数之间有显著相关性(r=0.627,P<0.001);⑤结果说明,PLCγ2在小鼠根尖周组织中有表达,提示其可能与根尖周炎症反应和骨吸收作用相关.

背景:根尖周炎的主要表现为骨破坏和形成炎症性肉芽组织,研究发现丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)可促进破骨细胞分化.目的:观察AKT在小鼠实验性根尖周炎组织中的表达变化.方法:选用25只C57BL/6J野生型雌性小鼠,通过双侧下颌第一磨牙开髓后将髓腔暴露于口腔中的方法,建立小鼠根尖周炎动物模型.将5只未开髓的小鼠作为健康对照组,其余20只作为实验组,开髓后1,2,3,4周每周随机处死5只小鼠,分离下颌骨,制作冰冻切片.采用苏木精-伊红染色,观察小鼠根尖组织炎症情况;采用免疫组织化学染色,观察AKT的表达与分布情况;采用酶组织化学染色,观察根尖组织破骨细胞的表达,并分析AKT与破骨细胞表达的相关性.结果与结论:①苏木精-伊红染色结果显示:健康对照组小鼠根尖周围组织仅见少量炎性细胞,牙周组织完整;开髓术后1周,根尖周组织牙周膜有少量增宽,有小范围的中性粒细胞浸润;开髓术后2周,牙周膜宽度明显增大,根尖周围组织可见大量的中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞浸润,出现了明显牙槽骨吸收;开髓术后三四周,炎症范围继续扩大,主要为淋巴细胞浸润,牙槽骨的吸收范围更加明显,牙周膜宽度继续增宽;说明小鼠慢性根尖周炎动物模型建立成功;②AKT免疫组织化学染色结果显示:健康对照组仅有少量阳性细胞表达;实验组AKT的表达量在开髓后1周时开始增多;开髓后2周时达到高峰;三四周时数目下降;各实验组AKT阳性细胞数均高于健康对照组,1周与4周之间相比差异无显著性意义(P>0.05),其余各组间差异均有显著性意义(P<0.05);③酶组织化学染色结果显示:破骨细胞数目随着时间延长而呈现一定的趋势,在开髓后二三周时达到高峰;4周时下降;AKT吸光度值与破骨细胞计数值之间存在中度相关性(r=0.634,P<0.001);④提示AKT在小鼠慢性根尖周炎中有表达,且表达增高;AKT参与了慢性根尖周炎的疾病过程,并可能对根尖周炎骨破坏起促进作用.