目的:评价腕踝针对七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍及海马磷酸化磷脂酶Cγ(p-PLCγ)表达的影响。方法:SPF级健康老龄雄性SD大鼠15只，18月龄，体质量530～600 g，采用随机数字表法分为3组( n＝5)：假手术组(S组)、认知功能障碍组(CD组)和腕踝针组(A组)。采用吸入3%七氟烷与空气混合气体的方法制备大鼠认知功能障碍模型，A组麻醉前取右侧后肢下1-3区行腕踝针，针刺时间30 min，S组行假刺激。2 d后采用Morris水迷宫实验评价大鼠认知功能，随后麻醉大鼠处死取海马组织，HE染色和尼氏染色法观察病理学结果，采用Western blot法检测p-PLCγ、磷酸化钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(p-CaMKⅡ)和磷酸化肌醇-1，4，5-三磷酸受体(p-IP3R)的表达。 结果:与S组比较，CD组和A组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，海马p-PLCγ、p-CaMKⅡ和p-IP3R表达上调( P<0.05)；与CD组比较，A组逃避潜伏期缩短，穿越原平台位置次数增加，海马p-PLCγ、p-CaMKⅡ和p-IP3R表达下调( P<0.05)。A组大鼠海马病理学损伤程度较CD组减轻。 结论:腕踝针可减轻七氟烷诱发老龄大鼠认知功能障碍，机制与其抑制海马p-PLCγ表达有关。

目的:分析靶向乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的嵌合抗原受体(CAR)-T细胞对表达HBsAg的肝癌细胞的杀伤作用。方法:构建HBsAg-CAR基因，通过慢病毒载体将其转导入T细胞(健康捐献者的血液中获取)，制备HBsAg-CAR-T细胞。制备CD19-CAR-T细胞作为Mock组，未转导的T细胞为Untransduced组。上述三种效应细胞分别与肝癌细胞共同培养，检测三组细胞对肝癌细胞的杀伤作用及抗肿瘤细胞因子(肿瘤坏死因子-α、干扰素-γ、白细胞介素2等)释放水平。建立免疫缺陷NPG小鼠PLC/PRF/5肝癌皮下成瘤模型，随机分组，尾静脉注射HBsAg-CAR-T细胞(实验组， n＝5)或未转导的T细胞(对照组， n＝5)，注射后第15天测量肿瘤体积。 结果:体外培养过程中，HBsAg-CAR-T细胞具有较高的增殖能力及存活率，CAR的表达稳定。与表达HBsAg的肝癌细胞共培养后，HBsAg-CAR-T组释放的抗肿瘤细胞因子明显高于Mock组及Untransduced组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；HBsAg-CAR-T组对HBsAg表达阳性的肝癌细胞的杀伤率明显高于Mock组及Untransduced组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。实验组NPG小鼠肿瘤体积为(250.8±62.8)mm 3，低于对照组小鼠肿瘤体积(757.5±102.6)mm 3，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:HBsAg-CAR-T细胞能够特异性识别并杀伤HBsAg阳性肝癌细胞，并释放高水平的抗肿瘤细胞因子。

慢性淋巴细胞白血病（CLL）/小淋巴细胞淋巴瘤（SLL）在西方发病率高，是成人最常见的白血病，我国的发病率低于西方，但呈不断增长趋势。小分子靶向药物布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）抑制剂（BTKi）、促凋亡蛋白Bcl-2抑制剂（BCL-2i）维奈克拉（Ven）等治疗CLL/SLL具有疗效好、不良反应小、口服方便等特点 [1,2,3,4]，显著优于传统化学免疫治疗，CLL治疗逐渐进入以BTKi为代表的无化疗时代 [3]。我国已批准第一代BTKi伊布替尼及国产第二代BTKi泽布替尼、奥布替尼治疗CLL。BTKi单药治疗CLL缓解率高、生存期长，但由于缓解深度不高，很少达到完全缓解（CR），微小残留病（MRD）阴性者更少，所以BTKi单药需要长期治疗，长期治疗存在以下缺陷：经济负担、耐药相关的克隆演变、依从性差等。目前报道BTKi的主要耐药机制为BTK和磷脂酶C-γ2（PLC-γ2）基因突变等 [5,6]。由于BTKi单药治疗的局限性，在既往疗效评估标准上结合以MRD阴性为治疗目标的新药联合或新药与传统化学免疫治疗（CIT）联合的固定周期治疗正逐渐成为研究的热点 [6,7,8,9]。本研究分析报道本中心BTKi联合苯达莫司汀、利妥昔单抗（BR）方案一线治疗CLL/SLL的疗效及安全性。

目的 研究牛至挥发油(Origanumvulgare volatile oil,OVO)抗外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,WC)的作用及机制.方法 体外实验评价OVO对白色念珠菌的抑菌效果.建立VVC小鼠模型,给予OVO干预后,检测小鼠阴道灌洗液中炎症因子含量,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色、PAS染色及扫描电镜观察阴道组织的病理变化,Western blotting检测阴道组织Dectin-1信号通路相关蛋白的表达情况.结果 在体外抑菌实验中,OVO对白色念珠菌的抑菌圈直径为(24±2)mm,最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为 1.95 mg/mL;OVO 明显抑制了白色念珠菌的生物膜形成、疏水性及黏附性(P＜0.05、0.01).在动物实验中,与模型组比较,OVO组小鼠阴道冲洗液中菌落数和肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-17、IL-22 含量显著减少(P＜0.05、0.01、0.001),阴道组织上皮角化、炎细胞浸润及真菌负荷量明显减少,阴道组织中树突状细胞相关性C型凝集素-1(dendritic cell-associated C-type lectin 1,Dectin-1)、脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)、磷脂酶-Cγ2(phospholipase-Cγ2,PLCγ-2)、胱天蛋白酶募集域蛋白 9(caspase-associated recruitment domain-containing protein 9,CARD9)、磷酸化核因子-κB p65(phosphorylated nuclear factor-KB p65,p-NF-κB p65)蛋白表达水平明显降低(P＜0.05、0.01).结论 OVO可能通过抑制小鼠阴道组织中的炎症反应来改善WC,并有望成为治疗WC感染的潜在候选药物.

研究鳖甲煎丸对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)小鼠肝脂质代谢的影响,探讨鳖甲煎丸调控NASH小鼠脂质代谢和炎症反应的作用机制.通过高脂高胆固醇饲料喂养C57BL/6 小鼠建立NASH模型,给予鳖甲煎丸干预,通过血清和肝脏生化指标及肝脏组织病理学检测评价鳖甲煎丸对NASH小鼠的治疗效果,应用UPLC-Q-TOF-MS技术检测肝脏的脂质代谢物,结合偏最小二乘法判别分析、t检验和受试者工作特征曲线分析筛选差异脂质和主要生物标志物;结合生物标志物结果,利用Western blot和qPCR检测脂质代谢及炎性相关分子.结果表明,鳖甲煎丸能显著降低NASH小鼠血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)水平和肝组织中甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)含量,抑制肝脏脂滴堆积、肝细胞气球样变和纤维化病变;脂质代谢组学结果显示,鳖甲煎丸可调控磷脂酰胆碱(phosphatidyl choline,PC)、磷脂酰乙醇胺(phosphatidyl etha-nolamine,PE)、鞘磷脂(sphingomyelin,SM)、神经酰胺(ceramide,Cer)等NASH相关 11 种脂质标志物;Western blot和qPCR结果显示,鳖甲煎丸可调控固醇调节元件结合蛋白1(sterol regulatory element-binding protein 1,SREBP1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARγ)和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(phospho-AMP-activated pro-tein kinase,p-AMPK)等脂质代谢相关蛋白的表达,及脂肪酸转位酶36(fatty acid translocase 36,Cd36)、Pparγ、心磷脂合酶 1(car-diolipin synthase 1,Crls1)和磷脂酶Cβ2(phospholipase Cβ2,Plcβ2)mRNA水平;抑制磷酸化p38 丝裂原活化蛋白激酶(phospho-p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38 MAPK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶 1/2(phospho-extracellular signal regulated kinase 1/2,p-ERK1/2)和促炎因子 Il-6、Il-1β、Tnf-α mRNA 表达.综上所述,鳖甲煎丸可调节 PC、PE、SM、Cer 等脂类代谢,调控p-AMPK、SREBP1、PPARγ和Cd36、Crls1、Plcβ2 等脂质调控因子表达,改善脂质代谢紊乱,同时还能抑制MAPK信号通路和促炎因子mRNA水平,缓解炎症反应,发挥治疗NASH的作用.

自身炎症和磷脂酶Cγ2(PLCγ2)相关的抗体缺乏和免疫失调(APLAID)是一种由PL-CG2基因突变引起的罕见自身炎症性疾病(AIDs),其临床特点复杂多样,多不具有特异性,发病机制尚未达成统一共识,临床工作中难以鉴别,明确诊断往往需要综合病史、临床表现和基因检测等多方面分析.本文就APLAID的发病机制与临床表型进行综述,以期为APLAID的诊断和治疗提供参考.

目的 研究天麻活性成分3,4-二羟基苯甲醛(3,4-DD)对大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)-大鼠肾上腺嗜铬细胞PC12共培养体系氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的改善作用机制.方法 采用Transwell小室共培养BMECs与PC12细胞,然后分为对照组、模型组、丁苯酞组(阳性对照组,0.1 mmol/L)、3,4-DD组(0.1 μmol/L),除对照组外,其余各组共培养体系均复制OGD/R损伤模型.同时,共培养体系以相应药物或培养基干预BMECs 24 h,然后检测体系跨膜电阻(TEER)以及PC12细胞中乳酸脱氢酶(LDH)活性、脑源性神经营养因子(BDNF)水平以及TrkB、Plc-γ、Map-2、GAP-43 mRNA表达水平.结果 与对照组比较,模型组共培养体系TEER以及PC12细胞中LDH活性、BDNF水平均显著降低(P＜0.01),PC12细胞中TrkB、Plc-γ、Map-2、GAP-43 mRNA表达水平均显著升高(P＜0.01);与模型组比较,3,4-DD组、丁苯酞组共培养体系TEER以及PC12细胞中LDH活性、BDNF水平和TrkB、Plc-γ、Map-2、GAP-43 mRNA表达水平均显著升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 3,4-DD可通过作用于BMECs减轻神经元OGD/R损伤,其作用机制可能与激活BDNF/TrkB信号通路有关.

目的 建立鞘内吗啡给药致痒小鼠模型,探究Gβγ亚基及下游信号分子对鞘内吗啡所致瘙痒作用的影响.方法 选用C57BL/6J雄性小鼠,鞘内注射吗啡建立瘙痒模型,探究Gβγ亚基及下游相关分子抑制剂对吗啡所致瘙痒行为的影响.同时取小鼠腰段脊髓组织采用Western印迹法检测Gβγ亚基抑制后下游相关蛋白表达水平,以期揭示Gβγ亚基在鞘内吗啡致痒机制中的影响.结果 鞘内注射吗啡(1 nmol/5 μL)后小鼠抓挠行为明显增加.Gβγ亚基抑制剂gallein(2.5 mg·kg-1)和拮抗肽βARKct明显降低了吗啡诱导的小鼠的抓挠回合数和次数.与μ阿片受体敲除一样,gallien在WT小鼠腰段脊髓抑制吗啡诱导的PLCβ磷酸化(pPLCβ)、Ca2+上调和ERK1/2磷酸化(pERK1/2).此外,PLCβ蛋白抑制剂U73122(每只小鼠10 nmol)、细胞内Ca2+阻滞剂肝素(每只小鼠5 nmol)、L型Ca2+通道阻滞剂尼莫地平(4 mg·kg-1)和ERK1/2抑制剂U0126(每只小鼠5 nmol)可降低吗啡诱导的C57BL/6J小鼠的瘙痒行为.结论 Gβγ亚基可能通过PLCβ/IP3/Ca2+/ERK1/2信号通路介导吗啡诱导的小鼠抓挠行为.靶向Gβγ亚基及通路抑制剂可能抑制鞘内吗啡诱导的瘙痒作用.

电针治疗脊髓损伤可以显著提高脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、原肌球蛋白受体激酶B(tropomyosin-receptor kinase,TrkB)蛋白的表达,下调 p75 神经营养素受体(p75 neurotrophin receptor,p75 NTR)蛋白的表达.电针可以通过提高BDNF促进神经元的存活、促进受损纤维的再生、促进神经可塑性、促进髓鞘形成BDNF基因修饰的成纤维细胞.BDNF诱导的TrkB信号可能通过四种主要的细胞内途径影响突触可塑性、轴突生长、存活和细胞内阳离子平衡:(1)经磷脂酰-3激酶(P1-3K)/Akt通路促进神经元树突分枝和树突棘生成,影响突触生长和结构形成.(2)受体诱导小分子GTP酶Ras的激活,经过一系列复杂的磷酸化过程,最终激活许多细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated Kinase,ERK)途径并对环腺苷3',5'-单磷酸含量进行调节促进轴突生长.(3)经磷脂酶C-γ(PhospholipaseC-y,PLC-γ)/肌醇3-磷酸(inositol triphosphate,IP-3)通路参与Ca2+的调控,促进Ca2+从细胞内储存释放,促进突触可塑性等.(4)此外通过N-甲基-D-天冬氨酸(N-Methyl-D-aspartic acid,NMDA)受体的磷酸化,TrkB信号可能导致钙和钠内流的增加.故电针治疗脊髓损伤,可使BDNF与TrkB高亲和力结合,促进脊髓损伤的修复.其可能是通过激活BDNF-TrkB信号通路,抑制BDNF前体(brain-derived neurotrophic factor precursor,proBDNF)-p75NTR信号通路来实现对神经的再生修复.

OBJECTIVE Salvia miltiorrhiza bunge contains various active constituents, some of which have been developed as commercially available medicine. Moreover, some other ingredients in Salvia miltiorrhiza play great roles in anti-platelet activity. The aim of the present study was to investi-gate the effects and the underlying mechanism of miltirone,a lipophilic compound of Salvia miltiorrhiza Bunge. METHODS The ability of miltirone to modulate platelet function was investigated by a variety of in vitro and in vivo experiments.Platelet aggregation and dense granule secretion induced by various agonists were measured with platelet aggregometer.Clot retraction and spreading were imaged by digital camera and fl uorescence microscope. Ferric chloride-induced carotid injury model and pulmonary thromboembolism model were used to check miltirone effect in vivo. To elucidate the mechanisms of anti-platelet activity of miltirone,flow cytometry and Western blotting were performed. RESULTS Miltirone (2,4,8 μmol·L-1)was shown to suppress platelet aggregation,dense granule and α granule secretion in a dose-dependent manner. Meanwhile, miltirone inhibited the clot retraction and spreading of washed platelets.It reduced the phosphorylation of PLCγ2,PKC,Akt,GSK3β and ERK1/2 in the down-stream signal pathway of collagen receptor.It also reduced the phosphorylation of Src and FAK in the integrin αⅡbβ3 mediated"outside-in"signaling,while it did not suppress the phosphorylation of β3.In addition, miltirone prolonged the occlusion time and reduced collagen/epinephrine induced pulmonary thrombi. CONCLUSION Miltirone suppresses platelet "inside-out" and "outside-in" signaling by affecting PLCγ2/PKC/ERK1/2, PI3K/Akt and Src/FAK signaling. Therefore, miltirone might represent a potential anti-platelet candidate for the prevention of thrombotic disorders.