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甲磺酸去铁胺减轻氧化应激诱导的精原细胞铁死亡
编辑人员丨1周前
目的:探究甲磺酸去铁胺对氧化应激诱导的小鼠精原细胞铁死亡的作用。方法:将小鼠GC-1精原细胞分为设置对照组(A组)、甲磺酸去铁胺处理组(B组)、氯化钴处理组(C组)、甲磺酸去铁胺处理+氯化钴处理组(D组)。C组和D组加入200 μmol/L氯化钴处理细胞24 h以构建小鼠精原细胞氧化应激模型。B组和D组加入350 μmol/L甲磺酸去铁胺。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞活性;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞内铁离子、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平;采用细胞荧光测定活性氧和线粒体膜电位水平;采用蛋白质印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶-4(GPX4)的表达水平,组间比较采取 t检验。 结果:C组和D组细胞活性显著低于A组[(49.79±2.86)%、(85.05±3.21)%比(100.00±0.00)%, t=42.99、11.42, P<0.05],且D组细胞活性高于C组[(85.05±3.21)%比(49.79±2.86)%, t=20.10, P<0.01],差异有统计学意义。ELISA结果示D组铁离子、MDA水平低于C组[(14.41±0.72) μmol/g、(7.025±0.127) nmol/mg比(19.18±0.61) μmol/g、(9.589±0.140) nmol/mg, t=12.43、33.27, P<0.01];GSH水平高于C组[(12.37±1.02) μmol/g比(6.98±0.70) μmol/g, t=10.66, P<0.01],差异均有统计学意义。细胞荧光结果显示A组、B组和D组ROS水平低于C组(27.17±2.44、25.15±2.28、41.46±1.75比71.20±1.78, t=32.58、35.55、26.61, P<0.01);A组和D组线粒体膜电位高于C组(14.98±0.73、8.46±1.69比0.61±0.09, t=43.55、10.82, P<0.01),差异均有统计学意义。蛋白质印迹法实验结果显示D组GPX4表达水平高于C组(0.457±0.014比0.386±0.012, t=6.556, P<0.05),差异有统计学意义。 结论:甲磺酸去铁胺通过抑制铁死亡对小鼠精原细胞氧化应激模型起保护作用。
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编辑人员丨1周前
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大黄素对精索静脉曲张缺氧模型精原细胞的保护作用
编辑人员丨1周前
目的:观察大黄素对精索静脉曲张缺氧模型精原细胞的保护作用。方法:选用小鼠GC-1精原细胞,设置对照组(A组)、对照+大黄素组(B组)、模型组(C组)、模型+大黄素组(D组)。C组和D组加入氯化钴(CoCl 2)至终质量浓度为100 μmol/L,然后培养细胞24 h构建精索静脉曲张缺氧模型。B组和C组加入大黄素至终质量浓度为40 μmol/L。采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法及流式细胞仪测定细胞凋亡水平,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)和B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的蛋白质表达水平,采用实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞Caspace-3和bax的基因表达水平,组间比较采取 t检验。 结果:CCK-8实验示C组和D组细胞存活率低于A组[(51.70±3.52)%、(77.84±5.18)%比(100.00±0.00)%, t=23.767、7.410, P值均<0.05],差异有统计学意义,且D组细胞存活率高于C组[(77.84±5.18)%比(51.70±3.52)%, t=7.229, P<0.05],差异有统计学意义。流式实验示D组凋亡细胞比例低于C组[(10.54±0.68)%比(21.23±1.01)%, t=15.207, P<0.05],差异有统计学意义。Western blot结果示D组Caspace-3和bax蛋白表达水平低于C组(0.713±0.020、0.819±0.022比1.134±0.025、1.271±0.019, t=22.722、26.813, P值均<0.05),差异有统计学意义。RT-qPCR结果示D组Caspace-3和bax表达水平低于C组(1.52±0.18、1.80±0.21比3.53±0.23、4.27±0.31, t=11.920、11.426, P值均<0.05),差异有统计学意义。 结论:大黄素通过抑制细胞凋亡对精索静脉曲张缺氧模型的精原细胞起保护作用。
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编辑人员丨1周前
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三氯异氰尿酸通过诱导氧化应激和铁死亡抑制精原细胞增殖
编辑人员丨2024/7/20
目的 探索三氯异氰尿酸(TCCA)对小鼠睾丸精原细胞GC-1氧化应激和DNA甲基化的影响.方法 以TCCA 0(细胞对照),97,194和387 μmol·L-1处理GC-1细胞24 h;CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst 33342染色检测各组细胞形态和凋亡率;流式法检测细胞周期;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞凋亡相关基因Bax和Fas、氧化应激相关基因线粒体超氧化物歧化酶(SOD2)、铁死亡相关基因谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)、核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)、DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)和DNA甲基转移酶3L(DNMT3L)mRNA表达水平;Griess法测定GC-1细胞一氧化氮(NO)含量,比色法测定丙二醛(MDA)水平;DCFH-DA荧光探针法测定GC-1细胞活性氧(ROS)水平,DNTB比色法测定还原型谷胱甘肽(GSH)含量,WST-8法测定还原型辅酶Ⅱ(NADPH)含量.结果 与细胞对照组相比,TCCA 194和387 μmol·L-1组细胞存活率降低(P<0.01),出现细胞核固缩及核碎裂,细胞凋亡率显著增加(P<0.01),细胞被阻滞在G2/M期(P<0.05);TCCA 387 μmol·L-1组细胞NO和MDA含量增加(P<0.01),ROS水平升高(P<0.01),GSH和NADPH含量降低(P<0.01),SOD2,GPX4,Nrf2,SLC7A11和DHODH mRNA表达减少(P<0.05,P<0.01);Bax,Fas,DNMT3L和DNMT3A mRNA表达增加(P<0.05,P<0.01).结论 TCCA可降低GC-1细胞存活率,抑制细胞增殖,引起细胞凋亡.其机制可能与其破坏抗氧化系统、增强氧化应激、诱导铁死亡及干扰GC-1细胞甲基化有关.
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编辑人员丨2024/7/20
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自噬调控对小鼠精原细胞缺氧/复氧损伤的影响研究
编辑人员丨2024/1/20
目的 研究自噬调控对小鼠精原细胞缺氧/复氧损伤(H/RI)的影响,探讨自噬对小鼠睾丸组织缺血再灌注损伤(IRI)的影响.方法 以小鼠精原细胞系GC1 spg为研究对象构建H/RI模型,雷帕霉素(RA-PA)和3-甲基腺嘌呤(3-MA)分别作为自噬激动剂和抑制剂,设置对照组、模型组(H/RI)、自噬激动剂干预组(H/RI+自噬激动剂)、自噬抑制剂干预组(H/RI+自噬抑制剂).用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖能力,流式细胞术检测各组细胞活性氧(ROS)释放水平和凋亡水平,实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞自噬相关基因Beclin1和凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达水平,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1、p62和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3的表达水平.结果 与对照组比较,模型组增殖能力、Beclin1和Bcl-2 mRNA表达水平明显下降(P<0.01),p62和Bcl-2蛋白表达水平明显下降(P<0.01),ROS水平、细胞凋亡率、Bax mRNA相对表达水平明显上升(P<0.01),Beclin1、Bax、caspase-3蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值明显上升(P<0.01).与模型组比较,自噬激动剂干预组细胞增殖能力、Beclin1和Bcl-2 mRNA表达水平明显上升(P<0.01),Beclin1、Bcl-2蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值均明显上升(P<0.01),ROS水平、细胞凋亡率、Bax mRNA表达水平明显下降(P<0.01),p62、Bax、caspase-3蛋白表达水平明显下降(P<0.01).与模型组比较,自噬抑制剂干预组细胞增殖能力、Beclin1和Bcl-2 mRNA表达水平明显下降(P<0.01),Beclin1、Bcl-2蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值明显下降(均P<0.01),ROS水平、细胞凋亡率、Bax mRNA表达水平明显上升(P<0.01),p62、Bax、caspase-3蛋白表达水平明显上升(P<0.01).结论 增强自噬能抑制小鼠精原细胞凋亡,修复H/RI,为治疗睾丸组织IRI提供了理论基础.
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编辑人员丨2024/1/20
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白藜芦醇对Gc-1 spg细胞氧化应激损伤的作用研究
编辑人员丨2023/11/11
目的 观察白藜芦醇(RES)对过氧化氢H2O2诱导的小鼠精原细胞(Gc-1 spg)氧化应激损伤的作用.方法 H2O2复制Gc-1 spg细胞氧化应激损伤模型,设置空白组、H2O2组(800 μmol/L)、H2O2 +5 μmol/L RES组、H2O2 +10 μmol/L RES组和H2O2+15 μmol/L RES组.检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,CCK-8法检测细胞活力,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,Mito Tracker?? Green FM试剂盒检测活细胞线粒体水平,Hoechst 33342染色检测细胞核凋亡率,Western blotting检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3表达.结果 浓度为800 μmol/L H2O2处理Gc-1 spg细胞6 h时达到实验要求(P<0.05).与空白组比较,各H2O2组细胞活力降低(P<0.05),与H2O2组比较,H2O2 +5 μmol/L RES组、H2O2+ 10 μmol/L RES组、H2O2 +15 μmol/L RES组细胞活力升高(P<0.05).与空白组比较,各H2O2组的GSH-Px和SOD水平降低(P<0.05),LDH和MDA水平升高(P<0.05);与H2O2组比较,H2O2 +5 μmol/L RES组、H2O2+ 10 μmol/L RES组、H2O2 +15 μmol/L RES组GSH-PX和SOD水平降低(P<0.05),LDH和MDA水平升高(P<0.05).与空白组比较,H2O2组细胞的红/绿荧光比值降低,提示线粒体膜电位降低(P<0.05);与H2O2组比较,H2O2+5 μmol/L RES组、H2O2 +10 μmol/L RES组、H2O2 +15 μmol/L RES组JC-1红/绿荧光比值升高(P<0.05).与空白组比较,H2O2 组细胞线粒体数明显减少(P<0.05);与H2O2 组比较,H2O2 +5 μmol/L RES组、H2O2+ 10 μmol/L RES组、H2O2 +15 μmol/L RES组细胞荧光强度升高(P<0.05).与空白组比较,H2O2组大量细胞核皱缩、碎裂,染色程度明显增强,细胞凋亡严重;与H2O2组比较,H2O2 +5 μmol/L RES组、H2O2+10 μmol/L RES组、H2O2 +15 μmol/L RES组细胞凋亡率降低(P<0.05).与空白组比较,H2O2组凋亡蛋白Bax和Caspase-3相对表达量增加(P<0.05),Bcl-2相对表达量减少(P<0.05);与H2O2组比较,H2O2 +5 μmol/L RES组、H2O2 +10 μmol/L RES组、H2O2 +15 μmol/L RES组Bax和Caspase-3相对表达量降低(P<0.05),Bcl-2相对表达量增加(P<0.05).结论 RES对H2O2诱导的Gc-1 spg细胞氧化应激损伤具有保护作用,这种保护作用与RES浓度有关.
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编辑人员丨2023/11/11
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BPDE诱导GC-1细胞凋亡及褪黑素的保护作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨7,8-二羟-9,10-环氧苯并[a]芘(benzo[a]pyrene-7,8-diol-9,10-epoxide,BPDE)对小鼠精原细胞株GC-1的细胞毒性机制及褪黑素的保护作用.方法 不同浓度BPDE处理GC-1细胞,采用Annexin V/PI染色及流式细胞仪检测细胞凋亡,JC-1探针染色检测线粒体膜电位,Western blot检测细胞质Cyt C及细胞总蛋白中caspase-9/3的活化水平,DCFH-DA探针及流式细胞仪检测细胞内的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平.褪黑素预处理细胞后再进行BPDE染毒,采用上述方法检测褪黑素对BPDE细胞毒性的影响.结果 BPDE可提高GC-1细胞凋亡率,存在剂量-效应关系.同时,BPDE可降低细胞线粒体膜电位,促进线粒体Cyt C的释放,提高细胞中caspase-9和caspase-3蛋白的活化水平,并诱导细胞中ROS水平升高.褪黑素预处理则可降低BPDE诱导的细胞凋亡,抑制Cyt C的释放及caspase-9/3的活化,并激活Nrf-2/ARE抗氧化通路,降低细胞ROS水平.结论 BPDE可诱导小鼠精原细胞GC-1线粒体途径细胞凋亡和氧化应激,而褪黑素在这一过程中起保护作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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miR-let7c对小鼠精原细胞株GC-1 spg细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A表达的调控作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 观察微小RNA let7c(miR-let7c)对小鼠精原细胞株GC-1spg中细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A(CDKN1A)表达的调控作用.方法 构建过表达miR-let7c慢病毒、沉默表达miR-let7c慢病毒及空载体对照慢病毒,并用其感染GC-1spg细胞,分别为miR-let7c上调组、miR-let7c下调组和对照组.转染后72 h收集三组细胞,用荧光定量PCR法检测CDKN1A mRNA,用Western blotting法检测CDKN1A蛋白.结果 miR-let7c上调组、miR-let7c下调组、对照组CDKN1A mRNA相对表达量分别为0.0056 ±0.0009、0.0391 ±0.0067、0.0219 ±0.0018, CDKN1A蛋白相对表达量分别为0.0348 ±0.0026、0.8335 ±0.0532、0.2574 ±0.0709.与对照组比较,miR-let7c上调组CDKN1A mRNA和蛋白相对表达量低于miR-let7c下调组及对照组(P均<0.01),miR-let7c下调组CD-KN1A mRNA和蛋白相对表达量高于对照组(P均<0.01).结论 miR-let7c可负向调控小鼠精原细胞株GC-1spg中CDKN1A mRNA和蛋白表达.
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编辑人员丨2023/8/6
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分子氢对雄性小鼠生殖系统高水平小剂量电离辐射损伤的防护作用
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨分子氢对雄性小鼠生殖系统高水平小剂量电离辐射损伤的防护作用及机制.方法 将小鼠精原细胞系GC-1 spg细胞分为对照组、加氢组、4 Gy照射组、4 Gy照射加氢组,在各组细胞处理后24 h时采用流式细胞术检测细胞凋亡率.将72只雄性BALB/c小鼠分为对照组、加氢组、0.25 Gy照射组、0.25 Gy照射加氢组、0.5 Gy照射组、0.5 Gy照射加氢组,每组12只.小鼠加氢处理采用饮用富氢水联合呼吸高浓度氢气法.各组小鼠经相应处理后24 h分离睾丸组织进行H-E染色,并于内眦静脉取血,采用ELISA试剂盒检测促性腺激素释放激素(GnRH)、血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮含量.照射后4周分离小鼠双侧附睾制备精子悬液,以精子彗星电泳实验检测精子DNA损伤情况.结果 4 Gy照射加氢组GC-1 spg细胞的24 h凋亡率低于4 Gy照射组,差异有统计学意义(t=7.186,P<0.01).加氢处理缓解了0.5 Gy照射导致的小鼠睾丸组织损伤,纠正了0.25 Gy、0.5 Gy照射诱发的FSH水平升高(t0.25 Gy=3.1958,P0.25 Gy=0.019;t0.5 Gy=10.7234,P0.5 Gy<0.05),并减轻了0.25 Gy、0.5 Gy照射后4周小鼠精子DNA彗星拖尾程度和DNA损伤情况(尾部面积:t0.25 Gy=16.5923,t0.5 Gy=15.8915;尾部DNA含量:t0.25 Gy=11.2965,t0.5 Gy=13.7850;尾部DNA百分含量:t0.25 Gy=26.8340,t0.5 Gy=10.3257;尾长:t0.25 Gy=16.8654,t0.5 Gy=15.4412;尾矩:t0.25 Gy=26.9794,t0.5 Gy=13.1742;Olive尾矩:t0.25 Gy=24.7524,t0.5 Gy=6.8961;P均<0.05).结论 分子氢通过降低精原细胞凋亡、调节激素紊乱、减轻精子DNA损伤等方式对雄性小鼠生殖系统高水平小剂量辐射损伤发挥防护作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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Usp9y基因在不同发育阶段小鼠睾丸组织和睾丸相关细胞系中的表达特征
编辑人员丨2023/8/6
目的 明确Usp9y基因在不同发育阶段小鼠睾丸组织和睾丸相关细胞系中的表达与定位并探究Usp9y的功能. 方法 利用生物信息学分析结合RT-PCR方法检测小鼠睾丸相关细胞系和C57BL/6J小鼠各个组织(子宫,睾丸,心,肝,脾,肺,肾,大脑,小脑,眼球)中Usp9y基因表达的特异性;利用qPCR法检测不同日龄小鼠睾丸中Usp9y基因的表达差异性. 结果 生物信息学分析结果显示Usp9y基因在成年小鼠睾丸中特异性表达(P<0.05).RT-PCR结果证实Usp9y在小鼠睾丸组织中特异性表达(P<0.05).usp9y在小鼠睾丸间质细胞(TM3)中特异性表达,在小鼠精原细胞(GC-1)和小鼠睾丸支持细胞(15P-1)中未检测到表达.qPCR结果显示相比其他日龄小鼠,18日龄的小鼠睾丸Usp9y表达显著升高(P<0.05). 结论 通过RT-PCR的方法确定Usp9y基因在TM3细胞中特异性表达;小鼠Usp9y基因在小鼠出生后18 d表达明显增高,上述结果表明Usp9y基因在精子发生早期发挥着不可替代的作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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氧化应激诱导的自噬与隐睾症及畸形精子症的相关性研究
编辑人员丨2023/8/6
为了分析氧化应激诱导的自噬与隐睾症及畸形精子症的相关性,首先采用高通量的qPCR array技术检测44个自噬相关基因在隐睾症患者和生育力正常男性的睾丸组织中的表达差异,筛选出11个表达差异显著的自噬相关基因;然后用不同浓度过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)分别处理小鼠精原细胞系GC-1 spg和睾丸支持细胞系TM4,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT)]分析H2O2处理对细胞增殖活性的影响,并采用实时荧光定量PCR (real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测11个差异表达的自噬相关基因在细胞氧化应激条件下的表达;最后利用GEO (Gene Expression Omnibus)数据库分析自噬相关基因与畸形精子症的关系.通过综合比较发现,BCL2Ll、EIF2A K3在隐睾症、畸形精子症及氧化应激过程中均表达上调,表明这两个基因与男性不育的发生有关,推测其作用机制可能是通过响应氧化应激信号来实现.
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编辑人员丨2023/8/6
