目的:探究甲磺酸去铁胺对氧化应激诱导的小鼠精原细胞铁死亡的作用。方法:将小鼠GC-1精原细胞分为设置对照组(A组)、甲磺酸去铁胺处理组(B组)、氯化钴处理组(C组)、甲磺酸去铁胺处理+氯化钴处理组(D组)。C组和D组加入200 μmol/L氯化钴处理细胞24 h以构建小鼠精原细胞氧化应激模型。B组和D组加入350 μmol/L甲磺酸去铁胺。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)测定细胞活性；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞内铁离子、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平；采用细胞荧光测定活性氧和线粒体膜电位水平；采用蛋白质印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶-4(GPX4)的表达水平，组间比较采取 t检验。 结果:C组和D组细胞活性显著低于A组[(49.79±2.86)%、(85.05±3.21)%比(100.00±0.00)%， t＝42.99、11.42， P<0.05]，且D组细胞活性高于C组[(85.05±3.21)%比(49.79±2.86)%， t＝20.10， P<0.01]，差异有统计学意义。ELISA结果示D组铁离子、MDA水平低于C组[(14.41±0.72) μmol/g、(7.025±0.127) nmol/mg比(19.18±0.61) μmol/g、(9.589±0.140) nmol/mg， t＝12.43、33.27， P<0.01]；GSH水平高于C组[(12.37±1.02) μmol/g比(6.98±0.70) μmol/g， t＝10.66， P<0.01]，差异均有统计学意义。细胞荧光结果显示A组、B组和D组ROS水平低于C组(27.17±2.44、25.15±2.28、41.46±1.75比71.20±1.78， t＝32.58、35.55、26.61， P<0.01)；A组和D组线粒体膜电位高于C组(14.98±0.73、8.46±1.69比0.61±0.09， t＝43.55、10.82， P<0.01)，差异均有统计学意义。蛋白质印迹法实验结果显示D组GPX4表达水平高于C组(0.457±0.014比0.386±0.012， t＝6.556， P<0.05)，差异有统计学意义。 结论:甲磺酸去铁胺通过抑制铁死亡对小鼠精原细胞氧化应激模型起保护作用。

目的:探究甲磺酸去铁胺对精索静脉曲张睾丸支持细胞氧化应激模型的保护作用。方法:细胞实验选择小鼠睾丸支持细胞TM-4，设置对照组(A组)、甲磺酸去铁胺+对照组(B组)、氯化钴组(C组)、甲磺酸去铁胺+氯化钴组(D组)。C组和D组加入400 μmol/L氯化钴，随后培养细胞24 h构建精索静脉曲张氧化应激模型。B组和D组加入800 μmol/L甲磺酸去铁胺。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式测定细胞存活和凋亡水平；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定细胞内活性氧(ROS)、十二烷硫酸钠(SDS)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、谷胱甘肽(GSH)水平；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测谷胱甘肽过氧化物酶-4(GPX4)的蛋白表达水平，组间比较采用 t检验。 结果:CCK-8实验结果显示C组和D组细胞存活率低于A组[(45.75±12.08)%、(86.53±2.57)%比(100.00±0.00)%， t＝11.000、12.810， P值均<0.05]，差异有统计学意义，且D组细胞存活率高于C组[(86.53±2.57)%比(45.75±12.08)%， t＝8.087， P<0.01]，差异有统计学意义。流式实验结果显示D组凋亡细胞比例低于C组[(8.63±0.11)%比(34.19±0.35)%， t＝121.300， P<0.01]，差异有统计学意义。ELISA结果显示D组相对ROS、MDA表达水平低于C组[(239.17±23.18)%、(40.34±1.50) nmol/(L·mg)比(378.00±24.84)%、(49.18±2.68) nmol/(L·mg)， t＝10.010、7.053， P值均<0.01]；超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)表达水平高于C组[(7.85±0.24) U/mg、(425.60±12.21) U/mg比(4.69±0.28) U/mg、(208.96±7.00) U/mg， t＝20.650、37.710， P<0.01]，差异均有统计学意义。蛋白质印迹法实验结果显示氯化钴缺氧诱导了铁死亡关键蛋白GPX4表达下调，而甲磺酸去铁胺(DFO)恢复了铁死亡关键蛋白GPX4的表达。 结论:甲磺酸去铁胺通过抑制铁死亡对精索静脉曲张睾丸支持细胞氧化应激模型起保护作用。

目的:探讨LRRK2G2019S位点突变对驱铁处理后小胶质细胞活化的影响及其机制。方法:（1）利用人类诱导多能干细胞（IPSC）经造血祖细胞（HPC）分化产生小胶质细胞，免疫荧光染色进行鉴定，利用蛋白纯化技术获取α-突触核蛋白（α-syn）A53T突变蛋白。（2）将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+甲磺酸去铁胺（DFO）组，分别加入磷酸盐缓冲液（PBS）、1 μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白、1 μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白+30 mmol/L DFO作用24 h。采用比色法检测细胞Fe 2+浓度，Western blotting实验检测细胞Rab35蛋白的表达，流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平，实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测细胞白细胞介素（ IL） -6、肿瘤坏死因子α（ TNF-α）、转化生长因子β（ TGF-β）mRNA的表达。将3组小胶质细胞培养上清液（MCS）转移到SH-SY5Y细胞中，采用流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞的凋亡情况。（3）双向DNA测序检测1 μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白处理后小胶质细胞富亮氨酸重复激酶2（ LRRK2）基因的突变。将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+GSK3357679A组，分别加入对应的药物处理24 h（LRRK2抑制剂GSK3357679A浓度为10 nmol/L），采用Western blotting实验检测细胞LRRK2蛋白的表达。将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+GSK3357679A、α-syn+GSK3357679A+DFO组，分别加入对应的药物处理24 h后采用Western blotting实验检测细胞Rab35蛋白的表达，流式细胞仪检测细胞内ROS水平，RT-PCR检测细胞 IL-6、 TNF-a、 TGF-β mRNA的表达。（4）将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+雷帕霉素（RAPA）组，分别加入对应的药物处理24 h（自噬诱导剂RAPA的浓度为50 nmol/L），采用Western blotting实验检测细胞Rab35、P62、微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）蛋白的表达，流式细胞仪检测细胞内ROS水平，RT-PCR检测细胞 IL-6、 TNF-α、 TGF-β mRNA的表达。（5）将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+Rab35组，分别加入对应的药物处理24 h（Rab35过表达质粒的浓度为1 μg/mL），采用Western blotting实验检测细胞Rab35、P62、LC3Ⅱ蛋白的表达，流式细胞仪检测细胞内ROS水平，RT-PCR检测细胞 IL-6、 TNF-α、 TGF-β mRNA的表达。 结果:（1）免疫荧光染色检测显示小胶质细胞神经元核蛋白（NeuN）表达阴性、离子钙结合适配分子1（Iba1）表达阳性、LRRK2呈高表达。成功构建PcDNA3.1-SNCA-A53T表达质粒并纯化获得α-syn A53T突变蛋白。（2）α-syn组细胞Fe 2+浓度高于对照组，α-syn+DFO组细胞Fe 2+浓度低于α-syn组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。对照组、α-syn组、α-syn+DFO组细胞Rab35蛋白、 TGF-β mRNA的表达依次降低， IL-6、 TNF-a mRNA的表达依次增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）。对照组、α-syn组、α-syn+DFO组小胶质细胞ROS水平、SH-SY5Y细胞凋亡率均依次增加。（3）双向DNA测序显示α-synA53T突变蛋白刺激后小胶质细胞LRRK2G2019S突变最明显。与对照组比较，α-syn组细胞LRRK2蛋白的表达增高；与α-syn组比较，α-syn+GSK3357679A组细胞LRRK2蛋白的表达降低，差异有统计学意义（ P<0.05）。与对照组比较，α-syn组细胞Rab35蛋白、 TGF-β mRNA的表达降低， IL-6、 TNF-a mRNA的表达增高；与α-syn组比较，α-syn+GSK3357679A组细胞Rab35蛋白、 TGF-β mRNA的表达增高， IL-6、 TNF-a mRNA的表达降低；与α-syn+GSK3357679A组比较，α-syn+GSK3357679A+DFO组细胞Rab35蛋白、 TGF-β mRNA的表达降低， IL-6、 TNF-a mRNA的表达增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）。α-syn组细胞ROS水平高于对照组，α-syn+GSK3357679A组细胞ROS水平低于α-syn组，α-syn+GSK3357679A+DFO组细胞ROS水平高于α-syn+GSK3357679A组。（4）与对照组比较，α-syn组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、 TGF-β mRNA的表达降低，P62蛋白、IL-6、 TNF-a mRNA的表达升高；与α-syn组比较，α-syn+RAPA组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、 TGF-β mRNA的表达升高，P62蛋白、 IL-6、 TNF-a mRNA的表达降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。α-syn组细胞ROS水平高于对照组和α-syn+RAPA组。（5）与对照组比较，α-syn组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、 TGF-β mRNA的表达降低，P62蛋白、 IL-6、 TNF-a mRNA的表达升高；与α-syn组比较，α-syn+Rab35组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、 TGF-β mRNA的表达升高，P62蛋白、 IL-6、 TNF-a mRNA的表达降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。α-syn组细胞ROS水平高于对照组和α-syn+Rab35组。 结论:在驱铁处理条件下，LRRK2G2019S能通过抑制Rab35等自噬相关蛋白诱发小胶质细胞活化，Rab35有望成为干预神经炎症反应的关键因素。

目的:探究铁死亡在磷酸三（1，3-二氯-2-丙基）酯[Tri（1，3-dichloro-2-propyl）phosphate，TDCIPP]致雄性小鼠睾丸损伤中的作用。方法:于2021年12月，选取30只健康3周龄雄性C57BL/6小鼠，体重（13±2）g，适应性饲养1周后，根据随机数字表分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组、铁死亡抑制剂组，每组6只；低、中、高剂量组小鼠分别采用5、25、125 mg/（kg·d）TDCIPP连续灌胃染毒28 d，对照组采用等量玉米油灌胃处理28 d；铁死亡抑制剂组采用125 mg/（kg·d）TDCIPP连续灌胃28 d，且每周用30 mg/kg甲磺酸去铁胺（DFO）生理盐水溶液进行腹腔注射3次。处理结束后，处死小鼠，分离小鼠附睾，进行精子计数；采用HE染色观察小鼠睾丸组织形态学变化，检测睾丸组织中铁离子含量，活性氧（ROS）水平和丙二醛（MDA）含量，检测小鼠睾丸细胞线粒体膜电位水平；Western blot检测睾丸组织谷胱甘肽过氧化物酶（GPX4）、内环氧化酶2（COX2）蛋白表达量。结果:与对照组比较，中、高剂量组小鼠睾丸组织中生精细胞排列紊乱，呈现空泡状结构，附睾中精子数量明显降低（ P=0.009、0.004），精子畸形率明显上升（ P=0.010、0.000）；小鼠睾丸组织中ROS水平、铁离子含量以及MDA含量明显升高（ P<0.05），小鼠睾丸细胞线粒体膜电位明显下降（ P=0.049、0.002），铁死亡相关蛋白GPX4含量明显降低、COX2含量明显上升（ P<0.05）；与高剂量组比较，铁死亡抑制剂组小鼠生精细胞排列较为紧密正常，睾丸组织内ROS和铁离子含量明显降低（ P<0.01）；GPX4蛋白表达水平明显升高，COX2蛋白表达水平明显下降（ P<0.05）。 结论:铁死亡可能参与青春期TDCIPP暴露引起的雄性小鼠睾丸组织损伤。

目的 探究小胶质细胞铁死亡在烟雾吸入性脑损伤中的作用机制.方法 将20只C57BL/6小鼠随机分为对照组(Control组)、烟雾吸入性损伤(SII)组、铁抑素治疗组(Fer-1组,2.5 mmol/kg Fer-1)、甲磺酸去铁胺治疗组(DFO组,200 mg/kg DFO),每组5只.Fer-1组和DFO组于造模后第1、3、5天分别腹腔注射Fer-1和DFO.第6天通过苏木素伊红(HE)染色、普鲁士蓝染色观察各组小鼠脑组织的病理变化.实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测脑损伤因子、炎性因子、铁死亡因子基因表达水平.双联吡啶比色法测定小鼠脑组织中铁含量.硫代巴比妥酸比色法测定小鼠脑组织脂质过氧化物(LPO)、丙二醛(MDA)含量.黄嘌呤氧化酶法测定小鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性.二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)直接法测定小鼠脑组织谷胱甘肽(GSH)含量.DMEM完全培养基培养BV2细胞,分为Control组、Erastin组(10 μmol/L Erastin刺激)、Fer-1组(10 μmol/L Erastin与5 mmol/L Fer-1同时刺激)、DFO组(10 μmol/L Erastin与50 mmol/L DFO同时刺激).24 h后,CCK-8法检测细胞活力变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFDA)检测细胞内活性氧(ROS)水平,线粒体红色荧光探针检测线粒体膜电位.结果 与Control组相比,SII组小鼠脑组织出现明显铁沉积和炎症反应,脑组织脑损伤因子、炎性因子mRNA表达水平升高,乙酰辅酶A合成酶长链家族4(ACSL4)、核受体共激活因子4(NCOA4)mRNA表达水平升高,谷胱甘肽氧化酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)mRNA表达水平降低,小鼠脑组织GSH和SOD含量降低,LPO和MDA含量升高(P＜0.05).与SII组相比,Fer-1组和DFO组小鼠相应指标变化与上述相反(P＜0.05),小鼠脑组织损伤减轻.BV2细胞实验结果显示,与Control组相比,Erastin组BV2细胞存活率下降、凋亡率升高(P＜0.05),细胞内ROS水平升高,线粒体膜电位下降;与Erastin组相比,Fer-1组、DFO组细胞相应指标变化与上述相反(P＜0.05),BV2细胞氧化损伤得到缓解.结论 铁死亡抑制剂Fer-1和DFO能够抑制小胶质细胞铁死亡并缓解烟雾吸入性脑损伤.

背景:甲磺酸去铁胺(deferoxamine mesylate,DFO)是一种抗骨质疏松的潜在药物,具有铁螯合、血管再生、抗氧化等作用,近年来研究表明DFO的应用可扩展到组织再生工程领域.目的:以高铁干预去势大鼠模拟绝经后骨质疏松症患者体内铁蓄积状态,探讨DFO干预铁过载骨质疏松大鼠下颌骨缺损植骨后的修复效果.方法:首先构建铁蓄积去势骨质疏松模型,模型组大鼠行双侧卵巢切除术,第2周开始腹腔注射枸橼酸铁铵(90 mg/kg,每周2次,持续干预11周),假手术组大鼠去除卵巢周围部分脂肪,给予等量生理盐水干预11周.确认模型建立成功后,实验大鼠分为假手术组(n=6)、高铁去势组(n=6)和高铁去势DFO治疗组(n=6),于双侧下颌骨建立直径5 mm的骨缺损并植入Bio-Oss骨粉,术后第4天开始高铁去势DFO治疗组腹腔注射DFO(100 mg/kg,每周3次),假手术组及高铁去势组予以等量生理盐水干预,植骨术后2,12周取下颌骨、肝脏及血液样本,行肝脏及颌骨普鲁士蓝染色、血清铁蛋白ELISA检测体内各组织铁水平;苏木精-伊红染色、Masson染色观察骨缺损区炎症细胞浸润及早期成骨情况;抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞分化情况;ELISA法检测血清中降钙素、Ⅰ型胶原C-末端肽水平;Micro-CT检测、苏木精-伊红染色观察中晚期成骨情况.结果与结论:①高铁去势组胫骨骨小梁数目减少,骨小梁排列稀疏;②与假手术组比较,植骨术后2周高铁去势组肝脏、颌骨及血清中铁水平明显升高,DFO干预后铁水平降低,差异均有显著性意义(P＜0.05);③骨缺损修复早期,高铁去势组较假手术组有较多炎性细胞浸润,新生骨基质较少,Ⅰ型胶原纤维生成较少(P＜0.05);DFO干预后炎性细胞浸润减少,少量新生骨基质生成,胶原纤维增加显著(P＜0.05);④骨缺损修复中晚期,Micro-CT显示高铁去势组较假手术组新骨生成减少,DFO治疗后新生骨质增加(P＜0.05);⑤与假手术组比较,高铁去势组破骨细胞数量、血清降钙素、Ⅰ型胶原C-末端肽水平升高,DFO干预后破骨细胞数量减少,骨代谢指标得到改善;⑥结果表明:高铁干预去势大鼠体内铁水平升高,伴随下颌骨骨缺损区新骨生成能力减弱;DFO可通过清除组织内铁沉积改善骨代谢与抑制破骨细胞活性,提高铁蓄积骨质疏松大鼠的骨形成能力,促进下颌骨缺损区骨愈合.

目的 筛选睡眠障碍患者血液中的代谢标志物,并分析其异常代谢通路.方法 选取2021年1-12月上海健康医学院附属嘉定区中心医院睡眠障碍患者30例(睡眠障碍组)、健康体检者30名(正常对照组).收集所有研究对象的一般资料.采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测所有研究对象的血浆代谢物.依据VIP值、差异倍数(FC)和P值筛选出睡眠障碍组与正常对照组之间有显著意义的差异代谢物.对差异代谢物进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.结果 共检出1 656个代谢物,筛选出睡眠障碍组与正常对照组之间有显著意义的差异代谢物181个.正离子模式筛选出115个(表达上调61个、表达下调54个),VIP值居前10位的代谢物分别为乙二胺四乙酸、肉碱、N-(1-氨基-3,3-二甲基-1-氧代丁-2-基)-1-戊基-1h-吲哚-3-甲酰胺、[1-(环己基甲基)-1h-吲哚-3-羰基]-l-缬氨酸甲酯、二丁卡因、甘油磷酸胆碱、次黄嘌呤、棕榈酰血清素、去铁胺d2、亚麻酰肉碱.负离子模式筛选出66个(表达上调38个、表达下调28个),VIP值居前10位的代谢物分别为柠檬酸盐、牛磺酸、鼠李素、尿酸、丙酮酸盐、尿囊素、3',5'-环肌苷-磷酸、D-乳酸、(+)-6-氨基青霉烷酸、油酸.KEGG通路富集分析结果显示,差异代谢物涉及的通路为癌症的中枢碳代谢、腺苷三磷酸结合盒转运蛋白和蛋白质消化吸收等.结论 筛选出睡眠障碍患者具有代表性的代谢物和代谢通路,可为睡眠障碍的诊断和治疗提供潜在的靶点.

目的 探讨铁离子螯合剂甲磺酸去铁胺(DFO)抗顺铂(DDP)诱导豚鼠耳蜗毛细胞氧化损伤及调控Caspase-3表达的作用机制.方法 健康豚鼠随机分为DFO组、DDP组、DFO+PPD组及对照组,每组各15例,分别从功能学(耳声发射仪DPOAE检测各组动物双耳500~8000Hz的DPOAE听力图)、形态学(光镜观察耳蜗基底膜铺片,投射电镜观察耳蜗基底膜样品)、血清学(MDA、T-SOD、GSH-PX指标检测)及分子生物学(耳蜗组织Caspase-3蛋白表达)四个层面进行检测.结果 顺铂诱导豚鼠耳蜗毛细胞氧化损伤动物模型复制成功;所有检测中DFO组较对照组差异均无统计学意义(P>0.05),且DFO不影响顺铂血药浓度;对照组、DDP+DFO组及DDP组两两比较,细胞形态学损伤逐渐加重,DDP组可见凋亡小体;功能学比较听阈损伤逐渐加重,组间差异有统计学意义(P<0.05),且在高频听阈差异有显著统计学意义(P<0.01);血清学比较,GSH-PX及T-SOD活力逐渐降低,MDA活力逐渐升高,组间差异均有统计学意义(P<0.05);Caspase-3蛋白表达逐渐增多,组间两两比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 铁离子螯合剂可有效保护顺铂诱导豚鼠耳毒性,保护机制与减少氧自由基及脂质过氧化物产生及抑制细胞凋亡有关.

目的 观察甲磺酸去铁胺辅助治疗绝经后骨质疏松的可行性和安全性研究.方法 178 例绝经后骨质疏松症女性分为治疗组与对照组,对照组给予雷洛昔芬(60 mg/d)治疗,治疗组在给予雷洛昔芬治疗的基础上添加甲磺酸去铁胺辅助治疗.治疗为期6个月,比较治疗前后两组患者不良反应、骨密度、骨代谢指标的差异和临床疗效.结果 截止治疗时间为止,治疗组患者的治疗总有效率为100%,明显高于对照组的84. 27%,差异有统计学意义(P＜0. 05);两组患者治疗后的腰椎正位、股骨颈骨密度较治疗前均显著上升,且治疗组BMD升高较对照组更为显著,差异均有统计学意义(P＜0. 05);治疗组的血清骨钙素(OC)、甲状旁腺素(PTH)、血清 I 型胶原 C 端肽(CTX-I)、血清铁蛋白水平较治疗前明显改变且改变幅度均明显大于对照组,差异均有统计学意义(P＜0. 05).治疗期间两组患者均无明显不良反应发生.结论 甲磺酸去铁胺辅助雷洛昔芬治疗能明显提高绝经后骨质疏松患者的骨密度,改善骨代谢指标,且不增加不良反应的基础上增加治疗有效率.

选择性激光熔覆(SLM)技术制作的口腔微孔种植体机械强度较高,可适应骨内不同骨质的骨密度和弹性模量分布,方形联通微孔结构在种植体植入后的骨传导性、骨诱导性较好,八角形支架单元和22边立方体单元结构强度高,且高孔隙率、低孔径成功率高.SLM技术制作的口腔微孔种植体生物相容性高,可促进骨重建及早期骨矿化沉积、加快骨结合,形成牢固种植体-骨内部机械锁节.SLM技术制备的口腔微孔种植体可用不完全熔化的金属粉末、酸蚀、碱处理及钙磷酸盐、聚乙酸内酯、甲磺酸去铁胺、多晶金刚石等涂层处理种植体表面,提高表面微观强度,促进细胞附着,刺激血管形成.