复发难治T细胞恶性肿瘤目前尚无特效药物，临床前研究及临床研究证实嵌合抗原受体T细胞（CAR-T细胞）治疗可能成为复发难治T细胞恶性肿瘤最有前景的免疫治疗手段之一，但靶向T细胞肿瘤的CAR-T尚面临巨大挑战：①无特异性靶抗原：理想状态下，靶抗原应仅表达于肿瘤细胞上，而在正常T细胞上不表达，对于T细胞恶性肿瘤来说，大多数靶抗原在正常T细胞和肿瘤T细胞均表达；②难以区分正常T细胞和肿瘤T细胞：CAR-T细胞疗法需要从患者体内分离出正常T细胞，否则很可能导致产品污染或肿瘤细胞的CAR修饰 [1]；③CAR-T细胞自相残杀：靶抗原在CAR-T细胞上的表达会导致CAR-T细胞自相残杀，而靶向正常T细胞表达的抗原会引起T细胞免疫缺陷，进而导致严重的机会性感染 [2]。本文对CAR-T细胞治疗T细胞恶性肿瘤的临床前及临床研究综述如下。

急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)是儿童时期最常见的恶性肿瘤，其中急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)占儿童ALL的10%~15%。随着MICM分型、危险度分层及多药联合强化疗的应用，T-ALL患儿的预后已得到改善，但总生存率和无事件生存率仍<70%，复发/难治T-ALL总生存率<10%。CDl9嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)修饰的T细胞治疗儿童难治性复发B-ALL缓解率已达70%~90%，但CAR在难治复发T-ALL中仍面临许多挑战。随着CAR-T细胞及CAR-NK细胞靶向治疗的出现及应用，复发/难治T-ALL的预后将有望得到改善。

弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）占非霍奇金淋巴瘤（NHL）的31%~34% [1]，部分患者接受R-CHOP（利妥昔单抗+环磷酰胺+阿霉素+长春新碱+泼尼松）方案一线治疗可治愈，但仍有30%~40%的患者复发或难治，特别是活化B细胞型（ABC）、双表达或双打击淋巴瘤等 [2]。复发/难治性（R/R）DLBCL患者中位总生存（OS）期仅为6个月 [3,4]，治疗尚无统一标准，含吉西他滨和（或）铂类药物等二线方案、自体造血干细胞移植（auto-HSCT）和新型靶向药物等均可作为挽救性治疗选择。近年来，嵌合抗原受体修饰T细胞（CAR-T细胞）疗法成为治疗R/R DLBCL的重要手段，但细胞制备周期长、费用高及细胞因子释放综合征等限制了其临床应用 [5,6]。因此，临床上仍然亟需寻找有效的新型药物和治疗手段。

中枢神经系统淋巴瘤(CNSL)患者病情进展迅速，由于化疗药物难以穿过血脑屏障(BBB)，并且放疗不良反应严重，患者通常预后较差。嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)是一种治疗肿瘤的新型免疫疗法。该疗法通过将患者或健康供者体内分离出的T细胞进行体外基因修饰，使其表达靶向肿瘤细胞的嵌合抗原受体(CAR)，从而有效杀伤肿瘤细胞。已有相关临床试验结果证明，CAR-T免疫疗法治疗CNSL患者安全、可行，但是目前临床治疗病例数较少，仍需进一步研究。笔者拟就CNSL的临床治疗，以及CAR-T免疫疗法治疗CNSL的临床应用现状进行总结，旨在为应用CAR-T免疫疗法临床治疗CNSL提供参考。

嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞免疫疗法是一种通过基因工程修饰来招募T细胞对抗肿瘤的新方法。CAR-T细胞免疫疗法在血液系统恶性肿瘤中已取得巨大的进展，因此，许多研究者提出将其用于诸如结直肠癌(CRC)这类实体肿瘤。但是，由于肿瘤特异抗原的缺乏，肿瘤细胞间的紧密连接和免疫抑制性的肿瘤微环境，以及治疗不良反应等问题，限制了CAR-T细胞疗法在CRC的应用。为克服实体瘤免疫治疗的这些困境，研究人员提出了多种优化CAR的治疗策略，这些策略各有其优势和不足，本文总结了CRC中CAR-T细胞免疫疗法的靶点选择，治疗不良反应和相应的优化策略等现状，并提出对实体瘤CAR-T细胞免疫治疗的未来展望。

随着对皮肤T细胞淋巴瘤研究的不断深入，传统靶向药物、免疫检查点抑制剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂以及异基因造血干细胞移植等各种治疗手段不断出现，均在临床试验中显示出良好的疗效及安全性。本文综述近年复发/难治性皮肤T细胞淋巴瘤非化疗药物的相关研究进展。

嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor T cells，CAR-T细胞）疗法是指通过基因修饰技术将带有特异性抗原识别结构域及T细胞激活信号的遗传物质转入T细胞，使T细胞直接与肿瘤细胞表面的特异性抗原结合而被激活、增殖，从而发挥靶向杀伤肿瘤细胞的作用。2016年Ali等 [1]首次报道抗B细胞成熟抗原（B cell maturation antigen，BCMA）CAR-T细胞应用于复发难治性多发性骨髓瘤（RRMM），证实其有效性和安全性。随后国内外开展了大量抗BCMA CAR-T细胞治疗RRMM的临床研究，总体有效率为73%~100%（表1） [2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13]，部分研究中严格意义的完全缓解（sCR）/完全缓解（CR）率超过50%，其中微小残留病（MRD）1个月转阴率最高超过80%。2021年3月27日，FDA批准首个以BCMA为靶点的CAR-T细胞用于治疗RRMM。除了单靶点CAR-T细胞外，两个抗原靶点联合的CAR-T细胞临床试验有BCMA/CD19 [7]、BCMA/ CD38 [10]、BCMA/CD138等。除了抗BCMA CAR-T外，CS1、GPRC5D、CD38、CD138等许多其他靶点的CAR-T也已进入临床试验。

肿瘤细胞免疫治疗被公认为是继手术、放疗和化疗之后的第四种肿瘤治疗方法，免疫疗法嵌合型抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)修饰的T细胞疗法(CAR-T)，属于过继性细胞免疫治疗，不仅在肿瘤治疗中取得突破性进展，在感染性疾病和自身免疫性疾病等治疗中也有良好的应用前景。现就CAR-T细胞免疫疗法的发展历史、临床应用、目前存在的问题以及最新研究成果作一综述。

目的:构建肿瘤相关抗原表皮生长因子受体特异性嵌合抗原受体(EGFR-CAR)和程序性死亡受体-配体1(PD-L1)抗体双修饰慢病毒载体表达系统。方法:人PD-L1-Fc蛋白免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、亚克隆筛选高分泌PD-L1特异性抗体的稳定杂交瘤，酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测抗体特异性，流式细胞术(FACS)鉴定对PD-1配受体封阻性能，Fortebio测定抗体亲和力，抗体全长测序，经保留鼠源CRD1、CRD2和CRD3人源化改造后构建单链抗体(single-chain variable fragment，scFv)；人EGFR单克隆抗体杂交瘤系，经5′RACE技术扩增其轻链和重链可变区(VL和VH)基因，构建scFv，克隆至真核载体pcDNA3.1表达鉴定。基因合成EGFR-CAR(引入CD137协同信号胞内功能域)与PD-L1-scFv借助2A序列连接，克隆入慢病毒pLVX-EF1a-IRES-ZsGreen1表达载体，使用Lenti-X Packaging Single Shots (VSV-G)共同转染293T细胞，获得包装病毒，感染293V细胞，FACS测定CAR膜表达，ELISA检测CAR感染293V细胞培养上清中PD-L1-scFv表达情况，转染激活人外周血T细胞，验证CAR膜表达。结果:获得PD-L1抗体11E3，具备高度配受体封阻性能，经人源化改造后，亲和力稳定(2.67×10 －10 mol/L)，EGFR-scFv获得有效表达。进一步构建了EGFR-CAR和PD-L1双修饰慢病毒分泌型CAR(CTC0537-1)及膜表达型CAR(CTC0537-2)，其病毒感染293V细胞阳性率为10%。CTZ0431-1感染293V细胞后，细胞膜表面表达EGFR-scFv，检测培养上清存在PD-L1-ScFv；CTZ0431-2感染293V细胞后，细胞膜表面EGFR-scFv和PD-L1-scFv有效表达，双表达病毒感染活化T细胞的CAR表达率为39.3%。 结论:成功构建了EGFR-CAR和PD-L1-scFv双表达慢病毒载体，EGFR-CAR中度结合亲和力，此为EGFR靶向和PD-L1抗体双修饰CAR-T细胞的实体瘤治疗研究提供了关键工具。

目的:构建一种新型靶向CD138的嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞，探索其抗恶性浆细胞肿瘤作用。方法:通过单克隆抗体制备及筛选技术，获得能稳定分泌CD138抗体的杂交瘤细胞株；将杂交瘤细胞接种至小鼠腹腔，收集腹水并纯化得到抗CD138抗体纯品，进一步检测抗体特异性及亲和力；RT-PCR扩增其可变区序列，以此作为抗原识别域构建CD138 CAR，并表达于T细胞表面，制备CD138 CAR-T；流式细胞术检测CAR-T细胞表型特征；体外杀伤及脱颗粒实验检测其抗肿瘤作用。结果:①成功制备抗人CD138抗体杂交瘤细胞株，并筛选获得稳定分泌抗人CD138抗体的杂交瘤细胞株5G2。②CD138（5G2）抗体可以特异性识别CD138 +细胞，与CD138蛋白亲和常数（K D）为6.011×10 -9 mol/L，与CD138 -细胞无明显交叉反应。③应用分子克隆技术扩增得到CD138（5G2）抗体可变区序列，成功构建CD138（5G2）CAR慢病毒载体，通过感染T细胞获得的CD138（5G2）CAR-T细胞，可以有效结合人CD138重组蛋白。④CD138（5G2）CAR-T可以有效大量扩增，表型检测发现CD138（5G2）CAR-T细胞更多的向中心记忆T及记忆干细胞方向分化，终末分化效应T细胞比例降低。⑤与靶细胞共培养48 h后，与Vector-T细胞相比，CD138（5G2）CAR-T细胞可以有效杀伤CD138 +骨髓瘤细胞系H929[效靶比为1∶2，（12.92±8.02）%对（54.25±15.79）%， P<0.001]。但对CD138 - K562细胞系无明显杀伤作用。⑥脱颗粒实验显示，H929细胞可以显著激活CD138（5G2） CAR-T细胞，但对Vector-T细胞无明显激活作用[（25.78±3.35）%对（6.13±1.30）%， P<0.001]。⑦与CD138 +细胞共培养后CD138（5G2）CAR-T分泌细胞因子水平较Vector-T组明显升高[IL-2：（1 697.52±599.05）pg/ml对（5.07±1.17）pg/ml， P<0.001；IFN-γ：（3 312.20±486.38）pg/ml对（9.28±1.46） pg/ml， P<0.001；TNF-α：（1 837.43±640.49）pg/ml对（8.75±1.65）pg/ml， P<0.001]，但与CD138 -细胞共培养后两组间细胞因子分泌水平无明显差异。 结论:本研究成功制备了抗CD138单克隆抗体，以其抗原识别域构建的CAR-T细胞可以有效发挥抗肿瘤作用，为人CD138抗原的检测及多发性骨髓瘤的免疫治疗提供新的选择。