目的:探讨活血化瘀中药药对川芎-赤芍拮抗动脉粥样硬化的潜在分子机制及药理过程.方法:使用R语言Limma包分析GEO数据库GSE43292 数据集,对有表达差异的动脉粥样硬化基因进行筛选和提取.川芎-赤芍药对所含的化学活性组分及靶点通过中药系统药理学数据库与分析平台检索.合并差异基因和药物作用靶点以获得共同的靶点.利用在线分析工具STRING和Cytoscape构建药物和靶点的调控网络以及靶点间的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络.然后利用R语言注释靶点基因的基因本体(GO)功能,分析京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路,再进行基因集富集分析(GSEA)以验证KEGG的通路和富集的情况,确定靶点基因的调控功能和参与基因调控功能的信号转导通道.结果:共筛选出动脉粥样硬化差异基因 1244 个,川芎-赤芍药对含 36 个生物活性成分,其中靶点为环加氧酶 1、肾上腺素受体、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ、激酶插入域受体、孕激素受体、基质金属蛋白酶 9、CXC趋化因子配体 8、蛋白激酶Cβ、白细胞介素 6、CD14、二肽基肽酶-4、PIK3CG、肾上腺素受体α1B、微管相关蛋白 2、尿激酶纤溶酶原激活剂和单胺氧化酶 B.靶点在GO中主要富集在合成DNA过程的调控、DNA生物合成的过程、含胶原的细胞外基质、细胞外基质、蛋白酶结合、细胞迁移、血管形成过程、膜筏结构、转录的调节等与动脉粥样硬化炎症、脂肪代谢及血管生成相关的生物学注释.脂质与动脉粥样硬化通路和核因子κB信号通路与动脉粥样硬化关系最为密切,并且在KEGG信号通路和GSEA均显示出富集.结论:川芎-赤芍药对通过潜在的 13 个活性成分作用于可能的 16 个靶点调控相关信号转导通路,通过抗炎、调脂和保护血管等方式产生抗动脉粥样硬化的作用.

探索川芎-赤芍药对(Chuanxiong-Chishao herb pair,CX-CS)对心肌梗死合并动脉粥样硬化(myocardial infarction-atherosclerosis,MI-AS)小鼠复合模型的干预作用,并探讨其对缺血心肌、主动脉组织环状RNA(circular RNA,circRNA)/长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表达谱的影响.将 60 只雄性 ApoE-/-小鼠随机分为模型组,CX-CS高(7.8 g·kg-1)、中(3.9 g·kg-1)、低(1.95 g·kg-1)剂量组,阳性药组(美托洛尔 26 mg·kg-1,辛伐他汀 5.2 mg·kg-1),每组 12 只.假手术组采用雄性C57BL/6J小鼠.模型组及药物干预组给予高脂喂养 10 周后进行冠状动脉前降支结扎术,术后继续给予高脂饲料 2 周,建立MI-AS模型.假手术组给予普通饲料喂养,手术时只穿线不接扎.药物干预组于高脂喂养第 9 周起给予CX-CS、阳性药灌胃 4 周,模型组和假手术组给予等体积生理盐水.给药结束后取CX-CS中剂量组、模型组、假手术组心脏和主动脉组织行全转录组测序.结果发现,CX-CS高、中剂量组小鼠心功能显著改善、心肌纤维化面积缩小,CX-CS中剂量组斑块面积显著减小.CX-CS处理可逆转复合模型中粥样硬化主动脉的circRNA_07227、circRNA_11464 以及缺血心肌的circRNA_11505等circRNA的表达.主动脉CX-CS(ACC)组与主动脉模型(AM)组间的差异circRNA主要富集在脂质合成、代谢及转运、炎症、血管新生等过程.心脏CX-CS(HCC)组与模型(HM)组间差异circRNA主要富集在血管新生、血压调节等过程.CX-CS处理可逆转复合模型中粥样硬化主动脉的ENSMUST00000162209 以及缺血心肌的TCONS_00002123 等lncRNA表达变化.ACC组与AM组间的差异lncRNA主要富集在脂质代谢、血管新生、自噬、凋亡、铁死亡等过程.HCC组与HM组间差异lncRNA主要富集在血管新生、自噬、铁死亡等过程.综上,CX-CS可调控多种circRNA及lncRNA的表达,其干预冠心病的机制可能与调控缺血心肌血管新生、炎症以及AS主动脉的脂质代谢及转运、炎症、血管新生等过程有关.

目的:采用多指标综合评分法确定临床经验方稳心汤的最佳提取工艺.方法:采用L9(34)正交试验设计法对稳心汤进行提取工艺优化,采用多指标综合评分法确定最优提取工艺.对姜黄、肉桂、莪术、细辛考察加水量、浸泡时间、提取时间对挥发油得率的影响;对党参、川芎、全蝎进行乙醇正交试验设计,以党参炔苷和干膏率进行综合评分;对赤芍、大黄、山楂、麦冬、甘草,以及经乙醇提取党参、川芎、全蝎残留的药渣进行水提醇沉工艺正交试验优化,以芍药苷和干膏率的综合评分为考察指标,优选出最佳工艺参数,并进行验证.结果:确定了稳心汤的提取工艺,其中姜黄、肉桂、莪术、细辛提取挥发油的最佳提取工艺为加入8倍量水,浸泡6h,蒸馏5h,挥发油的得率较高;对党参、川芎、全蝎加入乙醇提取,最佳工艺为加入10倍70％乙醇,提取1.5h,提取2次;对乙醇提取药材残渣及赤芍、大黄、山楂、麦冬、甘草等进行水提醇沉,水提取工艺为加入8倍水,提取1.0h,提取2次,醇沉工艺为药液质量浓度1.12 g·mL-1,加入95％乙醇使含醇量达到60％,静止醇沉36 h.结论:通过多指标综合评分法优化的稳心汤提取工艺稳定可靠,适合工业化生产,为临床应用和新药的研发提供参考.

再造散是助阳益气,解表散寒的方剂,笔者通过整理本方古今相关文献,并结合抄方的临床体会,对其进行论述,以飨同道.1 再造散组成及功用再造散载于明代陶节庵《伤寒六书》:"再造散……黄芪、人参、桂枝、甘草、熟附、细辛、羌活、防风、川芎、煨生姜.夏月,加黄芩、石膏,冬月,不必加."[1]原文记载该方的煎服方法:"水二锺,枣二枚,煎至一锺.槌法,再加炒芍药一撮,煎三沸,温服."再造散的药物绝大多数为温性药,大部分药物味辛、甘.本方之芍药,大部分医家认为是与桂枝合用以起调和营卫之意;而有学者[2-3]认为其应该是赤芍.与桂枝相配可使其凉血治燥不碍汗;王绵之认为补阳气之时应该和血,汗血同源,但赤芍性凉,炒用制其凉性.从组成药物看,再造散功可益气助阳,解表散寒,主治以阳气虚弱为主的病证,颇具少阴、太阳合病之征.

目的 基于新型核亮色谱技术建立补阳还五汤(BHD)的指纹图谱,为其质量控制提供依据.方法 采用 Agilent Poroshell 120 SB-C18(150 mm×4.6 mm,2.7μm)色谱柱,以乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相,体积流量为 0.8mL/min,柱温 30℃,检测波长为 280 nm.采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2012版"对 15批BHD指纹图谱进行评价分析.采用对照品比对和高分辨质谱技术鉴定了 21个化合物.结果 在 38min内建立了 BHD的指纹图谱,共确定了 21个共有峰(Pl～P2l),涵盖了组方中全部 7味药材.同时采用四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱(Q-Orbitrap HRMS/MS)、对照品及阴性方比较法对 21个共有峰进行了归属鉴定,其中奎宁酸甲酯(P4)、毛蕊异黄酮苷(P11)、毛蕊异黄酮苷-6"-O-丙二酸酯(P13)、芒柄花苷(P15)、(6αR,11αR)-9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷(P16)、异微凸剑叶莎醇-7-O-β-D-葡萄糖苷(P17)、毛蕊异黄酮(P18)、芒柄花素(P19)、(6αR,11αR)-9,10-二甲氧基紫檀烷(P20)、异微凸剑叶莎醇(P21)来源于黄芪;琥珀酰基腺苷(P3)、6-羟基山柰酚-3,6-O-二葡萄糖-7-O-葡萄糖醛酸苷(P5)、山柰酚-3-O-槐糖苷(P1O)来源于红花;没食子酸(P2)、芍药苷(P9)来源于赤芍;香草酸(P7)来源于当归;鸟苷(P1)来源于地龙;苦杏仁苷(P6)、野樱苷(P8)来源于挑仁;阿魏酸(P12)、洋川芎内酯H(P14)来源于当归和川芎.结论 首次采用核亮色谱技术建立了 BHD的UHPLC指纹图谱,方法简便、耗时短、专属性强,并结合共有峰的高分辨质谱定性分析,为BHD的质量评价及药效物质基础研究奠定了基础.

目的 研究肌动蛋白微丝(F-actin)体外刺激对血小板活化及血小板凝溶胶蛋白(gelsolin)浓度的影响,同时观察活血化瘀中药赤芍-川芎有效成分配伍的体外干预效应.方法 以人水洗血小板作为研究对象,分为低(2.5 μmol/L)、中(5μmol/L)、高(10 μmol/L)浓度F-actin组以及花生四烯酸(AA)、二磷酸腺苷(ADP)、凝血酶(th rombin)组,同时设中药F-actin(10 μmol/L)组和中药AA组使用芍药苷和川芎嗪联合干预,阿司匹林F-actin(10 μmol/L)组和阿司匹林AA组使用阿司匹林作为干预药物,另设对照组.采用流式细胞术检测血小板活化标志物CD62p的表达,使用血小板聚集仪测定最大血小板聚集率(PAR),采用ELISA法测定血小板gelsolin浓度.结果 与对照组比较,不同浓度F-actin及AA、ADP、thrombin均可引起PAR和CD62p表达升高(P＜0.01),且F-actin呈浓度依赖性.与AA组比较,低、中浓度F-actin组PAR与CD62p表达下降(P＜0.01),高浓度F-actin、ADP、thrombin组则无明显差异(P＞0.05).与对照组比较,中、高浓度F-actin组及AA组可诱导血小板gelsolin浓度增高(P＜0.05,P＜0.01).与AA组比较,低、中浓度F-actin以及ADP、thrombin组gelsolin浓度下降(P＜0.05).与高浓度F-actin组或AA组比较,川芎嗪和芍药苷与阿司匹林均可抑制F-actin和AA诱导的PAR和CD62p表达升高(P＜0.05).与高浓度F-actin组或AA组比较,川芎嗪和芍药苷可降低F-actin或AA诱导的gelsolin升高(P＜0.05),但阿司匹林无此效应(P＞0.05).结论 F-actin体外能够激活血小板导致其聚集、活化,10 μmol/L浓度能够诱导血小板大量分泌gelsolin,其效应与AA相似.血小板gelsolin可能是芍药苷和川芎嗪体外抗血小板聚集、活化的一个有效干预靶点.

脑缺血是中国发病率最高的疾病之一,中药川芎-赤芍药对可干预脑缺血,减轻脑缺血炎症反应和凋亡.为系统研究川芎-赤芍药对干预脑缺血的作用机制,该研究借助计算机网络药理学技术和分子对接技术预测川芎-赤芍干预脑缺血的作用靶点和信号通路,并以大鼠脑缺血模型对核心靶点进行验证.结果表明,川芎-赤芍药对活性化合物-脑缺血疾病靶点网络包含30个化合物,38个靶点和9条通路,主要化合物包括川芎中酚酸类成分和赤芍中单萜苷类成分,关键靶点涉及MAPK1(mitogen-activated protein kinase 1)、SRC(steroid receptor coactivator)、EGFR(epidermal growth factor receptor)、MAPK14(mitogen-activated protein kinase 14)、CASP3(caspase-3)、CASP7(caspase-7)、ESR1(estrogen receptor 1)和 MAPK8(mitogen-activated pro-tein kinase 8)等,靶点基因功能偏向蛋白激酶活性、蛋白质自磷酸化、肽基丝氨酸磷酸化和蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶活性等,重要的KEGG通路涉及Ras信号通路、ErbB信号通路和VEGF信号通路.分子对接结果表明,儿茶素、氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷等成分与MAPK1、SRC、EGFR、MAPK14、CASP7有强烈的结合能力.MCAO大鼠实验结果表明,川芎-赤芍药对可以显著改善模型大鼠脑组织缺血损伤和细胞间质水肿,同时显著降低caspase-7的活化和ERK1/2的磷酸化.川芎-赤芍药对通过促进细胞增殖和分化、减少炎症因子表达、保护神经细胞死亡和抗神经细胞凋亡作用的多表型干预的网络模式减轻脑缺血损伤,其作用信号通路与Ras信号通路、ErbB信号通路、VEGF信号通路最为相关.该研究为川芎-赤芍临床干预脑缺血提供依据,也为药对现代化研究提供思路.

目的:建立赤芍-川芎药对中没食子酸、绿原酸、氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A及藁本内酯11个成分的含量测定方法,考察不同配伍比例及配伍方式对赤芍-川芎药对中11个主要活性成分溶出量的影响.方法:采用Welch Ultimate? XBC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈(A)-0.1％磷酸溶液(B),梯度洗脱;检测波长为230 nm,流速为1.0 ml·min-1,柱温为35℃,对赤芍中5个成分(没食子酸、氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷及1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖)进行检测;采用Boston C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈(A)-0.5％醋酸溶液(B),梯度洗脱;检测波长为285 nm,流速为1.0 ml·min-1,柱温为30℃,对川芎中6个成分(绿原酸、阿魏酸、洋川芎内酯Ⅰ、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A及藁本内酯)进行检测.进一步测定赤芍-川芎药对的单煎液、单煎合并液(1:1)以及不同配比的合煎液(3:1,2:1,1:1,1:2,1:3)中上述11个主要活性成分的含量.结果:合煎液中各成分提取率明显大于单煎液和单煎合并液中提取率,且在赤芍-川芎药对配比为1:1时多种成分含量最高.结论:赤芍-川芎(1:1)的配伍比例以及合煎的配伍方式有利于11个成分在水煎液中的溶出.

目的:采用多指标-Box-behnken design(BBD)效应面法,优选赤芍-川芎药对(1∶1)最佳提取工艺.方法:在单因素试验的基础上,采用三因素三水平BBD试验设计对赤芍-川芎(1 ∶ 1)中4成分成分提取工艺参数进行优选.以乙醇浓度、料液比、提取时间为自变量,以芍药内酯苷、芍药苷、洋川芎内酯A及藁本内酯含量为因变量,采用Hassan方法计算总评"归一值",并用多元线性回归及二项式拟合,建立总评归一值与自变量之间的数学关系,经效应面法预测最佳工艺条件.结果:最佳提取工艺为乙醇浓度68％、料液比1 ∶11、提取时间79 min,提取2次;芍药内酯苷、芍药苷、洋川芎内酯A及藁本内酯含量分别为7.587 0,46.192 0,8.784 0,25.731 0 mg·g-1.结论:实测值与预测值接近,表明采用多指标-效应面法优化后得到的综合提取工艺参数可用于赤芍-川芎药对(1∶1)中有效成分的提取.

改善心肌缺血和抗动脉粥样硬化是冠心病防治的重点.血管新生对冠心病存在双面性作用,可促进缺血心肌侧支血管生长但又易导致动脉粥样硬化斑块破裂,中医整体观指导下的活血化瘀治法可能有效解决冠心病治疗中的这一矛盾.川芎-赤芍药对是活血化瘀经典药对,临床对动脉粥样硬化、冠心病心绞痛和PCI术后再狭窄等有较好疗效,可促进缺血心肌血管新生而改善心肌缺血、抑制斑块内血管新生而抗动脉粥样硬化,其差异性调节血管新生的机制可能是通过调节以缺氧或炎症为主导的不同微环境、同一分子与不同受体/亚型的结合、共同的血管新生靶点实现的,提示活血化瘀方药可同步实现"弱者彰之""亢者承之"的差异性调节作用,最终在整体水平上改善冠心病.