乙型肝炎是我国主要的公共卫生问题。核苷(酸)类似物和干扰素(IFN)两大类药物能够有效抑制HBV的复制，但由于不能彻底清除cccDNA，治疗效果仍不甚满意。IFNλ是新发现的一类细胞因子家族，通过激活Jak-STAT通路从而诱导抗病毒、抗增殖、抗肿瘤作用。近年来研究发现，IFNλ作为一种治疗手段及免疫学指标在乙型肝炎中具有重要意义，IFNλ可有效抑制HBV的复制，其基因多态性与乙型肝炎的预后及易感性密切相关，且IFNλ在乙型肝炎相关的肝细胞癌中也表现出一定的抗肿瘤活性，有望用于临床上乙型肝炎患者的辅助治疗。本文就目前IFNλ在乙型肝炎中的意义及相关研究进展进行阐述。

目的:探讨脓毒症血栓形成的炎症环境中血清来源C5a补体能否激活多型核中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophils，PMNs）释放中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps，NETs），以及干扰素-λ1/白介素29（interferon-λ1/interleukin 29，IFN-λ1/IL-29）是否具有抑制NETs相关凝血酶生成的作用。方法:健康志愿者和脓毒症患者的外周血样分别来自2018—2019年苏州大学附属第二医院门诊和住院部，体外研究脓毒症患者血清C5a刺激的健康志愿者外周血分离的PMNs细胞，IL-29和抗CD88单抗作为NETs释放调节因子，免疫荧光分析（immunofluorescence, IF）PMNs上NETs的释放水平，免疫印迹技术（immuno blot，IB）评估PMNs上组织因子（tissue factor，TF）的表达，荧光光谱法（fluorescence spectroscopy，FS）测定上清液中循环DNA水平，酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）测定凝血酶-抗凝血酶（thrombin-antithrombin，TAT）复合物水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析，以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:以脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs释放的NETs表达水平（20.5±3.7）%为对照组，IL-29和抗CD88单抗抑制了脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs上TF表达的NETs释放，采用IF技术测定的表达水平分别为（5.0±1.5）%、（7.3±3.1）%，差异均有统计学意义（ q=9.23和8.73，均 P<0.01）。IL-29和抗CD88单抗抑制了脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs上TF水平，IB测定的TF表达水平分别为（0.52±0.03）%、（0.57±0.02）%，与脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs的TF表达水平（0.81±0.03）%进行比较，差异均有统计学意义（ q=3.44和3.21，均 P<0.05）。IL-29和抗CD88单抗降低了NETs相关的TAT复合物的水平，分别为（3.3±0.4）ng/mL、（4.6±0.7）ng/mL，与脓毒症患者血清C5a诱导的健康志愿者PMNs释放的NETs相关的TAT复合物水平（7.8±0.7）ng/mL比较，差异均有统计学意义（ q=6.77和5.27，均 P<0.01）。 结论:脓毒症患者血清来源的C5a诱导健康志愿者PMNs内TF的累积和表达TF的NETs释放，血清C5a促进了NETs依赖性凝血酶的生成。IL-29具有抑制C5a诱导的NETs释放及其相关的凝血酶生成。

目的:比较发热伴血小板减少综合征（SFTS）与恙虫病两种疾病患者病程中免疫损伤的差异。方法:采用前瞻性病例对照研究，选择2014年10月至2017年6月安徽医科大学第一附属医院收治的31例SFTS患者和16例恙虫病患者，另外以10例健康体检者作为对照。用流式细胞仪检测患者外周血CD4 +、CD8 + T淋巴细胞计数以及CD3 + T淋巴细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）、B淋巴细胞及浆细胞的比例；同时用Luminex液相芯片平台技术检测外周血34个细胞因子水平。比较两组患者间淋巴细胞及细胞因子的差异。 结果:SFTS患者外周血CD3 + T淋巴细胞比例、CD4 +及CD8 + T淋巴细胞计数明显低于恙虫病患者（ t值分别为4.860、9.411和5.030，均 P<0.01），NK细胞及B淋巴细胞比例明显高于恙虫病患者（ t值分别为2.344和5.896，均 P<0.05）。SFTS患者病程中外周血浆细胞比例为（7.7±1.2）%，危重患者最高可达30%，都表现为λ单克隆型细胞群；而恙虫病患者外周血中未检测到浆细胞。检测34个细胞因子水平发现，SFTS与恙虫病患者白细胞介素- 1受体抗体（IL-1RA）、白细胞介素（IL-6、IL-15、IL-10、IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ -干扰素（IFN-γ）、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、嗜酸粒细胞趋化因子（Eotaxin）、IFN -γ诱导蛋白10（IP-10）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、巨噬细胞炎症蛋白（MIP-1α、MIP-1β）、血小板源生长因子（PDGF-AA、PDGF-AB/BB）及受激活调节正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）表达均异常，其中SFTS患者IL-1RA、IL-6、IL-15、IL-10、TNF-α、IFN-γ、G-CSF、Eotaxin、IL-8、IP-10、MCP-1和MIP-1α水平明显高于恙虫病患者（ Z值分别为2.312、2.447、3.660、5.444、1.965、2.402、2.402、2.997、3.525、2.481、3.817和2.211，均 P<0.05），PDGF-AA、PDGF-AB/BB和RANTES分泌水平明显低于恙虫病患者（ Z值分别为3.728、2.514和2.649，均 P<0.05）。相关性分析发现，RANTES、PDGF-AA和PDGF-AB/BB水平均与SFTS、恙虫病患者血小板水平呈明显正相关（SFTS： r值分别为0.223、0.365、0.330，恙虫病： r值分别为0.263、0.632、0.407，均 P<0.05）。在SFTS患者中，与存活组（21例）比较，死亡组（10例）CD3 + T淋巴细胞比例、CD4 + T淋巴细胞计数明显降低，浆细胞比例明显升高（ t值分别为3.980、3.314和26.692，均 P<0.01），IL-1RA、IL-6、IL-15、IL-10、TNF-α、IFN-γ、G-CSF、Eotaxin、IL-8、IP-10、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β明显升高，PDGF-AA、PDGF-AB/BB和RANTES明显降低（ Z值分别为3.930、4.014、2.832、3.592、2.958、3.508、2.578、3.254、4.270、3.465、2.663、3.085、3.107、3.639、3.043和3.825，均 P<0.05）。 结论:SFTS患者较恙虫病患者免疫功能受损更严重；SFTS患者过强的体液免疫及T淋巴细胞凋亡程度与死亡发生密切相关。病程中检测CD4细胞、浆细胞及IL-6、IL-10为代表的促炎和抗炎细胞因子对SFTS与恙虫病的鉴别及病情评估有重要临床意义。

目的:分析干扰素(interferon，IFN)α2b和λ1在Hep2细胞和人呼吸道上皮细胞(human airway epithelium，HAE)中抗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)病毒活性。方法:在Hep2细胞中，RSV(MOI＝0.01)感染后，加入IFN-α2b或IFN-λ1，48 h后观察细胞病变(cytopathic effect，CPE)、RT-qPCR方法测定病毒载量、免疫荧光法检测RSV F蛋白及结晶紫法检测细胞存活率。在HAE细胞中，用IFN-α2b和IFN-λ1预处理24 h后，RSV(MOI＝0.01)感染HAE，RT-qPCR方法测定第1～7天培养上清中的病毒载量，免疫荧光法检测RSV F蛋白及空斑法测定第7天培养上清中的病毒滴度。结果:在Hep2细胞中，IFN-α2b和IFN-λ1处理组的CPE较病毒对照组均有所缓解，且均是高浓度组干扰素的CPE轻于低浓度组。不同浓度的IFN-α2b和IFN-λ1均可以显著降低RSV病毒载量( P<0.001)，且高浓度组病毒载量明显低于低浓度组( P<0.001)。此外，IFN-α2b和IFN-λ1均能够降低RSV感染后F蛋白表达量，同时提高细胞存活率。在HAE细胞中，IFN-α2b和IFN-λ1均能抑制RSV病毒复制，降低病毒滴度( P<0.001)和降低RSV F蛋白表达量。 结论:IFN-α2b和IFN-λ1在传代细胞Hep2和HAE中对RSV均有较好抗病毒活性，为干扰素抗呼吸道病毒研究提供了数据参考。

新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus-2，SARS-CoV-2）感染引起的新型冠状病毒肺炎（coronavirus disease 2019，COVID-19）在世界范围内广泛流行，造成了前所未有的公共卫生灾难，找到有效的药物和治疗方案显得尤为迫切。本文综述了干扰素（IFN）与COVID-19相关的最新研究进展，并重点分析了IFN-λ（III型IFN）抗SARS-CoV-2感染的理论基础，提示IFN-λ具有预防和治疗COVID-19的潜力，同时本文也列举了使用IFN-λ治疗COVID-19存在的潜在风险。

目的:观察Ⅰ型小肠闭锁肠腔隔膜组织黏膜β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TIR-domain-containing adapter-inducing interferon-β，TRIF)、肿瘤坏死因子受体相关因子蛋白3(tumor receptor associated factor，TRAF3)、干扰素-β(interferon-beta，IFN-β)和干扰素-λ1(interferon -λ1，IFN-λ1)分子的表达特征，探索胚胎期Toll样受体4(toll like receptor 4，TLR4)-TRIF非依赖性信号通路与肠管再通过程的相关性。方法:采用免疫组化技术观察和比较新生儿正常肠壁和Ⅰ型肠闭锁隔膜组织黏膜层内TRIF通路内重要分子的表达特征。收集16例患儿组织标本(解放军总医院儿科医学部1例，首都儿科研究所1例，河北医科大学第二医院6例，哈尔滨市儿童医院5例，长春市儿童医院3例)，均为术中证实的Ⅰ型肠闭锁隔膜组织，为隔膜组；以同一患儿术中行肠切除、肠吻合过程中钳取收集的正常肠壁组织为对照组。患儿手术年龄为出生后1~3 d，其中空肠闭锁13例(男5例，女8例)，回肠闭锁3例(男1例，女2例)。将组织标本转入快速组织处理系统进行组织标本连续切片。采用常规HE染色进行定位，隔膜组和对照组各16例，每个病例染色后随机取4个视野(非肌肉区域)，应用图像分析软件Image pro plus 6.0测量积分光密度(integral-optical density ，IOD)和面积(Area)，并计算出平均吸光度( A)(OD)。OD＝IOD/Area。采用 t检验和双盲法分析免疫组化平均光密度。 结果:新生儿正常肠壁组织黏膜层的TRIF、TRAF3、IFN-β和IFN-λ1的分子表达不明显或低表达，在隔膜组织黏膜层表达显著。半定量分析结果显示，TLR4、MyD88、TRAF6和IRAK4分子在隔膜组织黏膜层表达比新生儿正常肠壁黏膜层多，二者差异有统计学意义(隔膜组织分别为0.6 316±0.0 268，0.5 066±0.0 378，0.6 091±0.0 270，0.3 841±0.0 610，正常肠壁分别为0.4 333±0.0 409，0.3 758±0.0 365，0.4 108±0.0 263，0.2 108±0.0 573， P值分别为0.0 042，0.0 360，0.0 057，0.0 137。 结论:TLR4/MyD88信号通路参与了Ⅰ型肠闭锁隔膜组织的形成或发展。

目的 探讨香雪抗病毒口服液对甲型流感病毒的活性及其在炎症免疫应答中的潜在作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)染色法检测香雪抗病毒口服液对MDCK细胞和A549细胞的细胞毒性作用.采用细胞病变抑制法(CPE)及空斑减少实验对香雪抗病毒口服液进行抗病毒活性检测.采用免疫荧光法检测 NP 蛋白.实时荧光定量PCR测定炎症细胞因子的表达情况.采用蛋白印迹实验检测香雪抗病毒口服液对炎症相关信号通路的蛋白表达的影响.结果 香雪抗病毒口服液对甲型流感病毒 A/PR/8/34(H1N1)和 A/Aichi/2/68(H3N2)均有一定的抗病毒抑制作用,半数细胞毒性浓度(TC50)分别为42.12、79.36 mg/mL,半数抑制浓度(IC50)分别为 8.665、5.260 mg/mL,并可减少H1N1 病毒空斑形成.香雪抗病毒口服液能呈剂量相关性地降低H1N1诱导的A549 细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、视黄酸(维甲酸)诱导基因蛋白I(RIG-I)、趋化因子(CC基序)配体 5(CCL5)、巨噬细胞炎症蛋白-1β(MIP-1 β)、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、白细胞介素-10(IL-10)、λ干扰素(IFN-λ)、β干扰素(IFN-β)、白细胞介素-8(IL-8)mRNA的表达(P＜0.05、0.01、0.001).在流感病毒单复制周期中,香雪抗病毒口服液在早期阶段 0～2 h干预,具有良好的抗流感病毒效果.香雪抗病毒口服液能显著抑制Toll样模式识别受体 3(TLR3)、RIG-I、黑色素瘤分化相关基因 5(MDA-5)受体的表达,下调核转录因子-κB亚基p65(NF-κB p65)、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、信号转导和转录激活因子 1(STAT1)、STAT2、STAT3 的磷酸化水平,且在 20 mg/mL浓度下明显下调这些蛋白的表达.结论 香雪抗病毒口服液不仅能有效抑制甲流感病毒在人宿主细胞中复制,降低流感病毒诱导的炎症因子表达,而且能显著抑制流感病毒诱导天然免疫信号通路的相关蛋白表达,表明香雪抗病毒口服液具有防治流感病毒的潜力.

目的 采用HEK-293F细胞瞬时转染表达重组人干扰素λ1(recombinant human interferonλ1,rhIFNλ1),并进行鉴定.方法 通过2种信号肽[T细胞受体(T cell receptor,TCR)和天然信号肽(nature signal peptide,NSP)]、3种载体[pcDNA3.4、泛染色质开放原件(ubiquitous chromatin opening element,UCOE)、PFR]和目的基因 rhIFNλ 1 构建6种信号肽-载体组合的重组质粒,以HEK-293F为宿主细胞,摇瓶规模瞬时转染表达rhIFNλ1.选择NSP及载体UCOE构建低糖基化rhIFNλ1重组质粒UCOE-Q46-λ,瞬时转染HEK-293F细胞,表达产物经阳离子交换层析(HiTrap SP FF)、蓝胶层析(HiTrap Blue HP)和分子筛凝胶过滤层析(Sephacryl S-100 HR)3步纯化,纯化产物进行Western blot及反相HPLC分析,并检测质谱分子量及N-末端氨基酸序列.结果 6种重组质粒经双酶切及测序鉴定,证明构建正确.随着转染时间的延长,6种表达产物的表达量逐渐增加,转染6 d时最高,达10～20 mg/L.低糖基化rhIFNλ1重组质粒UCOE-Q46-λ经双酶切及测序鉴定,证明构建正确.重组质粒UCOE-Q46-λ转染HEK-293F细胞6 d,细胞培养上清纯化产物的相对分子质量约27 800,纯度达97.372％,且可与小鼠抗人IL-29/IFNλ1单克隆抗体发生特异性结合;反相HPLC检测分析可见2个峰,出峰时间分别为15.6和20.0 min;质谱分子量约为24 000;N-末端5个氨基酸序列为G-P-V-P-T.结论 HEK-293F细胞表达的rhIFNλ1纯度较高,为该蛋白的进一步研究奠定了基础.

乙型肝炎(hepatitis B)是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)引起的传播广、治愈难、危害性大的流行性肝病之一.每年都有约 50 万人死于 HBV 长期感染所导致的肝硬化和肝癌.α 干扰素(interferon alpha,IFN-α)是治疗慢性乙型肝炎的一线用药,过往研究表明,乙肝患者对IFN-α 治疗应答存在差异,乙肝病毒基因型、谷丙转氨酶(ALT)水平等都会影响 IFN-α 的治疗效果.随着精准医学的进步,科学研究者们率先发现了 IL28B(interferon lambda 3,IFN-λ3,干扰素 λ3)基因多态性与丙型肝炎患者对 IFN-α 应答之间的相关性,中华医学会肝病学分会和感染病学分会已将 IL28B 基因多态性纳入《中国丙型肝炎防治指南(2015 版)》[1],作为 IFN-α 治疗丙肝效果的预测指标.而美国《PEG-IFN-α 治疗丙型肝炎临床药物基因组学治疗指南》也提出,IL28B 基因在 rs12979860 位点上的 CC 型为 PEG-IFN-α 治疗优势应答基因型[2].

目的 分析干扰素λ3基因(IFNL3)/干扰素λ4基因(IFNL4)单核苷酸多态性(SNPs)对HIV-1感染患者应用高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的影响.方法 收集2015年6月至12月浙江大学医学院附属第一医院应用HAART≥1年的63例HIV-1成年患者.采用定量聚合酶链反应(qPCR)定量检测患者血浆HIV-1 RNA、外周血单个核细胞(PBMC)的HIV-1 DNA水平和外周血SNPs.应用磁珠法检测血浆炎性细胞因子水平,并采用流式细胞仪检测外周血CD4 +T和CD8 +T淋巴细胞计数.根据抗病毒治疗应答情况将患者分为HIV-1 RNA低表达组(<100拷贝/mL)和高表达组(≥100拷贝/mL);根据淋巴细胞计数将患者分为CD4 +T淋巴细胞低表达组(<250个/μL)和高表达组(≥250个/μL);根据外周血HIV-1 DNA水平将患者分为HIV-1 DNA低表达组(<100拷贝/106个细胞)和高表达组(≥100个拷贝/106个细胞).分析IFNL3/IFNL4的SNPs、炎性细胞因子在HIV-1 RNA、HIV-1 DNA和CD4 +T淋巴细胞各亚组的分布和水平,以及SNPs与炎性细胞因子的关系.采用SPSS 18.0软件对数据进行分析.结果 rs368234815、rs8099917和 rs4803223在HIV-1 RNA低表达组和高表达组的分布差异具有统计学意义(χ2=0.043、0.047和0.032,P值均<0.05).IL-10在HIV-1 RNA低表达组较高表达组下降(U=4.00,P<0.05);IL-13水平在HIV-1 RNA高表达组和HIV-1 DNA高表达组较相对应组下降(U=0.00和2.00,P<0.05);IL-21水平在HIV-1 RNA高表达组及CD4 +T淋巴细胞低表达组较相对应组下降(U=3.00和2.00,P<0.05); IL-28A水平则在HIV-1 RNA高表达组、HIV-1 DNA高表达组和CD4 +T淋巴细胞低表达组均下降(U=3.00、0.50和3.00,P<0.05或 <0.01).此外,rs368234815与 IL-21相关(H =6.690,P <0.05),IL-21在rs368234815ΔG/ΔG[131.88(2.66,174.00)]亚型的表达高于 TT/TT[6.79(2.81, 26.48)](P <0.05);rs4803223与IFN-γ相关(H=6.690,P<0.05),IFN-γ在GG亚型[62.26(19.45,96.49)]中的表达要高于GA亚型[6.98(2.19, 99.14)](P<0.05).结论 IFNL3/IFNL4的rs368234815, rs8099917和rs4803223可能与HIV-1患者应用HAART治疗效果、炎性因子表达相关,并可能影响HAART疗效.