目的:研究模拟微重力对从医院获得性肺炎老年患者痰标本中分离出来的泛耐药鲍曼不动杆菌表型的影响。方法:利用微重力三维细胞培养系统建立鲍曼不动杆菌模拟微重力株，同时建立正常重力株作为对照组，利用Bioscreen观察两菌株的生长速度，通过涂抹平板计数法对两菌株进行菌落计数，通过观察两菌株在含有5 mmol/L过氧化氢(H 2O 2)的磷酸盐缓冲溶液中存活率研究两菌株的氧化应激性，通过结晶紫染色法观察两菌株的生物膜形成能力，通过K-B纸片法观察两菌株的抗生素敏感性。 结果:与正常重力株比较，模拟微重力株生长速度减慢，尤其是在10 h以后；平板菌落计数结果显示，与正常重力株比较，模拟微重力株生长受到抑制，菌落数为(2.33±0.61)×10 13CFU/L比(4.87±0.63)×10 13CFU/L( t＝4.865， P＝0.040)；模拟微重力株在H 2O 2溶液中存活率降低，为(51.43±0.97)%比(56.53±2.54)%( t＝4.715， P＝0.042)；模拟微重力株生物膜形成能力下降，吸光度( A) 570值为0.449±0.014比0.506±0.024( t＝8.692， P＝0.013)；阿米卡星对模拟微重力株的抑菌环直径(15.17±0.21)mm，比正常重力株(13.77±0.15)mm增加( t＝6.725， P＝0.021)。 结论:模拟微重力使泛耐药鲍曼不动杆菌的生长速度、氧化应激性、生物膜、抗生素敏感性发生了改变，这种现象可以为泛耐药鲍曼不动杆菌相关的医院获得性肺炎老年患者的治疗提供新策略。

目的:探索牙龈卟啉单胞菌（Pg）持留菌（Ps）对巨噬细胞免疫炎症反应的影响及其作用机制。方法:将Pg（ATCC 33277）悬浮培养和生物膜培养至对数末期（72 h）后，不使用药物处理以及使用高浓度甲硝唑（100 mg/L）和（或）阿莫西林（100 mg/L）处理不同时间，分别为空白对照组、甲硝唑组、阿莫西林组、甲硝唑+阿莫西林组，采用血平板计数法检测Ps生成数量，细菌活死染色检测Ps的生存状态；使用Pg和甲硝唑处理的PgPs（M-PgPs）刺激巨噬细胞，分别为空白对照组（不经任何处理）、Pg组、M-PgPs组；通过透射电镜观察细菌进入细胞内部的情况；使用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测巨噬细胞内炎症相关指标的表达情况；通过RT-qPCR检测巨噬细胞叉头盒转录因子1（FOXO1）信号通路的激活情况；利用共聚焦免疫荧光显微镜检测FOXO1在巨噬细胞内的分布情况。使用FOXO1抑制剂（Fi）和激活剂（Fa）处理巨噬细胞后，用Pg和M-PgPs刺激巨噬细胞，分别为空白对照组（不经任何处理）、Pg组、M-PgPs组、Fi组、Fi+Pg组、Fi+M-PgPs组、Fa组、Fa+Pg组和Fa+M-PgPs组，通过RT-qPCR和ELISA法检测巨噬细胞内炎症相关指标的表达情况。结果:悬浮培养和生物膜中的Pg经过高浓度的甲硝唑和（或）阿莫西林处理后，均无法被完全杀灭，且存活的Ps可重新生长形成菌落；Pg和M-PgPs均可进入巨噬细胞内部且巨噬细胞中的炎症因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的蛋白表达量［Pg组分别为（2 392±188）、（162±29）、（5 558±661）、（789±155）μg/L；M-PgPs组分别为（2 415±420）、（155±3）、（5 732±782）、（821± 176）μg/L］均显著高于空白对照组［分别为（485±140）、（21±9）、（2 332±87）、（77±7）μg/L］（均 P<0.01）。同时，Pg和M-PgPs均可促进巨噬细胞内FOXO1入核，巨噬细胞内FOXO1信号通路相关基因FOXO1、B细胞淋巴瘤6和Krüppel样转录因子2 mRNA的相对表达量均显著高于空白对照组（均 P<0.05）。另外，Fi+Pg组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的蛋白表达量［分别为（1 081±168）、（70±8）、（1 976±544）、（420±47）μg/L］均显著低于Pg组［分别为（4 411±137）、（179±6）、（5 161±929）、（934±24）μg/L］（均 P<0.05）；Fi+M-PgPs组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的蛋白表达量［分别为（1 032±237）、（74±10）、（1 861±614）、（405±32）μg/L］均显著低于M-PgPs组［分别为（4 342±314）、（164±17）、（4 438±1 374）、（957±25）μg/L］（均 P<0.05）。相反，Fa+Pg组IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α蛋白表达量［分别为（8 198±1 825）、（431±28）、（8 919±650）、（2 186±301）μg/L］以及Fa+M-PgPs组蛋白表达量［分别为（8 159±2 627）、（475±26）、（8 995±653）、（2 255±387）μg/L］均显著高于Pg组和M-PgPs组（均 P<0.05）。 结论:PgPs对甲硝唑和阿莫西林表现出高度耐药性；M-PgPs通过上调FOXO1信号通路诱发巨噬细胞的免疫炎症反应，该作用与未经药物处理的Pg无显著差异。

目的:研究输尿管支架表面载铜涂层的抗菌性能及其生物相容性，以确定最适宜的载铜水平。方法:利用聚多巴胺（PDA）及二甲胺基甲硼烷（DMAB），在聚氨酯（PU）支架表面构建具有不同铜含量的载铜PDA涂层。通过平板计数法，研究涂层对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀灭情况；采用扫描电镜，研究涂层表面的细菌黏附情况；利用荧光显微镜，观察细菌在涂层表面的活/死情况；利用细胞增殖试验，将样品与L929细胞共培养，研究载铜涂层的生物相容性。结果:载铜样品分别与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌培养24 h后，其抗菌率均超过90%，且随着涂层中铜含量的增加，抗菌性能提升。载铜样品表面黏附的细菌量明显较低，且多数为死细菌。当所用涂层制备液中的铜含量为0.25~1 g/L时，载铜涂层表面的细胞增殖率高于80%，材料无细胞毒性。结论:涂层制备液中的铜含量为1 g/L时，可以制备出兼具优异的抗菌性能及良好的生物相容性的载铜PDA涂层，形成一种潜在的输尿管支架涂层制备方案。

目的:研究Cu-Fe-Zn合金微丝敷料的抗菌性能及体内、体外生物相容性，通过临床应用检测其促创面愈合功效。方法:以Cu-Fe-Zn合金微丝敷料为研究对象，利用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)测定金属离子释放浓度；在体外通过平板计数法评估敷料的综合抗菌性能；将Cu-Fe-Zn合金微丝敷料浸提液分别与表皮细胞(HaCaT)、成纤维细胞(NIH-3T3)共培养后，通过CCK-8试验测定其体外生物相容性；进一步将Cu-Fe-Zn合金微丝敷料应用于糖尿病小鼠创面以检测材料的体内生物相容性。通过前瞻性随机对照试验，选取中南大学湘雅三医院烧伤整形外科收治的50例烧伤、创伤患者，分为观察组25例与对照组25例，观察组行Cu-Fe-Zn合金微丝敷料治疗，对照组应用纳米银抗菌敷料，对比两组患者创面愈合时间和创面治疗效果。结果:ICP-MS检测Cu-Fe-Zn合金微丝敷料的Cu 2+释放浓度为1.3 μg/ml，其具备促进HaCaT、NIH-3T3细胞增殖功效(均 P<0.05)。Cu-Fe-Zn合金微丝敷料对铜绿假单胞菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌率均达到100%。应用Cu-Fe-Zn合金微丝敷料的糖尿病小鼠创面愈合率[(87.39±1.83)%]显著高于对照组[(58.66±3.54)%， P<0.05]，创面组织炎症反应较轻且创缘基质完整。经过Cu-Fe-Zn合金微丝敷料治疗的25例患者的创面愈合时间[(23.52±10.02)d]短于对照组患者[(40.84±21.22)d]( t＝17.159， P<0.001)，且患者的总体治疗有效率(96%)显著高于对照组患者(64%)(χ 2＝8.472， P＝0.015)。 结论:Cu-Fe-Zn合金微丝敷料具备良好的抗菌性能及生物相容性，作用于伤口具有显著促愈合的治疗效用，在有效促进创面愈合的同时发挥抗感染的效用，有望作为一种新型创面修复敷料。

目的:探讨复合硫化铜（CuS）/氧化石墨烯（GO）纳米片的聚乙烯醇（PVA）/羧甲基纤维素钠（CMC）仿生骨膜作为新型血管化骨组织工程薄膜材料的可行性。方法:将GO与CuS/GO纳米片分别复合PVA/CMC基底薄膜后，设为PVA/CMC/GO组、PVA/CMC/CuS/GO组，通过扫描电子显微镜与能谱仪观察并分析骨膜材料的微观结构与组成，另外设立PVA/CMC组（仅有PVA/CMC基底薄膜）与空白对照组（无材料）。在体外细胞水平上通过细胞增殖毒性检测（CCK-8）（分别检测CuS/GO纳米片浓度为0、50、100、200、400、800 μg/mL的PVA/CMC/CuS/GO薄膜）、活/死细胞染色、溶血实验评价生物相容性；细胞迁移和成管实验评价材料成血管作用；碱性磷酸酶（ALP）与茜素红染色评估成骨分化作用；免疫荧光染色与实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测成骨相关基因的表达；细菌平板计数法与抑菌圈法评估骨膜抗菌作用。结果:PVA/CMC/GO组和PVA/CMC/CuS/GO组的骨膜材料基底薄膜表面光滑平整，复合薄膜表面呈不规则片状凸起。生物安全性实验显示浓度为100 μg/mL CuS/GO纳米片的复合薄膜材料具有良好的生物相容性。体外成血管分化实验提示PVA/CMC/CuS/GO组的HUVEC细胞迁移率均显著优于其他3组，差异均有统计学意义（ P< 0.001）；PVA/CMC/CuS/GO组的细胞成管面积与长度均显著优于其他3组，差异均有统计学意义（ P< 0.001）。体外成骨分化实验显示PVA/CMC/CuS/GO组的MC3T3-E1细胞的ALP与茜素红染色定量分析均显著优于其他3组，差异均有统计学意义（ P<0.001）；此外PVA/CMC/CuS/GO组免疫荧光染色ALP与Ⅰ型胶原的荧光强度，RT-qPCR成骨基因ALP、BMP-2、骨钙素、骨桥蛋白的表达水平均显著高于其他3组，差异均有统计学意义（ P<0.001）。抗菌实验显示PVA/CMC/CuS/GO组对不同细菌的抑制作用与抑菌圈直径均显著大于其他3组，差异均有统计学意义（ P<0.001）。 结论:复合GO与CuS/GO纳米片的PVA/CMC薄膜材料兼具理想的生物相容性与抗菌性能，可促进体外成血管与成骨分化，尤其是具有成血管成骨耦合功能的PVA/CMC/CuS/GO抗菌骨膜材料，有望为感染性骨缺损的临床治疗提供新策略。

目的:探讨医用蛆虫分泌排泄物（ES）对糖尿病足溃疡（DFU）患者中性粒细胞吞噬及杀菌作用的影响。方法:采用实验研究的方法。选择东部战区空军医院内分泌科，糖尿病足中心2020年6—12月收治的符合入选标准的30例DFU患者［男16例、女14例，年龄（64±7）岁］。Percoll非连续性密度梯度离心法分离中性粒细胞，将每例患者细胞分别纳入生理盐水组、蛆虫ES组（每组30孔），分别加入无菌生理盐水和终质量浓度357 μg/mL（下同）蛆虫ES。培养1、2 h，行瑞氏染色观察并计算细胞吞噬率和吞噬指数。选择10例患者，将每例患者细胞分别纳入铜绿假单胞菌+中性粒细胞组、铜绿假单胞菌+中性粒细胞+蛆虫ES组（每组10孔），分别进行相应处理；另设置单纯铜绿假单胞菌组、铜绿假单胞菌+蛆虫ES组（每组10孔），分别加入铜绿假单胞菌+RPMI 1640培养液+无菌生理盐水、铜绿假单胞菌+RPMI 1640培养液+蛆虫ES。培养2 h，平板菌落计数法计数活菌菌落。分别选择6、6、3例患者，同前将每例患者细胞分别纳入蛆虫ES组和生理盐水组（每组6、6、3孔）并行相应处理。培养6 h，采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞中白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、溶菌酶mRNA表达，采用酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液中IL-1β、IL-6含量，采用免疫荧光法观察溶菌酶表达阳性细胞情况。对数据行单因素方差分析、配对样本 t检验、LSD检验及Wilcoxon符号秩和检验。 结果:培养1 h，蛆虫ES组细胞吞噬率、吞噬指数［53.5%（49.7%，58.0%）、3.18（2.96，3.32）］分别与生理盐水组［52.0%（47.5%，55.2%）、3.15（2.96，3.25）］相近（ Z=-1.701、-1.092， P>0.05）；培养2 h，蛆虫ES组患者细胞吞噬率、吞噬指数［70.0%（66.7%，72.0%）、4.47（4.22，4.96）］分别明显高于生理盐水组［58.0%（55.0%，60.0%）、4.11（3.52，4.24）， Z=-4.786、-4.279， P<0.01］。培养2 h，铜绿假单胞菌+中性粒细胞组活菌菌落数明显低于单纯铜绿假单胞菌组（ P<0.01），铜绿假单胞菌+中性粒细胞+蛆虫ES组活菌菌落数明显低于铜绿假单胞菌+蛆虫ES组和铜绿假单胞菌+中性粒细胞组（ P<0.01）。培养6 h，蛆虫ES组细胞IL-1β、IL-6、溶菌酶mRNA表达均较生理盐水组明显上调（ t=-3.279、-4.273、-4.763， P<0.05或 P<0.01），蛆虫ES组细胞培养上清液中IL-1β、IL-6含量分别明显高于生理盐水组（ t=-9.526、-6.447， P<0.01），蛆虫ES组溶菌酶阳性细胞明显多于生理盐水组。 结论:蛆虫ES可通过促进DFU患者中性粒细胞免疫防御相关因子和溶菌酶的产生，从而增强中性粒细胞对铜绿假单胞菌的吞噬、杀菌作用。

目的:探究高压氧(HBO)逆转肺炎克雷伯菌对三、四代头孢菌素的耐药性及其机制。方法:选取2017年1月至2017年12月济宁市第一人民医院呼吸与危重症医学科收集的肺炎克雷伯菌3株，均表现为AmpC(头孢菌素酶)和ESBLs(超广谱β-内酰胺酶)阳性，采用VITEK微生物分析系统对菌株进行鉴定。随后将3个菌株均分为对照组和HBO组，随后将其培养于不同浓度的三、四代头孢菌素中，采用琼脂二倍稀释法测定菌株对三、四代头孢菌素的最低抑制浓度(MIC)，平板计数法检测菌株活性。此外，提取菌株中的总蛋白，采用Western blotting检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达水平；采用头孢他啶、头孢匹罗三维实验法和纸片确证扩散法分别对菌株中的AmpC和ESBLs进行检测。结果:与对照组相比，HBO处理后，3个菌株对三、四代头孢菌素的MIC值降低，活性降低，HIF-1α的表达降低( P<0.05)；此外，HBO处理明显降低了AmpC和ESBLs的检出率。 结论:HBO处理能够明显逆转肺炎克雷伯菌对三、四代头孢菌素的耐药性，其机制可能与HIF-1α通路被抑制及AmpC、ESBLs检出率的降低有关。

目的:基于网络药理学预测和动物实验验证探讨白头翁汤对外阴阴道念珠菌病(Vulvovaginal candidiasis,VVC)的治疗作用及机制.方法:通过文献查阅及TCMSP、Gene Cards等数据库收集白头翁汤成分、靶点及VVC疾病靶点,Cityscape 3.6.0软件构建"药物活性成分-靶点-通路"网络;String数据库构建蛋白互作网络.通过DAVID平台进行基因功能(GO)分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;使用AutoDock软件对核心成分及关键靶点进行分子对接.将SPF级KM小鼠采用随机数表法分为正常组,模型组,白头翁汤低、中、高剂量组,氟康唑组(n=12).阴道腔内接种白色念珠菌建立VVC模型.连续给药14 d后,革兰氏染色法和平板计数法观察阴道灌洗液中真菌载量;HE染色观察阴道组织形态改变;ELISA 法检测血清 IL-17、IL-23、IL-1β 的含量;Western blot 法验证主要靶点 TNF-α、HSP90、ESR、STAT3和 IL-23/IL-17 轴核心调控因子ROR-γT蛋白表达.结果:筛选得到白头翁皂苷B4、二氢尼洛替星、黄柏酮、β-谷甾醇、小檗碱为治疗VVC的核心成分;筛选出18个关键作用靶点和75条通路.动物实验结果显示,与模型组比较,白头翁汤给药后可降低阴道内真菌载量和血清炎症因子IL-17、IL-23和IL-1β含量,降低阴道组织内TNF-α、HSP90、ESR、STAT3和ROR-γT蛋白表达,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:白头翁汤通过调控STAT3、TNF-α等靶点以及IL-23/IL-17轴发挥治疗VVC作用.

目的 开发一种基于淀粉有机模板的银纳米颗粒(silver nanoparticles,Ag NPs),该AgNPs在口腔龋损酸性微环境中响应性释放,通过杀灭病原菌抑制生物膜形成和破坏已成熟生物膜的双重抗菌能力,为龋病防治提供新的思路.方法 以可溶性淀粉为绿色稳定剂,抗坏血酸为还原剂,硝酸银为银前驱体,使用一锅法制备得到淀粉负载的Ag NPs.通过紫外分光光度计、X射线光电子能谱和透射电镜对Ag NPs的形貌和结构进行表征,采用细菌稀释平板菌落计数法探究其抗菌能力、使用结晶紫染色探究其抑制生物膜形成能力、通过细菌活死染色探究其破坏成熟生物膜能力.结果 紫外分光光度计显示的特征峰和透射电镜图像均表明成功合成了均匀分散在淀粉模板的球形Ag NPs,菌落计数结果显示,在α-淀粉酶的作用下,淀粉模板酶解后释放Ag NPs,对变形链球菌具有良好的杀灭效果(P<0.001),而未经α-淀粉酶作用的淀粉负载的Ag NPs则与对照组结果相比,其差异没有统计学意义(P>0.05).结晶紫染色结果和细菌荧光显微镜观察图像表明,淀粉负载的Ag NPs具有抑制变形链球菌形成生物膜和破坏成熟生物膜的作用.结论 使用简单的一锅法绿色合成的淀粉负载的Ag NPs,能在口腔中α-淀粉酶的作用下被释放,杀灭变形链球菌、抑制变形链球菌生物膜的形成,同时还能破坏成熟的生物膜,具有良好的抗菌性能.

目的 了解淮安市婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌污染现状及其对药物敏感、主要毒力基因携带情况.方法 2022～2023年抽取淮安市七个县区的婴幼儿奶粉及婴幼儿辅助食品共218批,根据GB4789.14-2014《食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验》蜡样芽胞杆菌平板计数法(第一法)进行检测,并进行药物敏感性试验,采用荧光定量PCR对检出的蜡样芽胞杆菌进行溶血性(hblC)基因、非溶血性基因(nheB)、呕吐毒素基因(ces)检测.结果 218批婴幼儿食品中蜡样芽胞杆菌检出39批次,检出率达17.89％.在23种药物敏感性试验中,蜡样芽胞杆菌对庆大霉素、阿米卡星、替考拉宁、万古霉素、氯霉素、利奈唑胺、呋喃妥因、利福平、左氧氟沙星、莫西沙星、诺氟沙星敏感率100％,对环丙沙星、米诺环素、四环素、红霉素、克林霉素、莫匹罗星高浓度、复方新诺明、苯唑西林敏感率分别为97.44％、92.31％、89.74％、82.05％、38.46％、23.08％、20.51％、5.13％,对达托霉素非敏感,对头孢洛林、氨苄西林、青霉素全部耐药.溶血性hblC基因携带率高达100％,非溶血性基因nheB携带率为58.97％,本次试验未检出呕吐毒素基因ces.结论 婴幼儿食品蜡样芽孢杆菌检出率较高且检出菌中携带至少一种毒力基因的概率高达100％.对头孢洛林、氨苄西林、青霉素全部耐药,对达托霉素、苯唑西林等药物敏感性差,可为临床用药方案提供指导.