目的 探究五子衍宗丸(WZYZP)治疗少弱精子症(OAS)的药效与作用机制.方法 应用环磷酰胺(CTX)诱导的SD大鼠作为OAS的体内模型,通过ig0.5、1.5 g·kg-1 WZYZP探究其治疗OAS大鼠的体内药效与作用机制.通过全自动精子分析系统检测大鼠精子参数;应用酶联免疫吸附法测定大鼠血清中睾酮的量,通过HE染色法观察给药后OAS大鼠睾丸组织形态学改变.采用网络药理学预测WZYZP治疗OAS的具体靶点.应用酶联免疫吸附法测定大鼠睾丸组织炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;通过TUNEL染色测定大鼠睾丸组织中细胞凋亡情况;免疫组织化学染色检测睾丸组织白细胞介素17(IL-17)表达情况;Western blotting检测Caspase-3、热休克蛋白90AA1(HSP90AA1)、磷酸化核因子κB(p-NF-κB)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、p-p38和p38的表达水平.使用HPLC检测WZYZP中的主要活性成分并与网络药理学所得靶点进行分子对接模拟以探索其具体机制.结果 体内实验结果表明,WZYZP可显著改善CTX诱导的OAS大鼠精子参数、血清睾酮水平(P＜0.001)和睾丸组织形态学.网络药理学结果表明WZYZP与OAS的关键通路为IL-17,关键靶点为Caspase3、p38、NF-κB、HSP90和ERK1/2.TUNEL染色结果表明,1.5 g·kg-1 WZYZP可显著降低OAS大鼠睾丸组织细胞凋亡(P＜0.05).Western Blotting 结果显示,与模型组相比,1.5 g·kg-1WZYZP 组 Caspase-3(P＜0.001)和HSP90AA1(P＜0.01)的表达水平明显降低,NF-κB(P＜0.05)、ERK1/2(P＜0.05)和p38(P＜0.05)磷酸化水平明显降低.分子对接模拟结果发现,8种主要活性成分(槲皮素、五味子醇甲、金丝桃苷、山柰酚、紫云英苷、五味子甲素、异槲皮素和绿原酸)和IL-17通路5种相关靶点(HSP90AA1、ERK、p38、NF-κB和Caspase3)的结合能均小于-20.92 kJ·mol-1,具有较好的结合亲和力.结论 WZYZP可通过下调IL-17通路减少细胞凋亡发挥治疗OAS作用.

目的:研究齐墩果酸对B淋巴细胞损伤的保护作用并基于网络药理学方法阐明其作用机制.方法:在实验第1～5天每天给昆明小鼠腹腔注射环磷酰胺80 mg/kg以建立免疫抑制动物模型.从造模第6天开始每天给予25 mg/kg齐墩果酸处理,连续28d作为干预组,同时设置模型组和空白组作为对照.采用流式细胞术检测各组小鼠的骨髓B淋巴细胞亚群百分率.为探索齐墩果酸的作用机制,进一步使用PubChem数据库获得齐墩果酸的化学结构,用SwissTargetPrediction数据库预测齐墩果酸的药物靶点,通过String平台对潜在的药物靶点进行蛋白质相互作用网络分析、基因本体(GO)生物过程富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析.结果:在给药28d后,模型组的成熟B细胞亚群(IgD与B220双阳性细胞)百分率为(2.585±0.248)%,明显低于空白组的(8.235±0.361)%,差异具有统计学意义(P<0.01),说明免疫抑制动物模型成功建立;而齐墩果酸干预组的成熟B细胞亚群百分率为(3.395±0.445)%,明显高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.01).通过SwissTargetPrediction数据库筛选到PTPN1、CD81等齐墩果酸的潜在药物靶点.经String平台分析和Cytoscape绘图计算后,连通性排名前5的节点蛋白有PPARG、PTGS2、PPARA、MAPK3和HMGCR.通过GO生物过程富集分析及KEGG信号通路分析得出,齐墩果酸的药理作用富集于脂质储存的负调控等生物过程及B细胞受体(BCR)信号通路.结论:齐墩果酸能够增加骨髓成熟B细胞亚群的百分率,其机制可能是通过影响BCR信号通路在B淋巴细胞的发育过程中发挥作用.

目的:分析益气补肾方对环磷酰胺致小鼠免疫抑制抵抗作用及药理学影响.方法:选取清洁级SD大鼠20只,雌雄各10只,鼠龄三个月,平均体重(200.48±15.72) kg,依据随机数字表法将其分成两组,观察组(10只)及模型组(10只);在第1、3、5、7天注射环磷酰胺(含量15mg/kg)于腹腔,同时观察组大鼠每天使用益气补肾方(经计算小鼠最大耐受量是104g/kg/24h)灌胃给药,模型组大鼠每天等剂量蒸馏水灌胃,两组大鼠均在末次给药以后将其处死;取大鼠胸腺与脾脏,计算免疫器官指数,ELISA法检测大鼠血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、单胺氧化酶(MAO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,MTT法检测淋巴因子激活杀伤(LAK)细胞及自然杀伤(NK)细胞活性.结果:观察组大鼠胸腺指数与脾脏指数均高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05);观察组大鼠血清IFN-γ、IL-2、IL-4及IL-10含量均高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05);观察组大鼠LAK及NK细胞活性均高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05);观察组大鼠血清MAO及MDA含量低于模型组,SOD含量高于模型组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:益气补肾方可恢复环磷酰胺所造成小鼠机体免疫抑制状况,提高小鼠自身免疫功能.

[目的]探讨多西他赛联合异环磷酰胺对卵巢癌CAOV3 细胞周期蛋白 D1(cyclinD1)及其生长抑制和DNA损伤诱导蛋白 153(GADD153)表达的影响.[方法]以购置的卵巢癌 CAOV3 细胞分为三份,依次记录为空白对照组、多西他赛组及联合用药组.空白对照组常规加入培养液进行培养,多西他赛组单一给予多西他赛干预,联合用药组为多西他赛联合异环磷酰胺进行干预,三组均进行 72 h干预,采用 MTT法测定三组不同时间点细胞增殖率;采用PI单染流式细胞术完成两组细胞周期的测定;采用 Western Blot法检测三组 cyclinD1 及 GADD153 表达水平.[结果]联合用药组培养后 24 h、36 h及 72 h细胞增殖率均低于多西他赛组与空白对照组(P ＜0.05);联合用药组卵巢癌CAOV3 细胞 G0／G1 期低于多西他赛组和空白对照组,细胞S期高于多西他赛组和空白对照组(P ＜0.05);联合用药组细胞培养后24 h、36 h、72 h cyclinD1 水平均低于多西他赛组和空白对照组,GADD153 表达水平高于多西他赛组和空白对照组(P ＜0.05).[结论]多西他赛联合异环磷酰胺能诱导、促进卵巢癌CAOV3 细胞凋亡,有助于改善 cyclinD1 及 GADD153 表达水平.

白消安是一种抗肿瘤的烷基磺酸盐,化学名为 1,4-丁二醇二甲磺酸酯(图 1),白色结晶固体,不溶于水,微溶于丙酮和乙醇.1959 年首次用于治疗慢性粒细胞白血病,能有效缓解症状及改善患者状态.现广泛用于造血干细胞移植前的预处理方案中.所谓预处理就是指在输入健康的造血干细胞以前,对患者进行大剂量化疗以清除患者体内的异常细胞及肿瘤细胞,并破坏患者的免疫系统以减少对移植的排斥反应,这是造血干细胞移植的中心环节之一.造血干细胞移植是目前治疗急性髓系白血病、地中海贫血和 NK/T 细胞淋巴瘤等血液学恶性肿瘤和免疫缺陷等疾病不可或缺的治疗手段[1].白消安对造血干细胞的抑制杀灭作用是骨髓移植成功的重要环节之一.基于白消安和环磷酰胺合用组成的 清髓方案由于不需要特定的设备和专业人员操作等原因, 具有耐受性好及毒性低等优点成为标准的预处理方案[2].传统上,大多数骨髓移植方案中使用白消安的标准剂量为 4 mg/(kg·d),为期 4 d.由于白消安治疗范围较窄且药动学参数个体差异较大,适宜的血药浓度对其药效的发挥有重要影响.白消安的血浆暴露量过高会发生肝静脉闭塞性疾病、间质性肺炎和细胞因子风暴等致死性不良反应,而系统暴露量不足又会导致移植失败或复发,缩短患者的生存时间[3].对白消安的药物浓度进行监测可更好发挥其作用并减少不良反应发生的概率.但由于白消安在不同患者体内的吸收清除速率存在较大差异,其不可预测的生物利用度和药代动力学分布对建立普适性的药物浓度检测方法带来困难[4].目前需要进行更多药效学研究以建立全身暴露白消安和疗效之间的量效关系,尤其是在接受骨髓移植的儿童中,基于已知药理学参数精确且有效的白消安血浆水平监测与剂量调整相结合可改善接受骨髓移植患者的临床治疗效果.

[目的]探讨TCD方案和BCD方案初治多发性骨髓瘤(MM)的疗效.[方法]本院收治的72例MM患者,根据治疗方式不同将患者分为A组和B组,均36例.A组采用TCD方案治疗,B组给予BCD方案治疗.比较两组患者临床疗效和治疗前后血清β2-微球蛋白(β2-MG)、C-反应蛋白(CRP)、血清肌酐(Cr)水平及肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的差异;比较两组生存情况差异及不良反应总发生率.[结果]A组总有效率[63.89％(23/36)]显著低于B组的[88.89％(32/36)](P<0.05).A组治疗后C r显著低于治疗前及B组治疗后(P<0.05);两组治疗前后组内比较β2-MG和CRP差异有显著性(P<0.05);两组β2-MG和CRP治疗前后组间比较差异无显著性(P>0.05).两组治疗前后CEA、CA125和NSE组内比较差异有显著性(P<0.05);两组CEA、CA125和NSE治疗前后组间比较差异均无显著性(P>0.05).两组患者治疗后生存率相比较差异无显著性(P>0.05).A组不良反应总发生率为25.00％(9/36),与B组的19.44％(7/36)比较差异无显著性(P>0.05).[结论]BCD方案应用于初治MM的安全性和生存率与TCD方案相当,但其较TCD方案有更好的治疗效果,值得临床重视.

优化岩生忍冬黄酮提取工艺并初步探究其抗炎镇痛、免疫增强和抑制细胞焦亡等药理学作用,为岩生忍冬的开发和利用提供数据支持和科学依据.基于单因素实验结果,采用响应面分析法(RSM)优化岩生忍冬黄酮提取工艺;分别建立二甲苯耳肿胀、角叉菜胶足跖肿胀、醋酸扭体反应和舔足反应等小鼠抗炎镇痛模型并评价其抗炎镇痛作用;建立小鼠环磷酰胺免疫抑制模型分析岩生忍冬黄酮对单核细胞碳廓清指数和血清免疫球蛋白IgA、IgM含量的影响;复制D-半乳糖小鼠慢性/亚急性衰老模型,通过检测肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)含量以评价岩生忍冬黄酮抗体内抗氧化作用;检测J774A.1小鼠单核巨噬细胞上清液中caspase-1、IL-1β和IL-18的水平,评价岩生忍冬黄酮对脂多糖+三磷酸腺苷(LPS+ATP)联合诱导小鼠单核巨噬细胞焦亡的影响,同时探讨其对cAMP-PKA信号通路的影响.岩生忍冬黄酮最佳提取工艺如下,提取温度65℃、乙醇浓度50％、提取时间60 min、料液比1∶25,黄酮实际得率为0.553％.响应面分析确定响应值与变异因素的多元二次回归方程模型:黄酮得率=0.61-0.48A+0.1B+0.029C-0.014D+0.32AB+0.04AC-O.012AD-0.02BC+0.037BD-0.031CD-0.058A2-0.068B2-0.069C2-0.057D2.岩生忍冬黄酮有效地抑制小鼠耳朵肿胀和足跖肿胀、减少小鼠醋酸扭体次数并延长小鼠热板舔足反应时间;岩生忍冬黄酮提升免疫抑制小鼠碳廓清指数,增强D-半乳糖衰老小鼠肝脏SOD和CAT抗氧化酶活性和降低MDA水平,同时有效降低巨噬细胞caspase-1、IL-1β和IL-18细胞因子水平并抑制巨噬细胞焦亡.上述结果表明,岩生忍冬黄酮具有良好的抗炎镇痛、免疫增强作用和抗氧化能力并通过增强cAMP-PKA信号途径抑制巨噬细胞焦亡,该研究结果能够为岩生忍冬的药理学研究及其开发利用奠定基础.

目的:采用网络药理学方法,探索当归芪枣精"一方多效"的作用机制,并对该方改善气血双虚证候的相关靶点蛋白进行验证.方法:在数据库检索的基础上,构建了蛋白-蛋白相互作用网络和成分-靶点-疾病网络,并对靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因组百科全书(KEGG)通路分析.同时,采用放血和环磷酰胺并用建立气血双虚小鼠模型,以当归芪枣精低剂量组(4.0 g·kg-1)和高剂量组(8.0 g·kg-1)连续干预7 d,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)法,检测骨髓中表皮生长因子受体(EGFR)、信号转导和转录激活因子1(STAT1)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)及其磷酸化蛋白的表达.结果:筛选出53种活性成分,作用于110个潜在靶点,包括RB1、EGFR、ESR1等中枢蛋白,参与细胞增殖与凋亡、转录翻译和应激反应等生物过程,调控信号转导、免疫炎症以及癌症等信号通路,与变应性鼻炎、阿尔茨海默病、帕金森病、哮喘等307种疾病相关,尤以各类癌症为多.实验结果显示,与正常组相比,模型组小鼠骨髓组织EGFR、STAT1表达和p-MAPK/MAPK比值均显著降低(P<0.05);与模型组相比,当归芪枣精低剂量组、高剂量组小鼠骨髓组织EGFR、STAT1表达和p-MAPK/MAPK比值均显著升高(P<0.05);但两者在升高p-MAPK/MAPK比值上有显著差异(P<0.05).结论:当归芪枣精具有治疗神经系统、呼吸系统疾病,癌症等"一方多效"的治疗价值,EGFR、MAPK、STAT1等关键靶点共同参与调节气血双虚证候,可能是当归芪枣精气血双补的主要作用机制.

[目的]探讨不同活性维生素D3联合醋酸波尼松、环磷酰胺治疗膜性肾病(M N)的疗效.[方法]124例M N患者随机分为观察组和对照组,每组62例.两组均给予常规方法及环磷酰胺、醋酸波尼松治疗,对照组同时给予阿法骨化醇,观察组同时给予骨化三醇治疗.对比两组疗效,治疗前后氧化应激指标、肾足细胞损伤标志物情况及治疗期间药物安全性.[结果]两组治疗后的尿蛋白均低于治疗前(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05).观察组总有效率高于对照组(P<0.05).两组治疗后晚期蛋白氧化产物(AOPP)、活性氧簇(ROS)水平均低于治疗前(P<0.05),且观察组均低于对照组(P<0.05);两组治疗后超氧化物歧化酶(SOD)水平均高于治疗前(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.05).两组治疗后尿液的podocalyxin、Nephrin水平均低于治疗前(P<0.05),且观察组均低于对照组(P<0.05).两组总不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05).[结论]骨化三醇联合醋酸波尼松、环磷酰胺治疗M N可增强疗效,改善患者氧化应激及肾足细胞损伤情况,且安全性良好.

目的 探讨基于网络药理学和分子对接技术的小儿黄龙颗粒治疗注意缺陷多动障碍(ADHD)的作用机制.方法 计算机检索TCMSP数据库,筛选小儿黄龙颗粒的活性成分和对应靶点;检索DisGeNET,GeneCards,TTD,DrugBank,ADHDgene数据库,筛选ADHD相关靶点;利用Venny 2.1平台对小儿黄龙颗粒活性成分靶点与ADHD靶点取交集,获取共有靶点即为小儿黄龙颗粒治疗ADHD的潜在作用靶点.利用String数据库构建小儿黄龙颗粒治疗ADHD潜在作用靶点的蛋白互作网络(PPI),采用Cytoscape 3.8.0软件分析网络中的核心靶点.采用Metascape数据库进行GO富集分析和KEGG通路富集分析.采用AutoDockTools 1.5.6软件进行分子对接研究,以结合能<-4.25 kcal/mol为受体、配体间有一定的结合活性.结果 共获得小儿黄龙颗粒的活性成分47种,靶点163个;ADHD靶点1115个;小儿黄龙颗粒治疗ADHD的潜在作用靶点55个.豆甾醇、7-甲氧基-2-甲基异黄酮、山柰酚、β-谷甾醇、木犀草素是小儿黄龙颗粒治疗ADHD的关键成分.PPI分析结果显示,白细胞介素6(IL-6)、蛋白激酶1(AKT1)、雌激素受体1(ESR1)、溶质载体家族6成员4(SLC6A4)、肾上腺素能受体β2(ADRβ2)和烟碱型胆碱受体α7(CHRNα7)6个靶点为小儿黄龙颗粒治疗ADHD的核心靶点.GO富集分析主要涉及突触传递、细胞对有机环状化合物及含氮化合物的反应等生物过程,突触后膜、树突、膜筏等细胞组分,神经递质受体活性、G蛋白偶联胺受体活性及单加氧酶活性等分子功能.KEGG通路富集分析主要涉及神经活性配体-受体相互作用、钙离子信号通路、磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路、环磷酸鸟苷/蛋白激酶G(cGMP/PKG)信号通路、胆碱能突触信号通路等.分子对接结果显示,核心靶点与其对应的关键成分结合能均小于-4.25 kcal/mol.结论 小儿黄龙颗粒治疗ADHD具有多成分、多靶点、多通路的特点.