目的:基于微小核糖核酸(miRNA)-信使核糖核酸(mRNA)调控网络探讨重复经颅磁刺激(rTMS)促进缺血性脑卒中(IS)神经修复的潜在分子机制。方法:从基因表达综合数据库(GEO)下载rTMS干预7 d后的IS大鼠皮质miRNA表达谱。使用R软件分析差异miRNAs，通过在线数据库预测其对应的下游mRNAs，构建miRNA-mRNA调控网络，筛选关键miRNAs。对靶基因进行功能富集分析，构建靶基因所编码的蛋白质相互作用网络，识别网络中的核心mRNAs。选取无特定病原体动物(SPF)级雄性Sprague-Dawley大鼠24只，按随机数字表法随机分为假手术组、模型组和磁刺激组，每组8只大鼠。模型组和磁刺激组制备IS大鼠模型，仅磁刺激组接受连续7 d的rTMS干预，其余2组不进行干预。采用改良神经功能评分(mNSS)于造模前和造模成功1 d、3 d、7 d后评价3组大鼠的神经功能缺损程度；于造模成功8 d后深度麻醉大鼠，取脑组织行苏木精-伊红和尼氏染色观察组织缺失情况和神经元形态，利用实时荧光定量聚合酶链反应验证差异基因在3组大鼠缺血侧皮质中的表达趋势。结果:共筛选出167个差异miRNAs和预测到25个mRNAs。富集分析表明，这些基因与细胞迁移的正向调节、神经营养因子受体信号通路的正向调节等生物学过程有关，涉及腺苷酸激活蛋白激酶、神经营养因子通路、大鼠肉瘤等信号通路。通过构建miRNA-mRNA调控网络，识别出miR-206-3p、miR-378a-3p、miR-107-3p、miR-92a-3p和miR-29b-3p共5个关键miRNAs；通过蛋白互作网络分析筛选出4个核心mRNAs，分别为整合素亚基β1、水通道蛋白4、脑源性神经生长因子(BDNF)、溶质载体家族2成员4。造模成功7 d后，磁刺激组的mNSS评分显著低于模型组同时间点( P<0.05)。与模型组相比，磁刺激大鼠右侧皮质的miR-206-3p表达明显降低( P<0.05)，BDNF表达则显著增高( P<0.05)。 结论:miR-206-3p-BDNF调控网络和相关作用途径在rTMS促进IS大鼠神经修复过程中发挥重要的作用。

目的 探讨胃癌组织微小核糖核酸(miR)-23a-3p、miR-361-5p表达与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路和预后的关系.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应检测120例胃癌患者胃癌组织与癌旁组织中miR-23a-3p、miR-361-5p、PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA 表达.Pearson 相关分析胃癌组织中 miR-23a-3p、miR-361-5p 表达与 PI3K mRNA、AKT mR-NA、mTOR mRNA表达的相关性,以及分析miR-23a-3p、miR-361-5p表达与胃癌患者临床病理特征的关系.Kaplan-Meier生存分析胃癌组织中不同miR-23a-3p、miR-361-5p表达与胃癌患者生存预后的关系.单因素及多因素COX回归分析影响胃癌患者生存预后因素.结果 相比于癌旁组织,胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达明显较低,而PI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达明显较高,差异有统计学意义(均P＜0.05).Pearson 相关分析结果显示,胃癌组织中 miR-23a-3p、miR-361-5p 表达与 PI3K mRNA、AKT mR-NA、mTOR mRNA表达呈负相关(均P＜0.05).不同肿瘤TNM分期、肿瘤分化程度、术后辅助化疗及淋巴结转移的胃癌患者胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达比较,差异有统计学意义(均P＜0.05).miR-23a-3p低表达胃癌患者3年总体生存率为46.77％(29/62),低于miR-23a-3p高表达胃癌患者3年总体生存率[81.03％(47/58)],差异有统计学意义(Log-Rank x2=30.243,P＜0.001).miR-361-5p 低表达胃癌患者 3 年总体生存率为50.79％(32/63),低于miR-361-5p高表达胃癌患者3年总体生存率[77.19％(44/57)],差异有统计学意义(Log-Rank x2=24.932,P＜0.001).单因素及多因素Cox回归分析结果显示,TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移、无术后辅助化疗、miR-23a-3p低表达、miR-361-5p低表达是影响胃癌患者不良预后的独立危险因素(P＜0.05).结论 胃癌患者胃癌组织中miR-23a-3p、miR-361-5p表达降低,二者表达与PI3K/AKT/mTOR信号通路有关,是潜在的胃癌预后相关的肿瘤标志物.

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)相关血清微小核糖核酸(miRNA)对糖尿病肾病(DKD)早期诊断的临床价值.方法 收集2019年1月至2021年12月在缙云县壶镇镇中心卫生院及缙云县人民医院就诊的2型糖尿病(T2DM)患者260例作为研究对象.根据尿白蛋白排泄率(UAER),研究对象分为单纯T2DM组135例、早期DKD组82例、临床DKD组43例.另选取50名健康志愿者作为对照组.检测各组血清miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c水平和TGF-β1水平,并进行指标间的相关关系分析.利用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miRNAs对DKD的早期诊断价值.结果 单纯T2DM组、早期DKD组和临床DKD组患者血清miR-27a、miR-27b、miR-200c水平及TGF-β1水平均高于对照组,miR-29c水平低于对照组(F=235.624、70.351、108.127、672.304,P均＜0.001).TGF-β1与血清 miR-27a、miR-27b、miR-200c呈正相关,与 miR-29c 呈负相关(r=0.668、0.429、0.618、-0.502,P均＜0.001).血清 miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c对T2DM患者发生DKD的诊断曲线下面积(AUC)为0.913、0.775、0.812、0.894,miR-27a和miR-200c的敏感度和特异度均＞0.7.验证队列中血清miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c对T2DM患者发生DKD的诊断AUC 分别为 0.901、0.787、0.802、0.896,差异有统计学意义(Z=-9.012,P＜0.0l).结论 血清 miR-27a、miR-27b、miR-29c、miR-200c对于早期DKD都有一定的诊断价值.

目的 探讨直肠癌根治术后结肠造口旁软组织感染患者微小核糖核酸(miR)-15a、miR-29b、分化抗原36(CD36)mRNA、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)mRNA表达及与降钙素原(PCT)的相关性.方法 选取2020年8月-2023年7月济宁医学院附属医院收治的91例直肠癌根治术结肠造口患者,根据结肠造口术后7 d内是否发生结肠造口旁软组织感染分为感染组27例和未感染组64例.分析两组肠道菌群失调分度;比较两组血清miR-15a、miR-29b、CD36 mRNA、mTORC1 mRNA、PCT水平;受试者工作特征(ROC)曲线分析联合检测的预测价值.Pearson法分析miR-15a、miR-29b、CD36 mRNA、mTORC1 mRNA与PCT水平相关性.结果 直肠癌根治术后结肠造口旁软组织感染发生率为29.67％.感染组Ⅲ度菌群失调比例、血清miR-29b、CD36 mRNA、mTORC1 mRNA、PCT水平比未感染组高(P＜0.05),miR-15a水平比未感染组低(P＜0.05),联合检测直肠癌根治术后结肠造口旁软组织感染的曲线下面积(AUC)比单独检测高(P＜0.05);miR-29b、CD36 mRNA、mTORC1水平与PCT呈正相关(P＜0.05);miR-15a水平与PCT呈负相关(P＜0.05).结论 直肠癌根治术后结肠造口旁软组织感染发生率高,存在肠道菌群失衡,血清miR-29b、CD36 mRNA、mTORC1 mRNA呈高表达,miR-15a呈低表达,联合检测可预测直肠癌根治术后结肠造口旁软组织感染,直肠癌根治术后结肠造口旁软组织感染患者miR-15a、miR-29b、CD36 mRNA、mTORC1 mRNA表达水平与PCT水平有关.

目的 探讨激素性股骨头坏死患者血清微小核糖核酸-672-5p(miR-672-5p)、微小核糖核酸-29b(miR-29b)、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、1型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)表达水平及其对激素性股骨头坏死的预测价值.方法 选取2020年3月至2023年3月河南科技大学第一附属医院收治的116例激素性股骨头坏死患者作为病例组,根据国际骨循环研究会(ARCO)分期标准将其分为Ⅰ期组(41例)、Ⅱ期组(30例)和Ⅲ期组(45例),另选本院同期125例健康体检者作为对照组.比较病例组和对照组及不同ARCO分期激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1水平,利用受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标的预测价值.结果 病例组患者的血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于对照组,血清BMP-2水平低于对照组,组间差异有统计学意义(P＜0.05).Ⅲ期组患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平高于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组高于Ⅰ期组(P＜0.05);Ⅲ期组患者血清BMP-2水平低于Ⅱ期组和Ⅰ期组,Ⅱ期组低于Ⅰ期组(P＜0.05).激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1水平与ARCO分期呈正相关,BMP-2与ARCO分期呈负相关(P＜0.05).ROC曲线分析结果显示,血清miR-672-5p、miR-29b、BMP-2、PAI-1预测激素性股骨头坏死的AUC值均大于0.8(P＜0.05),表明均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能.结论 激素性股骨头坏死患者血清miR-672-5p、miR-29b、PAI-1呈高表达,而血清BMP-2呈低表达,四者均具有较高的预测激素性股骨头坏死的效能.

目的:探讨参芪扶正注射液联合顺铂和培美曲塞对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者肿瘤标志物、辅助性T细胞(Th)1/Th2细胞因子和血清微小核糖核酸(miR)-29b、miR-221的影响.方法:按照随机数字表法将福建省立医院2020年3月～2022年12月收治的131例晚期NSCLC患者分为对照组(顺铂和培美曲塞治疗,n=65)和研究组(参芪扶正注射液联合顺铂和培美曲塞治疗,n=66).对比两组疗效、肿瘤标志物水平、Th1/Th2细胞因子、血清miR-29b、miR-221表达水平,并观察两组不良反应发生率.结果:研究组的客观缓解率(48.48％)、疾病控制率(81.82％)高于对照组(29.23％)、(60.00％)(P＜0.05).研究组治疗后癌胚抗原(CEA)、细胞角质蛋白19片段(CYFRA21-1)、Th2、白细胞介素-4(IL-4)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC-Ag)、miR-221低于对照组(P＜0.05).研究组治疗后γ-干扰素(IFN-γ)、Th1、miR-29b高于对照组(P＜0.05).两组间不良反应发生比较无差异(P＞0.05).结论:与单纯化疗相比,结合参芪扶正注射液治疗晚期NSCLC患者,可有效降低肿瘤标志物水平,提高临床疗效,考虑可能与改善免疫功能和调节血清miR-29b、miR-221表达水平有关.

目的 探究结核性胸膜炎患者胸腔积液含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)、可溶性髓系细胞触发受体1(sTREM-1)、微小核糖核酸(miR)-506-3p表达水平及其对结核性胸膜炎患者预后的预测价值.方法 选取2021年3月-2023年3月保定市第二中心医院收治的98例结核性胸膜炎患者为研究组,并根据预后情况分为预后良好组69例和预后不良组29例,随机选取同期108例非结核性胸膜炎患者为对照组,检测患者胸腔积液BIRC5、sTREM-1、miR-506-3p表达水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析BIRC5、sTREM-1、miR-506-3p表达对结核性胸膜炎预后的预测价值.结果 与对照组相比,研究组胸腔积液BIRC5、sTREM-1水平升高,miR-506-3p水平降低(P＜0.05);与预后良好组相比,预后不良组胸腔积液BIRC5、sTREM-1水平升高,miR-506-3p水平降低(P＜0.05);BIRC5、sTREM-1、miR-506-3p联合检测对结核性胸膜炎患者预后诊断的曲线下面积(AUC)值高于单独检测的AUC值(P＜0.05),且联合检测的敏感度为86.21％,特异度为94.20％.结论 结核性胸膜炎患者胸腔积液BIRC5、sTREM-1水平升高,miR-506-3p水平降低,结核性胸膜炎预后不良患者也具有相同趋势,BIRC5、sTREM-1、miR-506-3p三者联合检测对结核性胸膜炎患者预后具有较高的预测价值.

目的 分析慢性心力衰竭(CHF)合并心房颤动(AF)患者血清微小核糖核酸(miR)-126、miR-222 与心功能和主要不良心血管事件(MACE)的关系.方法 选取2020 年1 月—2022 年10 月徐州医科大学附属连云港医院心内科收治的CHF合并AF患者120 例为AF组,根据纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级分为Ⅰ级22 例、Ⅱ级29例、Ⅲ级26 例、Ⅳ级43 例.随访3 个月,根据是否发生MACE分为MACE亚组和非MACE亚组;选取同期收治的未合并AF的CHF患者100 例为非AF组.另选取同期医院体检健康志愿者80 例为健康对照组.检测并比较3 组及不同NYHA心功能分级CHF合并AF患者血清miR-126、miR-222 水平;分析CHF合并AF患者血清miR-126、miR-222 水平与NYHA心功能分级的相关性;多因素Logistic回归分析CHF合并AF患者发生MACE的影响因素.受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-126、miR-222 水平对CHF合并AF患者发生MACE的预测价值.结果 血清miR-126、miR-222 水平AF组<非AF组<健康对照组(F/P =277.894/<0.001、410.653/<0.001);血清miR-126、miR-222 水平Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级依次降低(F/P =147.517/<0.001、115.625/<0.001);CHF合并AF患者血清miR-126、miR-222 水平与NYHA心功能分级呈负相关(rs=-0.501、-0.496,P均<0.001).随访 3 个月,CHF合并AF患者 120例MACE发生率为31.67%(38/120),NYHA心功能分级Ⅲ～Ⅳ级和N末端前体B型钠尿肽升高为CHF合并AF患者MACE的独立危险因素[OR(95%CI)=1.872(1.381～2.538)、1.002(1.000～1.004)],血清miR-126 升高、miR-222 升高为独立保护因素[OR(95%CI)=0.679(0.535～0.862)、0.531(0.379～0.743)];血清miR-126、miR-222 及二者联合预测CHF合并AF患者发生MACE的AUC分别为0.734、0.741、0.839,二者联合优于各自单独预测效能(Z = 4.235,4.136,P = 0.013,0.014).结论 CHF 合并 AF 患者的血清 miR-126、miR-222 水平降低,与心功能降低和MACE发生有关,血清miR-126、miR-222 水平联合检测对CHF合并AF患者MACE具有较高的预测效能.

目的 探讨微小核糖核酸(miR)-29b过表达是否抑制脑缺血损伤,进一步探讨其潜在机制.方法 体外培养小鼠成神经细胞瘤N2a细胞,构建氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)模型,模拟体外脑缺血损伤.N2a细胞随机分为空白对照组、OGD/R组、OGD/R+转染miR-29b激动剂组、OGD/R+转染miR-29b抑制剂组、转染miR-29b激动剂阴性对照组、转染miR-29b抑制剂阴性对照组.实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组miR-29b表达,溴化噻唑蓝四氮唑(MTT)比色法、乳酸脱氢酶(LDH)法检测miR-29b激动剂和抑制剂对OGD/R诱导细胞活性和凋亡的影响,Hoechst 33258染色法观察N2a细胞形态学特征及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)-3活性,免疫印迹法定量分析促凋亡蛋白Bax、Bcl-2及p53表达.结果 经OGD/R处理的N2a细胞中miR-29b水平明显降低.miR-29b激动剂显著增加细胞活力,减少LDH漏出率,改善细胞核在凋亡过程中形态学变化,增强OGD/R条件下caspase-3活性;miR-29b抑制剂加剧OGD/R诱导的细胞毒性和细胞凋亡.miR-29b激动剂阻断OGD/R诱导的Bax和p53蛋白表达增加,降低Bcl-2蛋白表达;miR-29b抑制剂加剧OGD/诱导的这些凋亡相关蛋白改变.p53基因敲除的p53 siRNA降低细胞活力,增加LDH漏出率,逆转miR-29b激动剂对细胞损伤的改善作用.结论 miR-29b通过负调控p53依赖性凋亡途径减轻脑缺血性损伤,可能为缺血性脑卒中提供一潜在的治疗靶点.

目的 探讨CHB患者自然史不同阶段的血清外泌体中差异表达的miRNA及其临床意义.方法 2014年1月至2017年1月上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心C HB初治患者92例,其中免疫耐受期24例,免疫清除期24例,低复制期24例,再活动期20例.采用ExoQuick试剂盒抽提250μL血清中的外泌体,通过蛋白免疫印迹法检测外泌体蛋白标志物LAMP2和TSG101的表达;实时荧光定量PCR技术检测miRNA-122、miRNA-125a、miRNA-29c、miRNA-200c在血清外泌体中的表达.组间差异比较采用Mann-Whitney U检验和Kruskal-Wallis H检验;关联性分析采用皮尔逊相关系数;用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic,ROC曲线)来评估预测效能.结果 蛋白质免疫印迹法检测外泌体表面特异性标志物LAMP2和TSG101阳性.CHB患者血清外泌体中的miRNA-122(H=41.06)、miRNA-125a(H=29.31)、miRNA-29c(H=49.14)和miRNA-200c(H=31.73)在自然史不同阶段表达差异均有统计学意义(均P<0.01).根据肝功能指标及肝穿刺结果,与无炎症组相比,炎症组血清外泌体的miRNA-122(U=804)、miRNA-29c(U=317)和miRNA-200c(U=574)均下调(均P<0.05),而miRNA-125a上调(U=279,P<0.01).miRNA-200c与ALT呈负相关(r=-0.3932,P<0.01),而miRNA-125a与ALT呈正相关(r=0.5981,P<0.01).通过ROC曲线来评价外泌体源miRNA-122、miRNA-125a、miRNA-29c和miRNA-200c对炎症的诊断价值,曲线下面积分别为0.6193、0.8396、0.8243和0.6883,其中miRNA-125a曲线下面积最大,敏感度为84.62％,特异度为74.47％.而ALT区分肝穿刺有无炎性反应的ROC曲线下面积为0.7953,敏感度为81.08％,特异度为70.97％.结论 外泌体源性miRNA在CHB患者自然史不同阶段中的表达存在明显差异,与炎性反应相关的外泌体源miRNA有望成为诊断肝脏炎性反应的新型无创生物学标志物,帮助确定C HB患者临床用药治疗的最佳时机.