目的:探讨长链非编码RNA (lncRNA) FBXL19-AS1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，明确lncRNA FBXL19-AS1与微小RNA-339-3p(miR-339-3p)的靶向关系。方法:收集2017年1月至2019至8月间烟台市烟台山医院73例行手术切除且经病理确诊的胰腺癌患者的癌组织及匹配的癌旁正常胰腺组织，体外培养正常胰腺上皮细胞(hTERT-HPNE)和3株胰腺癌细胞(Capan-1、SW1990、PaTu8988)，采用实时荧光定量PCR法检测胰腺癌组织和各株细胞lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p表达。将胰腺癌Capan-1细胞分为NC组(正常对照组)、si-NC组(转染无意义阴性序列)、si-FBXL19-AS1组(转染FBXL19-AS1小干扰RNA)，miR-NC组(转染空质粒对照)、miR-339-3p组(转染miR-339-3p过表达慢病毒载体)，si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p NC组(共转染FBXL19-AS1siRNA和miR-339-3p抑制剂阴性对照序列)、si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p组(共转染FBXL19-AS1siRNA和miR-339-3p抑制剂)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性，采用Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力，采用蛋白质免疫印迹法检测细胞cyclinD1、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p的靶向关系。结果:胰腺癌组织lncRNA FBXL19-AS1表达量显著高于癌旁正常胰腺组织(2.96±0.21比1.00±0.13， P<0.05)，miR-339-3p表达量显著低于癌旁正常胰腺组织(0.37±0.05比1.00±0.11， P<0.05)。Capan-1、SW1990及PaTu8988细胞lncRNA FBXL19-AS1表达量分别为2.43±0.18、1.97±0.13和1.73±0.14，均显著高于hTERT-HPNE细胞的1.00±0.07，miR-339-3p表达量分别为0.42±0.03、0.54±0.03和0.57±0.04，均显著低于hTERT-HPNE细胞的1.00±0.05。其中以Capan-1细胞的lncRNA FBXL 19-AS1表达量最高，miR-339-3p表达量最低。与si-NC组比较，si-FBXL19-AS1组Capan-1细胞450nm处吸光度值( A450值)、迁移细胞数、穿膜细胞数显著下降[0.47±0.03比0.94±0.06、(81.00±7.41)个比(187.00±16.13)个、(67.00±5.41)个比(141.00±9.24)个]，cyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达量显著降低(0.44±0.03比0.83±0.05、0.48±0.03比0.92±0.07、0.38±0.02比0.73±0.05)。与miR-NC组比较，miR-339-3p组Capan-1细胞 A450值、迁移细胞数、穿膜细胞数显著下降[0.54±0.04比0.94±0.05、(98.00±6.53)个比(193.00±10.02)个、(83.00±6.58)个比(146.00±7.11)个]，cyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达量显著降低(0.47±0.03比0.81±0.07、0.43±0.03比0.94±0.06、0.32±0.02比0.71±0.06)。与si-FBXL19-AS1+anti-miR-NC组比较，si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p组细胞 A450值、迁移细胞数、穿膜细胞数显著上升[0.96±0.07比0.48±0.03、(204.00±11.25)个比(83.00±5.11)个、(157.00±8.76)个比(64.00±4.12)个]，cyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达量显著升高(0.84±0.06比0.42±0.03、0.96±0.08比0.47±0.08、0.74±0.06比0.37±0.02)。上述差异均有统计学意义( P值均<0.05)。共转染野生型lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p mimics组Capan-1细胞的荧光素酶活性显著低于共转染野生型lncRNA FBXL19-AS1和miR-NC组(0.47±0.04比1.00±0.10)，差异有统计学意义( P<0.05)，而共转染突变型lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p mimics组与共转染突变型lncRNA FBXL19-AS1和miR-NC组Capan-1细胞的荧光素酶活性差异无统计学意义。 结论:LncRNA FBXL19-AS1在胰腺癌组织及胰腺癌Capan-1细胞株中呈高表达，敲减lncRNA FBXL19-AS1可靶向结合miR-339-3p调节胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力，促进胰腺癌的发生和发展。

目的 探讨血清微小RNA-183-5p(miR-183-5p)和微小RNA-339-3p(miR-339-3p)水平与急性胰腺炎(AP)患者严重程度及预后的关系.方法 收集2021年7月至2023年7月该院收治的175例AP患者作为AP组,根据急性生理学与慢性健康状况评价Ⅱ(APACHE Ⅱ)评分将AP患者分为轻症组108例和重症组67例,根据预后情况,分为预后良好组114例和预后不良组61例,另选取同期于该院体检的体检健康者160例作为对照组.采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-183-5p、miR-339-3p水平,酶联免疫吸附试验测定肿瘤坏死因子(TNF)-α、C反应蛋白(CRP)水平,Pearson相关分析 AP患者血清miR-183-5p、miR-339-3p水平与TNF-α、CRP及APACHEⅡ评分的相关性,多因素Logistic回归分析AP患者预后不良的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-183-5p、miR-339-3p水平对预后不良发生的预测价值.结果 与对照组比较,AP组miR-183-5p水平升高,miR-339-3p水平降低,差异有统计学意义(t=17.497、19.113,均P＜0.05).与轻症组比较,重症组血清miR-183-5p、TNF-α、CRP、APACHE Ⅱ评分升高,miR-339-3p水平降低(t=10.582、5.972、11.991、13.864、2.224,均 P＜0.05).AP 患者血清 miR-183-5p 水平与 TNF-α,CRP,A-PACHE Ⅱ 评分呈正相关(r=0.623、0.570、0.679,均 P＜0.05);miR-339-3p 水平与 TNF-α、CRP、APACHEⅡ评分呈负相关(r=-0.655、-0.600、-0.756,均P＜0.05).预后不良组血清miR-183-5p水平高于预后良好组,miR-339-3p水平低于预后良好组,差异有统计学意义(t=5.324、5.436,均P＜0.05).TNF-α、CRP、A-PACHE Ⅱ评分、miR-183-5p是AP患者发生预后不良的独立危险因素,miR-339-3p是预后不良的保护因素(均P＜0.05).miR-183-5p、miR-339-3p水平和二者联合预测AP患者预后不良的曲线下面积分别为0.760、0.731、0.836,二者联合预测价值高于单独预测(Z=2.952、2.892,均P＜0.05).结论 AP患者血清中miR-183-5p水平升高,miR-339-3p水平降低,二者与患者病情程度和预后密切相关,可能作为AP病情和预后评估的标志物.

目的:探究丹皮酚(Pae)通过上调微小 RNA-339-5p(miR-339-5p)靶向高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)对神经病理性疼痛大鼠炎症反应的影响.方法:通过 L5神经结扎横切构建神经病理性疼痛大鼠模型,将 72 只 SD大鼠随机分为 6 组,假手术组(Sham)、模型组(Model)、Pae组、Pae+antagomir-NC组、Pae+miR-339-5p-antagomir组、Pae+miR-339-5p-antagomir+HMGB1 抑制剂-甘草酸(GA)组,每组 12只,给药 7d.手术前 1d及手术后 3 d、11 d,测定大鼠行为学机械痛阈值(MWT)、热缩足反射潜伏期(TWL),手术后第 12天,酶联免疫吸附法测定脊髓组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定脊髓组织中 miR-339-5p、HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测脊髓组织中HMGB1、IL-1β、TNF-α蛋白表达,双荧光素酶报告实验分析 miR-339-5p与 HMGB1 的靶向关系.结果:术前 1d,各组大鼠 MWT、TWL比较差异无统计学意义(P>0.05).与 Sham组比较,Model组大鼠术后 MWT、TWL及 miR-339-5p水平降低,IL-1β、TNF-α水平,HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白水平升高(P<0.05);与 Model组比较,Pae组大鼠术后 MWT、TWL、miR-339-5p水平升高,IL-1β、TNF-α水平及 HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白水平降低(P<0.05);与 Pae组比较,Pae+antagomir-NC组大鼠各指标差异无统计学意义(P>0.05),Pae+miR-339-5p-antagomir 组大鼠术后 MWT、TWL 及 miR-339-5p 水平降低,IL-1β、TNF-α水平,HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白水平升高(P<0.05);与 Pae+miR-339-5p-antagomir组比较,Pae+miR-339-5p-antagomir+GA组大鼠术后 MWT、TWL升高,IL-1β、TNF-α水平,HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白水平降低(P<0.05);mir-339-5p与 HMGB1 存在靶向关系.结论:Pae通过上调 miR-339-5p,靶向抑制 HMGB1的表达,减轻神经病理性疼痛大鼠的炎症反应.

目的:本研究旨在探讨微小RNA-339(miR-339)在肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖中的作用并探讨其潜在机制.方法:利用不同浓度的血管紧张素Ⅱ处理PASMCs 48 h,通过转染miR-339模拟物(miR-339mimic)和miR-339抑制物(miR-339 inhibitor)分别使miR-339过表达或低表达,利用CCK-8法和活细胞计数检测细胞的增殖能力;利用RT-qPCR检测miR-339和PCNA mRNA的表达水平;利用Western blot检测蛋白水平;萤光素酶报告试验分析证实miR-339和IGF2BP1之间的相互作用.结果:血管紧张素II浓度依赖性地增加PASMCs的增殖和PCNA的mRNA表达,并降低miR-339的表达(P<0.05).miR-339过表达抑制PASMCs增殖和PCNA mRNA表达(P<0.05),而miR-339表达下调则促进PASMCs的增殖和PCNA的mRNA表达(P<0.05).miR-339表达上调可以抑制血管紧张素II处理后的PASMCs的增殖(P<0.05).生物信息学分析以及萤光素酶报告试验检测证实胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)的3'-UTR为miR-339靶点,进一步用RT-qPCR及West-ern blot实验发现miR-339负调控PASMCs中IGF2BP1的表达(P<0.05).IGF2BP1的过表达减弱了miR-339对PASMCs增殖和PCNA mRNA表达的抑制作用(P<0.05).miR-339 mimic转染可以抑制磷酸化p38蛋白的水平(P<0.05),对p38蛋白的水平没有影响.结论:miR-339对PASMCs的增殖起抑制作用,这种抑制作用可能是部分通过调控IGF2BP1以及p38 MAPK信号通路来实现的.

目的 分析绵羊肝脏及肺脏分离的细粒棘球蚴原头节(HPSC、LPSC)的微小RNA (miRNA)表达情况,筛选出寄生部位特异性miRNA,为后续miRNA生物信息学分析提供依据. 方法 从西宁市郊屠宰场采集带有包囊的新鲜绵羊肝脏、肺脏,经分离、过滤、沉淀获得棘球蚴原头节.用TRIzol法提取原头节总RNA,构建HPSC、LPSC小片段RNA (sRNA)文库,采用高通量测序技术进行深度测序,将测序获得的原始数据与miRBase、Pre-miRNA、RFam、Repbase等4个公共数据库进行比对,获得已知miRNA的注释信息.利用mfold软件预测未比对上任何注释信息的miRNA的二级结构.比较HPSC、LPSC中miRNA表达量的差异. 结果 HPSC和LPSC文库分别获得10 182 508条和11 133 735条有效序列,大部分序列长18～22 nt.其中22 nt的序列最多,分别占20.9％ (2128728/10182508)和24.6％(2737 570/11 133 735);19nt及21 nt次之,分别占14.0％(1 429846/10 182508)、18.5％ (1 880 607/10 182 508)和16.9％(1 875 698/11 133 735)、16.9％ (1 885 560/11 133 735).在HPSC和LPSC文库中,细粒棘球蚴原头节已知miRNA分别有87条和79条,新miRNA分别占341条和339条,与其他寄生虫(日本血吸虫、曼氏血吸虫、扁虫及三代虫等)保守的miRNA分别有58条和62条.在细粒棘球蚴原头节已知miRNA中,除egr-miR-36a-3p、egr-miR-36b-3p、egr-miR-10229a-5p、egr-miR-10233-5p、egr-miR-10240-3p、egr-miR-10243-5p、egr-mir-10252-5p、egr-mir-10287-5p等8个miRNA在HPSC中特异表达外,其余miRNA在2个文库均表达且表达量一致;在与其他寄生虫保守的miRNA中,有50条在HPSC和LPSC中均表达,有8条和12条分别在2个文库中特异表达.在新的miRNA中,在HPSC和LPSC文库特异表达的分别为78和76条.HPSC和LPSC文库共筛选出miRNA 574条,其中392条miRNA在2个文库中均表达,表达量居前10位的为egr-miR-1-5p、egr-miR-2a-3p、egr-miR-2c-3p、egr-miR-2b-3p、egr-miR-7-5p、egr-let-7-5p、egr-miR-7b-5p、egr-miR-9-5p、egr-miR-9-3p、egr-miR-10a-5p.LPSC与HPSC文库相比较,LPSC有124条miRNA上调2倍以上,30条miRNA下调0.5倍以下.在筛选出的miRNA中,HPSC和LPSC中分别有94条和88条特异表达. 结论 本研究发现HPSC及LPSC中存在特异表达miRNA.

背景:长链非编码RNA(lncRNA)淋巴样增强因子1反义RNA 1(LEF1-AS1)在骨肉瘤中的生物学意义及机制尚不清楚.目的:研究LEF1-AS1对微小RNA(miR)-339-5p的靶向调控及对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LEF1-AS1、miR-339-5p在人骨肉瘤组织和瘤旁组织中的表达.在细胞U2OS中转染si-LEF1-AS1,细胞计数试剂盒8(CCK-8)和克隆形成测定细胞增殖与克隆能力,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹实验检测P21和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达.生物信息学预测和双荧光素酶报告实验分析LEF1-AS1和miR-339-5p的靶向关系.在细胞U2OS中共转染si-LEF1-AS1和anti-miR-339-5p,或共转染si-LEF1-AS1和miR-339-5p,观察其在细胞增殖和凋亡中的作用.结果:与瘤旁组织比较,骨肉瘤组织中的LEF1-AS1表达量明显升高,miR-339-5p表达量显著减少(P<0.05).抑制LEF1-AS1明显降低细胞U2OS的存活率和克隆形成数,显著提高凋亡率、P21和Caspase-3蛋白水平(P<0.05).LEF1-AS1靶向、调控miR-339-5p的表达.si-LEF1-AS1和anti-miR-339-5p共转染明显减少细胞U2OS中miR-339-5p表达量、P21、Caspase-3蛋白表达量、细胞凋亡率,显著增加细胞U2OS存活率和克隆形成数(P<0.05).si-LEF1-AS1和miR-339-5p共转染明显提高miR-339-5p表达量、P21、Caspase-3蛋白表达量和细胞凋亡率,显著降低细胞U2OS存活率和克隆形成数(P<0.05).结论:LEF1-AS1靶向调控miR-339-5p的表达,抑制LEF1-AS1可抑制骨肉瘤细胞的增殖并诱导细胞凋亡.

目的:探讨长链非编码RNA PCNA1(lncRNA RHPN1)反义AS1(RHPN1-AS1)对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:将si-NC(lncRNA RHPN1-AS1阴性对照组)、si-RHPN1-AS1(沉默lncRNA RHPN1-AS1组)、pcDNA(真核表达载体组)、pcDNA-RHPN1-AS1(沉默lncRNA RHPN1-AS1真核表达载体组)、miR-NC(微小RNA-339-5p阴性对照组)及miR-339-5p(微小RNA-339-5p组)分别转染至肝癌细胞Huh7中,记为si-NC组、si-RHPN1-AS1组、pcDNA组、pcDNA-RHPN1-AS1组、miR-NC组和miR-339-5p组;将si-RHPN1-AS1质粒分别与anti-miR-NC(微小RNA-339-5p抗结剂阴性对照)、anti-miR-339-5p(微小RNA-339-5p抗结剂)共转染至Huh7细胞中,记为si-RHPN1-AS1+anti-miR-NC组(沉默lncRNA RHPN1-AS1+微小RNA-339-5p抗结剂阴性对照组)、si-RHPN1-AS1+anti-miR-339-5p组(沉默lncRNA RHPN1-AS1+微小RNA-339-5p抗结剂组);转染均采用脂质体法.采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)(RT-qPCR)检测正常肝细胞(THLE-2)、肝癌细胞株(Huh7、MHCCLM3、MHCC97H)中miR-339-5p和RHPN1-AS1表达水平;双荧光素酶报告实验检测RHPN1-AS1和miR-339-5p的靶向关系;用蛋白质印迹法检测细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白、P21蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测细胞活性.结果:与正常肝细胞THLE-2相比,肝癌细胞株Huh7、MHCCLM3、MHCC97H中RHPN1-AS1高表达,miR-339-5p低表达.RHPN1-AS1靶向调控miR-339-5p的表达.干扰RHPN1-AS1表达和miR-339-5p过表达的肝癌细胞Huh7中P21蛋白、Bax蛋白表达水平显著升高,Cyclin D1、Bcl-2水平显著降低,细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高.下调miR-339-5p表达逆转了干扰RHPN1-AS1表达对肝癌细胞Huh7的增殖抑制和凋亡促进作用.结论:干扰RHPN1-AS1表达可抑制肝癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-339-5p表达有关,将可为肝癌的靶向治疗提供新靶点.

目的 对miR-339进行过表达后,探究其对气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖及细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路的影响.方法 体外培养ASMCs细胞,设置对照组、模型组(5 μg·L-1 TGF-β1)、miR-NC组(miR-NC+5 μg·L-1 TGF-β1)、miR-339 mimics组(miR-339 mimics+5 μg·L-1 TGF-β1)、miR-339 mimics+PD98059 组(miR-339 mimics+10 μmol·L-1 ERK1/2 抑制剂 PD98059+5 μg·L-1 TGF-β1).采用qRT-PCR检测各组miR-339 的表达;MTT法检测ASMCs细胞活力;流式细胞术检测ASMCs细胞凋亡情况;Western blot检测ASMCs细胞内增殖、凋亡及通路相关蛋白表达情况.结果 与对照组相比,模型组ASMCs细胞存活率、c-Myc、CyclinD1、PCNA、Bcl-2、p-ERK1/2/ERK1/2表达水平显著增加(P＜0.05),细胞凋亡率、Caspase-3、Bax表达水平显著降低(P＜0.05);miR-339 mimics组与模型组比较、miR-339 mimics+PD98059 组与miR-339 mimics组比较,ASMCs细胞存活率、c-Myc、CyclinD1、PCNA、Bcl-2、p-ERK1/2/ERK1/2表达水平均显著降低(P＜0.05),细胞凋亡率、Caspase-3、Bax表达水平均显著增加(P＜0.05).结论 miR-339过表达对ASMCs细胞增殖的抑制,可能与抑制ERK1/2信号通路有关.