目的:探讨长链非编码RNA (lncRNA) FBXL19-AS1对胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，明确lncRNA FBXL19-AS1与微小RNA-339-3p(miR-339-3p)的靶向关系。方法:收集2017年1月至2019至8月间烟台市烟台山医院73例行手术切除且经病理确诊的胰腺癌患者的癌组织及匹配的癌旁正常胰腺组织，体外培养正常胰腺上皮细胞(hTERT-HPNE)和3株胰腺癌细胞(Capan-1、SW1990、PaTu8988)，采用实时荧光定量PCR法检测胰腺癌组织和各株细胞lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p表达。将胰腺癌Capan-1细胞分为NC组(正常对照组)、si-NC组(转染无意义阴性序列)、si-FBXL19-AS1组(转染FBXL19-AS1小干扰RNA)，miR-NC组(转染空质粒对照)、miR-339-3p组(转染miR-339-3p过表达慢病毒载体)，si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p NC组(共转染FBXL19-AS1siRNA和miR-339-3p抑制剂阴性对照序列)、si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p组(共转染FBXL19-AS1siRNA和miR-339-3p抑制剂)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性，采用Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力，采用蛋白质免疫印迹法检测细胞cyclinD1、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p的靶向关系。结果:胰腺癌组织lncRNA FBXL19-AS1表达量显著高于癌旁正常胰腺组织(2.96±0.21比1.00±0.13， P<0.05)，miR-339-3p表达量显著低于癌旁正常胰腺组织(0.37±0.05比1.00±0.11， P<0.05)。Capan-1、SW1990及PaTu8988细胞lncRNA FBXL19-AS1表达量分别为2.43±0.18、1.97±0.13和1.73±0.14，均显著高于hTERT-HPNE细胞的1.00±0.07，miR-339-3p表达量分别为0.42±0.03、0.54±0.03和0.57±0.04，均显著低于hTERT-HPNE细胞的1.00±0.05。其中以Capan-1细胞的lncRNA FBXL 19-AS1表达量最高，miR-339-3p表达量最低。与si-NC组比较，si-FBXL19-AS1组Capan-1细胞450nm处吸光度值( A450值)、迁移细胞数、穿膜细胞数显著下降[0.47±0.03比0.94±0.06、(81.00±7.41)个比(187.00±16.13)个、(67.00±5.41)个比(141.00±9.24)个]，cyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达量显著降低(0.44±0.03比0.83±0.05、0.48±0.03比0.92±0.07、0.38±0.02比0.73±0.05)。与miR-NC组比较，miR-339-3p组Capan-1细胞 A450值、迁移细胞数、穿膜细胞数显著下降[0.54±0.04比0.94±0.05、(98.00±6.53)个比(193.00±10.02)个、(83.00±6.58)个比(146.00±7.11)个]，cyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达量显著降低(0.47±0.03比0.81±0.07、0.43±0.03比0.94±0.06、0.32±0.02比0.71±0.06)。与si-FBXL19-AS1+anti-miR-NC组比较，si-FBXL19-AS1+anti-miR-339-3p组细胞 A450值、迁移细胞数、穿膜细胞数显著上升[0.96±0.07比0.48±0.03、(204.00±11.25)个比(83.00±5.11)个、(157.00±8.76)个比(64.00±4.12)个]，cyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达量显著升高(0.84±0.06比0.42±0.03、0.96±0.08比0.47±0.08、0.74±0.06比0.37±0.02)。上述差异均有统计学意义( P值均<0.05)。共转染野生型lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p mimics组Capan-1细胞的荧光素酶活性显著低于共转染野生型lncRNA FBXL19-AS1和miR-NC组(0.47±0.04比1.00±0.10)，差异有统计学意义( P<0.05)，而共转染突变型lncRNA FBXL19-AS1和miR-339-3p mimics组与共转染突变型lncRNA FBXL19-AS1和miR-NC组Capan-1细胞的荧光素酶活性差异无统计学意义。 结论:LncRNA FBXL19-AS1在胰腺癌组织及胰腺癌Capan-1细胞株中呈高表达，敲减lncRNA FBXL19-AS1可靶向结合miR-339-3p调节胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力，促进胰腺癌的发生和发展。

目的:探究LncRNA ZBED3-AS1调控miR-339-5p/Notch 1在骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化中的作用。方法:构建假手术（Sham）组和模型（Model）组大鼠模型，对大鼠的骨密度进行检查观测大鼠建模情况。分离大鼠成骨细胞，qRT-PCR检测细胞中ZBED3-AS1、miR-339-5p的表达。对Sham组和Model组大鼠成骨细胞进行分组后转染。CCK8、茜素红（AR-S）染色、碱性磷酸酶（ALP）染色检测各组细胞增殖分化能力。FISH实验测定ZBED3-AS1在细胞中的分布。双荧光素酶报告证实ZBED3-AS1与miR-339-5p及miR-339-5p和Notch 1之间的关系。Western blot检测Notch通路相关因子的表达。结果:检测股骨骨密度发现，Model组大鼠骨密度明显低于Sham组大鼠（ P=0.0 057）。与Sham组大鼠比较，Model组大鼠成骨细胞中ZBED3-AS1呈低表达，而miR-339-5p呈高表达（均 P<0.05）。过表达ZBED3-AS1能促进成骨细胞的增殖分化；而敲减ZBED3-AS1则能抑制成骨细胞增殖分化（均 P<0.05）。ZBED3-AS1作为ceRNA调控miR-339-5p（均 P<0.05）。过表达miR-339-5p能抑制成骨细胞的增殖分化能力，而该作用可被ZBED3-AS1过表达部分挽救。Notch 1被证实为miR-339-5p的作用靶点，且干预ZBED3-AS1/miR-339-5p的表达能影响Notch 1的蛋白表达，ZBED3-AS1/miR-339-5p对成骨细胞的调控可能是通过Notch通路实现的。 结论:ZBED3-AS1能作为ceRNA调控miR-339-5p，进而影响骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化。

目的 探讨血清微小RNA-183-5p(miR-183-5p)和微小RNA-339-3p(miR-339-3p)水平与急性胰腺炎(AP)患者严重程度及预后的关系.方法 收集2021年7月至2023年7月该院收治的175例AP患者作为AP组,根据急性生理学与慢性健康状况评价Ⅱ(APACHE Ⅱ)评分将AP患者分为轻症组108例和重症组67例,根据预后情况,分为预后良好组114例和预后不良组61例,另选取同期于该院体检的体检健康者160例作为对照组.采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-183-5p、miR-339-3p水平,酶联免疫吸附试验测定肿瘤坏死因子(TNF)-α、C反应蛋白(CRP)水平,Pearson相关分析 AP患者血清miR-183-5p、miR-339-3p水平与TNF-α、CRP及APACHEⅡ评分的相关性,多因素Logistic回归分析AP患者预后不良的影响因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-183-5p、miR-339-3p水平对预后不良发生的预测价值.结果 与对照组比较,AP组miR-183-5p水平升高,miR-339-3p水平降低,差异有统计学意义(t=17.497、19.113,均P＜0.05).与轻症组比较,重症组血清miR-183-5p、TNF-α、CRP、APACHE Ⅱ评分升高,miR-339-3p水平降低(t=10.582、5.972、11.991、13.864、2.224,均 P＜0.05).AP 患者血清 miR-183-5p 水平与 TNF-α,CRP,A-PACHE Ⅱ 评分呈正相关(r=0.623、0.570、0.679,均 P＜0.05);miR-339-3p 水平与 TNF-α、CRP、APACHEⅡ评分呈负相关(r=-0.655、-0.600、-0.756,均P＜0.05).预后不良组血清miR-183-5p水平高于预后良好组,miR-339-3p水平低于预后良好组,差异有统计学意义(t=5.324、5.436,均P＜0.05).TNF-α、CRP、A-PACHE Ⅱ评分、miR-183-5p是AP患者发生预后不良的独立危险因素,miR-339-3p是预后不良的保护因素(均P＜0.05).miR-183-5p、miR-339-3p水平和二者联合预测AP患者预后不良的曲线下面积分别为0.760、0.731、0.836,二者联合预测价值高于单独预测(Z=2.952、2.892,均P＜0.05).结论 AP患者血清中miR-183-5p水平升高,miR-339-3p水平降低,二者与患者病情程度和预后密切相关,可能作为AP病情和预后评估的标志物.

目的:探讨益肾化湿颗粒通过miR-339-5p靶向调控转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad通路对慢性肾小球肾炎模型大鼠的肾脏保护作用及其机制.方法:将SD大鼠分为假手术组、模型组、益肾化湿颗粒组、贝那普利组、益肾化湿颗粒+an-tagomir阴性对照(NC)组、益肾化湿颗粒+miR-339-5p antagomir组、益肾化湿颗粒+SRI-011381组.全自动生化分析仪检测大鼠24 h尿蛋白、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;qRT-PCR检测肾组织中miR-339-5p表达;免疫组化检测大鼠肾组织中核因子E2相关因子2(NRF2)、血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达;HE、Masson染色分别检测大鼠肾组织病理变化、纤维化程度;Western blot检测肾组织中TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7蛋白表达;验证miR-339-5p与TGF-β1的关系.结果:与假手术组比较,模型组大鼠肾功能异常,氧化应激增强,肾组织病理损伤及纤维化严重,炎性因子、TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达升高,miR-339-5p表达、Smad7蛋白表达降低(P＜0.05);与模型组比较,益肾化湿颗粒组、贝那普利组对应指标变化趋势与上述相反(P＜0.05);miR-339-5p antagomir或SRI-011381减弱了益肾化湿颗粒对慢性肾小球肾炎模型大鼠的肾脏保护作用.miR-339-5p靶向调控TGF-β1表达.结论:益肾化湿颗粒可能通过上调miR-339-5p靶向抑制TGF-β1/Smad通路对慢性肾小球肾炎模型大鼠肾脏发挥保护作用.

目的:探究丹皮酚(Pae)通过上调微小 RNA-339-5p(miR-339-5p)靶向高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)对神经病理性疼痛大鼠炎症反应的影响.方法:通过 L5神经结扎横切构建神经病理性疼痛大鼠模型,将 72 只 SD大鼠随机分为 6 组,假手术组(Sham)、模型组(Model)、Pae组、Pae+antagomir-NC组、Pae+miR-339-5p-antagomir组、Pae+miR-339-5p-antagomir+HMGB1 抑制剂-甘草酸(GA)组,每组 12只,给药 7d.手术前 1d及手术后 3 d、11 d,测定大鼠行为学机械痛阈值(MWT)、热缩足反射潜伏期(TWL),手术后第 12天,酶联免疫吸附法测定脊髓组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定脊髓组织中 miR-339-5p、HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测脊髓组织中HMGB1、IL-1β、TNF-α蛋白表达,双荧光素酶报告实验分析 miR-339-5p与 HMGB1 的靶向关系.结果:术前 1d,各组大鼠 MWT、TWL比较差异无统计学意义(P>0.05).与 Sham组比较,Model组大鼠术后 MWT、TWL及 miR-339-5p水平降低,IL-1β、TNF-α水平,HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白水平升高(P<0.05);与 Model组比较,Pae组大鼠术后 MWT、TWL、miR-339-5p水平升高,IL-1β、TNF-α水平及 HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白水平降低(P<0.05);与 Pae组比较,Pae+antagomir-NC组大鼠各指标差异无统计学意义(P>0.05),Pae+miR-339-5p-antagomir 组大鼠术后 MWT、TWL 及 miR-339-5p 水平降低,IL-1β、TNF-α水平,HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白水平升高(P<0.05);与 Pae+miR-339-5p-antagomir组比较,Pae+miR-339-5p-antagomir+GA组大鼠术后 MWT、TWL升高,IL-1β、TNF-α水平,HMGB1、IL-1β、TNF-α mRNA及蛋白水平降低(P<0.05);mir-339-5p与 HMGB1 存在靶向关系.结论:Pae通过上调 miR-339-5p,靶向抑制 HMGB1的表达,减轻神经病理性疼痛大鼠的炎症反应.

目的 评估微RNA(miR)-124、miR-26A和miR-126基因单核苷酸多态性(SNP)对结直肠癌(CRC)患者预后的影响.方法 以2011年7月至2013年12月该院收治的724例CRC住院患者为研究对象,利用PCR-连接酶检测反应(PCR-LDR)技术对患者外周血miR-124 rs531564、miR-26A rs7372209和miR-126 rs4636297进行SNPs位点基因型分析.患者的总生存时间(OS)和无复发生存率(PFS)采用Kaplan-Meier法计算,单变量log-rank法比较SNPs不同的基因型和单倍体型对OS和RFS的影响.结果 携带miR-124 rs531564 CG基因型的CRC患者手术治疗后3年内OS较携带CC基因型的患者缩短,3年内因肿瘤死亡风险增加[HR2=1.450,95%CI(1.043~2.017),P=0.026];携带GG基因型的患者较携带CC型的患者3年内因肿瘤死亡风险亦增加[HR2=2.339,95%CI(1.171~4.674),P=0.024];在显性基因模型中,携带CG+GG基因型的患者较携带CC基因型的患者预后3年内OS明显下降[HR2=1.532,95%CI(1.119~2.096),P=0.008];隐性基因模型中,携带GG基因型与携带CC+CG基因型患者的OS无明显差异[HR2=1.975,95%CI(1.000~3.900),P=0.052];共显性模型中,以CC+CG基因型为参照,携带CG基因型的患者OS降低,患者3年内因肿瘤死亡风险增加[HR2=1.395,95%CI(1.007~1.931)].未发现miR-26A rs7372209位点和miR-126 rs 4636297位点基因多态性与CRC术后3年内OS和RFS相关(P>0.05).结论 miR-124 rs531564位点基因多态性是CRC患者预后的独立影响因素.

背景与目的 已有的研究证明环状RNA(circular RNAs,circRNAs)在多种肿瘤发生发展中起重要作用,circUBAP2是一种促癌的circRNA,但是其在肺癌中的作用和机制尚不明确.本研究旨在探讨circular RNA UBAP2(circUBAP2)对人肺癌A549细胞体外增殖和侵袭能力的影响并初步探讨其机制.方法 应用CCK-8法检测circUBAP2表达沉默对A549细胞生长的抑制作用,采用流式细胞仪技术检测circUBAP2表达沉默对A549细胞周期和细胞失巢凋亡的影响,Transwell实验检测circUBAP2表达沉默对A549细胞侵袭能力的影响,Western blot和Real-time PCR检测CDK6、cyclin D 1、p27、c-IAP1、Bcl-2、Survivin、Bax、FAK、Rac1、MMP2的表达变化以及JNK和ERK1/2的活性,荧光素酶报告技术检测circUBAP2直接靶基因.结果 CCK-8实验结果显示circUBAP2表达沉默后,A549细胞株增殖能力受抑制;流式细胞结果显示,circUBAP2表达沉默后,细胞周期停滞在G0期/G1期,且细胞凋亡率显著增加;Transwell实验结果显示,细胞体外侵袭能力明显受到抑制.Westemblot和Real-time PCR结果显示,circUBAP2表达沉默后.CDK6、cyclin D1、c-IAP1、Bcl-2、Survivin、FAK、Rac1、MMP2等基因的表达水平显著下降,而P27和Bax的表达显著上升,而且JNK、ERK1/2的活性也受到明显的抑制,circUBAP2直接靶基因为miR-339-5p、miR-96-3p和miR-135b-3p.结论 circUBAP2在肺癌的体外增殖和侵袭中发挥重要的作用,抑制其表达,有望成为肺癌分子靶向治疗的新靶点.

目的:本研究旨在探讨微小RNA-339(miR-339)在肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖中的作用并探讨其潜在机制.方法:利用不同浓度的血管紧张素Ⅱ处理PASMCs 48 h,通过转染miR-339模拟物(miR-339mimic)和miR-339抑制物(miR-339 inhibitor)分别使miR-339过表达或低表达,利用CCK-8法和活细胞计数检测细胞的增殖能力;利用RT-qPCR检测miR-339和PCNA mRNA的表达水平;利用Western blot检测蛋白水平;萤光素酶报告试验分析证实miR-339和IGF2BP1之间的相互作用.结果:血管紧张素II浓度依赖性地增加PASMCs的增殖和PCNA的mRNA表达,并降低miR-339的表达(P<0.05).miR-339过表达抑制PASMCs增殖和PCNA mRNA表达(P<0.05),而miR-339表达下调则促进PASMCs的增殖和PCNA的mRNA表达(P<0.05).miR-339表达上调可以抑制血管紧张素II处理后的PASMCs的增殖(P<0.05).生物信息学分析以及萤光素酶报告试验检测证实胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)的3'-UTR为miR-339靶点,进一步用RT-qPCR及West-ern blot实验发现miR-339负调控PASMCs中IGF2BP1的表达(P<0.05).IGF2BP1的过表达减弱了miR-339对PASMCs增殖和PCNA mRNA表达的抑制作用(P<0.05).miR-339 mimic转染可以抑制磷酸化p38蛋白的水平(P<0.05),对p38蛋白的水平没有影响.结论:miR-339对PASMCs的增殖起抑制作用,这种抑制作用可能是部分通过调控IGF2BP1以及p38 MAPK信号通路来实现的.

目的:阐明病毒巨噬细胞炎性蛋白Ⅱ(virus macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)N末端21个氨基酸的多肽(NT21MP)对乳腺癌MCF-7细胞miRNAs表达谱的调控作用.方法:收集各组细胞抽提RNA,RNA质量评估后逆转录成cDNA.采用染料法(SYBR GreenⅠ)进行相对定量分析,实验按照2-ΔΔCt解析法进行设计.结果:总共检测了168个miRNAs,以上调>2倍或下调<0.5倍筛选.相对于S组,N组升高的有9个:miR-223、miR-451a、miR-128、miR-489、miR-141、miR-320a、miR-155-3p、miR-335、miR-320e,降低的有2个:miR-15a、miR-339.结论:筛选得到NT21MP调控miRNAs差异表达谱,其为研究miRNAs在NT21MP调控中的作用机制提供依据.

目的 分析绵羊肝脏及肺脏分离的细粒棘球蚴原头节(HPSC、LPSC)的微小RNA (miRNA)表达情况,筛选出寄生部位特异性miRNA,为后续miRNA生物信息学分析提供依据. 方法 从西宁市郊屠宰场采集带有包囊的新鲜绵羊肝脏、肺脏,经分离、过滤、沉淀获得棘球蚴原头节.用TRIzol法提取原头节总RNA,构建HPSC、LPSC小片段RNA (sRNA)文库,采用高通量测序技术进行深度测序,将测序获得的原始数据与miRBase、Pre-miRNA、RFam、Repbase等4个公共数据库进行比对,获得已知miRNA的注释信息.利用mfold软件预测未比对上任何注释信息的miRNA的二级结构.比较HPSC、LPSC中miRNA表达量的差异. 结果 HPSC和LPSC文库分别获得10 182 508条和11 133 735条有效序列,大部分序列长18～22 nt.其中22 nt的序列最多,分别占20.9％ (2128728/10182508)和24.6％(2737 570/11 133 735);19nt及21 nt次之,分别占14.0％(1 429846/10 182508)、18.5％ (1 880 607/10 182 508)和16.9％(1 875 698/11 133 735)、16.9％ (1 885 560/11 133 735).在HPSC和LPSC文库中,细粒棘球蚴原头节已知miRNA分别有87条和79条,新miRNA分别占341条和339条,与其他寄生虫(日本血吸虫、曼氏血吸虫、扁虫及三代虫等)保守的miRNA分别有58条和62条.在细粒棘球蚴原头节已知miRNA中,除egr-miR-36a-3p、egr-miR-36b-3p、egr-miR-10229a-5p、egr-miR-10233-5p、egr-miR-10240-3p、egr-miR-10243-5p、egr-mir-10252-5p、egr-mir-10287-5p等8个miRNA在HPSC中特异表达外,其余miRNA在2个文库均表达且表达量一致;在与其他寄生虫保守的miRNA中,有50条在HPSC和LPSC中均表达,有8条和12条分别在2个文库中特异表达.在新的miRNA中,在HPSC和LPSC文库特异表达的分别为78和76条.HPSC和LPSC文库共筛选出miRNA 574条,其中392条miRNA在2个文库中均表达,表达量居前10位的为egr-miR-1-5p、egr-miR-2a-3p、egr-miR-2c-3p、egr-miR-2b-3p、egr-miR-7-5p、egr-let-7-5p、egr-miR-7b-5p、egr-miR-9-5p、egr-miR-9-3p、egr-miR-10a-5p.LPSC与HPSC文库相比较,LPSC有124条miRNA上调2倍以上,30条miRNA下调0.5倍以下.在筛选出的miRNA中,HPSC和LPSC中分别有94条和88条特异表达. 结论 本研究发现HPSC及LPSC中存在特异表达miRNA.